课题3　分解纤维素的微生物的分离课件配套优秀教案设计

课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数

【基础梳理】

1．筛选菌株

(1)实验室中微生物筛选的原理：人为提供有利于目的菌株生长的条件(包括营养、温度、pH等)，同时 抑制或阻止其他微生物生长。 (2)选择培养基：在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制和阻止其他种类微生物生长的培养基，称作选择培养基。

（3）配制选择培养基的依据

根据选择培养的菌种的生理代谢特点加入某种物质以达到选择的目的。例如，培养基中不加入有机物可以选择培养自养型微生物；培养基中不加入氮元素，可以选择培养固氮的微生物；加入高浓度的食盐可选择培养金黄色葡萄球菌；加入青霉素可以分离出酵母菌和霉菌等。

2．统计菌落数目

（1）测定微生物数量的常用方法有显微镜直接计数法和活菌计数法。

（2）稀释涂布平板法统计样品中活菌的数目的原理

当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个细菌。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。为了保证结果准确，一般选择菌落数在30—300的平板进行计数，最好统计该种平板至少3个，计算出平板菌落数的平均值，然后按照公式(C÷V)×M计算该类样品中的菌落数。这种方法统计的菌落数往往比活菌的实际数目低，因此统计结果一般用菌落数来表示。

3．设置对照

设置对照的主要目的是排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度。例如为了排除培养基是否被杂菌污染了，需以培养未接种的培养基作为空白对照。

二、实验设计

关于土壤中分解尿素的细菌的分离与计数实验操作步骤如下：

1．土壤取样：从肥沃、湿润的土壤中取样。应先铲去表层土3 cm左右，再取样，将样品装入事先准备好的信封中。

2．制备培养基：准备牛肉膏蛋白胨培养基和选择培养基

将菌液稀释相同的倍数，在牛肉膏蛋白胨培养基上生长的菌落数目应明显多于选择培养基上的数目，因此，牛肉膏蛋白胨培养基可以作为完全对照，用来判断选择培养基是否起到了选择作用。

3．微生物的培养与观察

将10g土样加入盛有90 mL无菌水的锥形瓶中，充分摇匀，吸取上清液1mL，转移至盛有9 1274mL的无菌水的试管中，将土样以10、10……

依次等比稀释至10稀释度，并按照由10～610稀释度的顺序分别吸取

0.1 mL进行涂布平板操作。每个稀释度下需要3个选择培养基、1个牛肉膏蛋白胨培养基。

将涂布好的培养皿放在30℃下培养，及时观察和记录。挑选选择培养基中不同形态的菌落接入含尿素培养基的斜面中，观察能否产生如教材中图2-lO的颜色反应。

4．细菌的计数

当菌落数目稳定时，选取平板进行计数，并根据平板所对应的稀释度计算出样品中细菌的数目。

【典例分析】

类型一

选择培养基的配制

【例1】分析下面培养基的配方：KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4·7H20、葡萄糖、尿素、琼脂。请

回答：

(1)在该培养基的配方中，为微生物的生长提供碳源和氮源的分别是葡萄糖和尿素。

(2)想一想这种培养基对微生物是否具有选择作用?如果具有，又是如何进行选择的? 有选择作用。因为此配方中尿素是唯一氮源，因此，只有能够利用尿素的微生物才能够生长。

类型二

统计菌落数目

6【例2】用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数，在对应稀释倍数为10的培养基中得到以下几种统计结果，正确的是…( D ) A．涂布了一个平板，统计的菌落数是230 B．涂布了两个平板，统计的菌落数是215和260，取平均值238 C．涂布了三个平板，统计的菌落数分别是21、212和26，取平均值163 D．涂布了三个平板，统计的菌落数分别是2l0、240和250，取平均值233

