课题2　土壤中分解尿素的细菌的分离与计数教学实录与评析

岳阳市第十六中学 学生自主学习案sw006主备人：郑鑫瑜 时间：20170709 审核：

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土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 学习目标一：筛选菌株

我的疑难

1、阅读教材21-26. 2、实例：DNA多聚酶链式反应（PCR）是一种在体外将少量DNA大量复制的技术，

此项技术要求使用 （93℃）的DNA聚合酶。

原因：因为热泉温度70～80℃，淘汰了绝大多数微生物只有Taq细菌被筛选出来。

启示：寻找目的菌种时要根据它对生存环境的要求，到相应的环境中去寻找。

学习目标二：实验室中微生物的筛选

1、原理：

人为提供有利于 生长的条件(包括营养、温度、pH等)，同时

其他微生物生长。

2、什么是选择性培养基？

3、土壤中分解尿素的细菌的分离与计数所需培养基：

（阅读教材22页旁栏）

（1）从物理性质看此培养基属于哪类？

（2）在此培养基中哪些物质提供碳源、氮源？

（3）培养基选择分解尿素的微生物的原理

培养基的氮源为尿素，只有能合成 的微生物才能分解尿素，

以 作为氮源。缺乏 的微生物由于不能分解尿素，

缺乏氮源而不能生长发育繁殖，而受到抑制，所以用此培养基就能够选择出

分解尿素的微生物。

【探究活动1】怎样证明此培养基具有选择性呢？

（提示：以尿素作为唯一氮源的培养基、牛肉膏蛋白胨培养基）

学习目标三：统计菌落数目的方法：

1、

显微镜直接计数

利用 ，在显微镜下计算一定容积里样品中微生物的数量。

缺点：

不能区分死菌与活菌；不适于对运动细菌的计数；

需要相对高的细菌浓度；个体小的细菌在显微镜下难以观察；

2、间接计数法（活菌计数法）

⑴原理：在稀释度足够高时，微生物在固体培养基上所形成的一个 生物学科第

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是由一个单细胞繁殖而成的，即一个 代表原先的一个单细胞。

⑵常用方法：稀释涂布平板法。

每克样品中的菌落数＝ 其中，C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用

的稀释液的体积(ml)，M代表稀释倍数。

注意：

①为了保证结果准确，一般选择菌落数在30——300的平板上进行计数。

②为使结果接近真实值可将同一稀释度加到三个或三个以上的平皿中，经涂布，

培养计算出菌落平均数。

③统计的菌落往往比活菌的实际数目低。

学习目标四：实验的具体操作 提示：请先复习无菌操作

（1）.土壤取样

从肥沃、湿润的土壤中取样。先铲去表层土3cm左右，再取样，将样品装入事先准备好的信封中。

◆取土样用的小铁铲和盛土样的的信封在使用前都要灭菌。

（2）.制备培养基：

制备以尿素为唯一 的选择培养基。

（3）.样品的稀释

◆应在 旁称取土壤10g。

◆在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在 旁进行

（4）.取样涂布

◆实验时要对培养皿作好标记，注明培养基类型、培养时间、稀释度、培养物等。

◆分离不同的微生物采用不同的稀释度(教材P24) 原因：不同微生物在土壤中含量不同

（5）微生物的培养与观察（教材P24）

（6）.结果分析与评价

1.通过对照实验，若培养物有杂菌污染，菌落数偏高；若培养物混入其他氮源，则菌落形态多样，菌落数偏高，难以选择出分解尿素的微生物。

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2.提示：选择每个平板上长有30—300个菌落的稀释倍计算每克样品的菌数最合适。同一稀释倍数的三个重复的菌落数不能相差悬殊，如相差较大，表示实验不精确。

操作提示：无菌操作、做好标记、规划时间

【课外延伸】

在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂。培养某种细菌后，如果PH升高，指示剂将变 ，说明该细菌能够分解 。

测定饮水中大肠杆菌数量的方法是将一定体积的水用细菌过滤器过滤后，将滤膜放到 培养基上培养，大肠杆菌菌落呈现 ，通过记述得出水样中大肠杆菌的数量。

检测题：

1.对细菌群体生长规律测定的正确的表述是（

）

A.在液体培养基上进行 B.至少接种一种细菌 C.接种一个细菌 D.及时补充消耗的营养物质 2.使用选择培养基的目的是（

）

A.培养细菌

B.培养真菌

C.使需要的微生物大量繁殖

D.表现某微生物的特定性状与其他微生物加以区别

3.能合成脲酶的微生物所需要的碳源和氮源分别是( ) A.CO2和N2 B.葡萄糖和NH3 C.CO2和尿素 D.葡萄糖和尿素

4．下列操作步骤正确的是（）

①土壤取样②称取10 g土壤，加入盛有90 mL无菌水的锥形瓶中③吸取0.1 mL进行平板涂布④依次稀释至1010101010稀释度

A．①②③④ B．①③②④

小结：

C．①②④③ D．①④②③

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