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课题2　土壤中分解尿素的细菌的分离与计数优秀课堂实录｜教案在线预览

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正文

课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数

一、课题目标

研究培养基对微生物的选择作用，进行微生物数量的测定

二、课题重点与难点

课题重点：对土样的选取和选择培养基的配制

课题难点：对分解尿素的细菌的计数

三、本课题知识体系

（一）土壤取样

1、从土壤取样的原因（P23-24页资料一）

2、（1）实验室中微生物筛选的原理：人为提供有利于目的菌生长的调件（包括营养、温度、PH等），同时抑制或阻止其他微生物生长。

（2）实例分析：耐高温的Taq DNA聚合酶的获得

3、（1）选择培养基：允许特定种类的微生物的生长，同时抑制或阻止其他种类微生物的培养基

（2）分析能分解尿素的培养基配方（物质组成、为什么具有选择作用）

（二）、配制培养基

1、配制培养基的步骤：计算→称量→溶化→（调PH)→灭菌→倒平板

2、所制备的培养基的类型（牛肉膏蛋白胨培养基和选择培养基）

3、配制培养基过程中的无菌操作及培养基的灭菌方方法

（三）、样品的稀释

1、进行样品稀释的原因

2、不同微生物选择不同的稀释倍数

（四）接种

1、接种的方法：稀释涂布平板法（涉及计数数菌落）

2、设置对照

（1）目的：排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度

（2）类型：

空白对照：看培养基是否被杂菌污染

相互对照：本实验中用来涂布的土壤稀释样液，选择三种稀释倍数的样液进行涂布，每个稀释度下需要3个选择培养基，1个牛肉膏蛋白胨培养基。在相同的稀释倍数下，在牛肉膏蛋白胨培养基上的菌落数应明显多于选择培养基上的数目，因此，牛肉膏蛋白胨培养基可以作为对照，用来判断选择培养基是否起到了选择作用。该实验需涂布的培养基12个（3个牛肉膏蛋白胨培养基和9个选择培养基）

（五）、微生物的培养与观察

1、不同微生物需要控制的温度和培养时间

2、每隔24h统计一次菌落数目，选择菌落数目稳定时的记录作为结果的原因：防止因培养时间不足而导致遗漏菌落的数目

3、观察：同种微生物表现出稳定的菌落特征，不同种的微生物菌落特征不同，这些特征包括：菌落的形态、大小、隆起程度和颜色等

（六）、细菌的计数

1、计数的方法

（1）、稀释涂布平板法（活菌计数法）：通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。一般选择菌落数在30-300的平板进行计数。

计算公式：每克样品中的菌株数=（C÷V）×M 缺点：统计的菌落数往往比活菌的实际数目低的原因：两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落，导致计数结果比实际值偏小

（2）显微镜直接计数法

利用特定细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下计算一定容积的样品中微生物的数量

计算公式：每小格平均细菌数×400×10000×稀释倍数

缺点：不能区分细胞死活，导致计数结果比实际值偏大

（七）菌种的鉴定

1、鉴别培养基：加入了指示剂酚红

2、鉴定原理：细菌合成的脲酶将尿素分解成了氨，氨会使培养基的碱性增强，指示剂将变红

3、知识延伸：如何鉴定饮用水中含大肠杆菌（伊红美蓝培养基）

资料摘要

课题2　土壤中分解尿素的细菌的分离与计数优秀课堂实录