类型三

设置对照

【例3】用来判断选择培养基是否起到了选择作用需要设置的对照是 ( C ) A．未接种的选择培养基

B．未接种的牛肉膏蛋白胨(全营养)培养基

C．接种了的牛肉膏蛋白胨(全营养)培养基

D．接种了的选择培养基

【拓展提升应用】

一、选择题

1．PCR技术要求使用耐高温的DNA聚合酶，这种酶要能忍受93℃左右的高温。如果请你来寻找这种耐高温的酶，你会去哪里寻找………( C ) A．土壤中 B．海水中 C．热泉中 D．冷库中

2．下列能选择出分解尿素的细菌的培养基是………………( A ) A．KH2PO4、Na2HP04、MgS04·7H20、葡萄糖、尿素、琼脂、水

B．KH2PO4、Na2HP04、MgS04·7H20、葡萄糖、琼脂、水

C．KH2PO4、Na2HP04、MgS04·7H20、尿素、琼脂、水

D．KH2PO4、Na2HP04、MgS04·7H20、牛肉膏、蛋白胨、琼脂、水； 63.某同学在稀释倍数为10的培养基中测得平板上菌落数的平均值为234，那么每克样品中的菌落数是(涂布平板时所用稀释液的体积为0.1mL)…( B ) 89A．2.34×10 B．2.34×10 C．234 D．23.4 64.在做分离分解尿素的细菌实验时，A同学从对应10培养基上筛选出大约150个菌落，而其他同学只选择出大约50个菌落。A同学的结果产生原因( A ) ①由于土样不同 ②由于培养基污染 ③由于操作失误 ④没有设置对照

A．①②③ B．②③④ C．①③④ D．①②④

5.关于土壤取样的叙述错误的是………( C ) A．土壤取样，应选取肥沃、湿润的土壤 B．先铲去表层土3cm左右，再取样

C．取样用的小铁铲和信封在使用前不用灭菌 D．应在火焰旁称取土壤

6.下列关于从土壤中分离细菌的操作步骤中，正确的是…………( C ) ①土壤取样 ②称取10g土壤取出加入盛有90mL无菌水的锥形瓶中 ③吸取0.1mL进行1234567平板涂布

④依次稀释至10、10、10、10、10、10、10稀释度

A．①→②→③→④

B．①→③→②→④

C．①→②→④→③

D．①→④→②→③

7.下列关于测定土壤中细菌数量的叙述，正确的是………( B ) 37 A．一般选用10～10倍的稀液分别涂布

3 45 B．测定放线菌的数量，一般选用10、lO和10倍稀释

345 C．测定真菌的数量，一般选用10、10和10倍稀释

17 D．当第一次测量某种细菌的数量，可以将10～10倍的稀释液分别涂布到平板上培养

8.下列关于微生物的培养叙述错误的是( D ) A．细菌一般在30～37℃的温度下培养1～2 d B．放线菌一般在25～28℃的温度下培养5～7 d C．霉菌一般在25～28℃的温度下培养3～4 d D．不同种类的微生物，一般需要相同的培养温度和培养时间

9.下列操作需要在火焰旁进行的一组是( D ) ①土壤取样

②称取土壤 ③稀释土壤溶液 ④涂布平板

⑤微生物的培养

A．①②③④⑤ B．②③④⑤④⑤ C．③④⑤ D．②③④

10.下列可以鉴定出分解尿素的细菌的方法是 …………( A ) A．以尿素为唯一氮源的培养基中加人酚红指示剂

B．以尿素为唯一氮源的培养基中加入二苯胺试剂

C．以尿素为唯一氮源的培养基中加入苏丹Ⅲ试剂

D．以尿素为唯一氮源的培养基中加入双缩脲试剂

11.土壤取样时最好选择哪种环境中的土壤做分离细菌的实验……( D ) A．街道旁 B．花盆中 C．农田中 D．菜园里

二、非选择题

12.统计菌落数目一般用稀释涂布平板法，当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。计数时一般选择菌落数在30—300的平板计数。

613.在做本课题实验时，一位同学在稀释倍数为10的培养基中涂布了3个平板，统计的菌落数分别为21、212和256，该同学以这3个平板上菌落数的平均值163作为统计结果。你认为这一结果是否接近真实值?如果需要改进，如何改进? 不接近真实值，需要重新实验