提取和鉴定DNA教案2

DNA的粗提取与鉴定

【实验学习目标】：初步掌握DNA的粗提取和鉴定的方法。

【实验学习重点】：初步掌握DNA的粗提取和鉴定的方法。

【自主学习部分】

一、实验原理

1．DNA的溶解性：

思考题1：DNA在氯化钠溶液中的溶解度有什么特点？对此有什么应用？

思考题2：利用什么原理来将DNA与蛋白质分离开？

2．DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性：蛋白酶能水解

，但对

没有影响。大多数蛋白质不能忍受

℃的高温，而DNA在 ℃以上才会变性。 能够瓦解细胞膜，但对DNA没有影响。

3．细胞在 中易吸水而导致细胞膜和细胞核膜的破裂，据此可得到含有核DNA的溶液。

4．DNA的鉴定：

思考题3：依据什么原理来鉴定DNA？

二、实验材料：鸡血细胞液

思考题4：生活在牧区的人们，采集牛、羊和马血比较方便，他们能否选用牛、羊、马血做实验材料？为什么？

三、实验步骤：

1．制备鸡血细胞液：在鸡血中加入质量浓度为0．1g/mL的

溶液，离心处理；

2．提取鸡血细胞的细胞核物质：向鸡血细胞液中加入蒸馏水，搅拌、过滤；

思考题5：加入蒸馏水的目的是什么？为什么能达到此目的？

3．溶解细胞核内的DNA：加入2mol/L的氯化钠溶液，搅拌，使DNA呈溶解状态；

4．析出含DNA的黏稠物：加入蒸馏水，用玻璃棒搅拌；

思考题6：此时加入蒸馏水的目的是什么？

5．滤取含DNA的黏稠物：过滤；

思考题7：这次过滤与上次过滤的目的一样吗？为什么？

6．将DNA的黏稠物再溶解：加入2mol/L的氯化钠溶液，搅拌，使DNA呈溶解状态；

7．过滤含有DNA的氯化钠溶液：过滤；

思考题8：这一步骤的目的是什么？

思考题9：为什么反复地溶解与析出DNA，能够去除杂质？

8．提取含杂质较少的DNA：加入冷却的95%的酒精，搅拌；

思考题10：这一步骤的目的是什么？

思考题11：为什么加入的酒精需要冷却的？

9．DNA的鉴定：取两支试管，各加入0．015mol/L的氯化钠溶液5mL，一支加入提取的DNA，两支各加入4mL的二苯胺试剂。混合均匀后置于沸水中加热。

[来源:Z#xx#k.Com]

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思考题12：为什么要设置对照组？实验中能观察到什么现象？

四、【基础训练】

1．为了便于提取鸡血细胞中的DNA，下列所采取的措施中，最恰当的是：向经抗凝剂处理的鸡血液加入

（ ）

A．蒸馏水 B．ATP C．0.3g/mL的蔗糖溶液

D．二氧化碳

2．下列不适宜作为DNA提取的实验材料是 （ ）

A．鸡血细胞 B．蛙的红细胞 C．人的成熟红细胞 D．菜花

3．用过滤的方法得到细胞中的氯化钠溶液后，还要用酒精处理，可以得到较纯化的DNA．这是因为： （ ）

A．DNA易溶于酒精，而滤液中某些杂质不易溶于酒精

B．DNA不易溶于酒精，而滤液中某些杂质易溶于酒精

C．DNA和滤液中其他成分更易溶于酒精

D．DNA和滤液中其他成分都不溶于酒精

4．（多选）下表是关于DNA粗提取与鉴定实验中所使用的材料、操作及其作用的表述，正确的是： （ ）

A B C D 试剂

柠檬酸钠溶液蒸馏水

蒸馏水

冷却的酒精[来源:学科网][来源k.Com]操作[来源:学。科。网Z。X。X。K]

作用

防止血液凝固

保持细胞形状

析出DNA丝状物

产生特定的颜色反应

与鸡血混合

与鸡血细胞混合

加入到溶解有DNA的NaCl中

加入到过滤后DNA的NaCl中

5．在进行DNA粗提取实验时，为得到含DNA的黏稠物，某同学进行了如下操作： ①

在新鲜鸡血中加入适量的柠檬酸，经离心后，除去血浆留下血细胞备用。

②

取5―10ml血细胞放入50ml的塑料烧杯中，并立即注入20ml 0.015mol／L的氯化钠溶液，快速搅拌5分钟后经滤纸过滤，取得其滤液。

③

滤液中加入40ml 2mol／L的氯化钠溶液，并用玻璃棒沿一个方向快速搅拌1分钟。

④

上述溶液中缓缓加入蒸馏水，同时用玻璃棒沿一个方向不停地轻轻搅拌，直到溶液中出现丝状物为止，再进行过滤而得到含DNA的黏稠物。

实验结果是：所得到的含DNA的黏稠物极少，导致下一步试验无法进行。

（1）指出并改正上述实验操作中的错误：

，

，

。

(2)要进一步提取DNA时，需加入冷却的酒精，其作用是

和

。

(3)能否用牛血或牛肝代替鸡血做实验？

为什么？

6．在DNA粗提取与鉴定的实验中，选择适当浓度

的NaCl溶液就能充分溶解DNA而使杂质沉淀，

或析出DNA过滤去除溶液中的可溶性杂质。请

在右图中作出DNA在NaCl溶液中的溶解度曲线。

[来源:学。科。网]

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