附录4　常用的消毒灭菌操作方法教学设计(教案)

生物必修1实验总结

实验一

物质鉴定

还原糖

+ 斐林试剂

砖红色沉淀；

脂肪

+ 苏丹III 橘黄色

；

脂

肪

+ 苏丹IV 红色；

蛋白质

+ 双缩脲试剂

紫色反应。

1、

还原糖的检测

（1）材料的选取：还原糖含量高，白色或近于白色，如苹果，梨，白萝卜。

（2）试剂：斐林试剂（甲液：0.1g/mL的NaOH溶液，乙液：0.05g/mL的CuSO4溶液），现配现用。

（3）步骤：取样液2mL于试管中→加入刚配的斐林试剂1mL（斐林试剂甲液和乙液等量混合均匀后再加入）→水浴加热2min左右→观察颜色变化（白色→浅蓝色→砖红色）

脂肪的检测

（1）材料的选取：含脂肪量越高的组织越好，如花生的子叶。

（2）步骤：

制作切片（切片越薄越好）将最薄的花生切片放在载玻片中央

→

染色（滴苏丹Ⅲ染液2～3滴切片上

→

2～3min后吸去染液

→

滴体积分数50%的酒精洗去浮色

→

吸去多余的酒精）

→

制作装片（滴1～2滴清水于材料切片上→盖上盖玻片）→

镜检鉴定（显微镜对光→低倍镜观察→高倍镜观察染成橘黄色的脂肪颗粒）

蛋白质的检测

（1）试剂：双缩脲试剂（A液：0.1g/mL的NaOH溶液，B液：0.01g/mL的CuSO4溶液）（2）步骤：试管中加样液2mL→加双缩脲试剂A液1mL，摇匀→加双缩尿试剂B液4滴，摇匀→观察颜色变化(紫色)

2、

考点提示：

（1）

常见还原性糖与非还原性糖有哪些？

葡萄糖、果糖、麦芽糖、乳糖和半乳糖

（2）

还原性糖植物组织取材条件？

含糖量较高、颜色为白色或近于白色，如：苹果、梨、白色甘蓝叶、白萝卜等。

（3）

研磨中为何要加石英砂？不加石英砂对实验有何影响？

加石英砂是为了使研磨更充分。不加石英砂会使组织样液中还原性糖减少，使鉴定时溶液颜色变化不明显。

（4）

斐林试剂甲、乙两液的使用方法？混合的目的？为何要现混现用？

混合后使用；产生氢氧化铜；氢氧化铜不稳定。

（5）还原性糖中加入斐林试剂后，溶液颜色变化的顺序为？

浅蓝色

棕色

砖红色

（6）花生种子切片为何要薄？

只有很薄的切片，才能透光，而用于显微镜的观察。

（7）转动细准焦螺旋时，若花生切片的细胞总有一部分清晰，另一部分模糊，其原因一般是什么？

切片的厚薄不均匀。

（8）脂肪鉴定中酒精作用？

洗去浮色。

（9）双缩脲试剂A、B两液是否混合后用？先加A液的目的怎样通过对比看颜色变化？

不能混合；先加A液的目的是使溶液呈碱性；先留出一些大豆组织样液做对比。

实验二

观察DNA和RNA在细胞中的分布

1.实验原理：DNA 绿色，RNA 红色

2.分布：真核生物DNA主要分布在细胞核中，线粒体和叶绿体内也含有少量的DNA；RNA主要分布在细胞质中。

3.步骤：制片

→

解离

→

冲洗

→

染色

→

观察

4.实验结果: 细胞核呈绿色,细胞质呈红色. 实验三

制备细胞膜

1.原理：哺乳动物的红细胞膜在分离状态下。一般称为”血影”，其没有通常真核生物细胞内所含有的任何细胞器，经过制备，容易得到纯粹的细胞膜，并且在取材方面来源方便，因此哺乳动物的红细胞膜是研究细胞膜的好材料。

2.步骤：

第一步，将血液取放在加有抗凝剂的容器内，用低速离心的方法从血液中分离出红细胞，然后用等渗缓冲液重复洗涤多次，去除血浆。

第二步，将洗净的红细胞从等渗缓冲液转移到低渗缓冲液中，由于渗透压力作用于细胞质膜，使红细胞膨胀而溶血。

最后一步，将溶血的红细胞经过充分反复洗涤．高速离心，去除血红蛋白和其他细胞内含物。这样制备所获得的最终产品几乎全是红细胞膜。

实验四

用高倍显微镜观察叶绿体和线粒体

1、材料：新鲜藓类叶、黑藻叶或菠菜叶，口腔上皮细胞临时装片

2、原理：叶绿体在显微镜下观察，绿色,球形或椭球形。

用健那绿染液染色后的口腔上皮细胞中线粒体成蓝绿色,细胞质接近无色。

知识概要：

低倍观察

高倍观察

考点提示：

（1）为什么可直接取用藓类的小叶，而不能直接取用菠菜叶？

因为藓类的小叶很薄，只有一层细胞组成，而菠菜叶由很多层细胞构成。

（2）取用菠菜叶的下表皮时，为何要稍带些叶肉？

表皮细胞除保卫细胞外，一般不含叶绿体，而叶肉细胞含较多的叶绿体。

实验五

观察质壁分离和复原

1、条件：细胞内外溶液浓度差，活细胞，大液泡

2、材料：紫色洋葱鳞片叶外表皮细胞（具紫色大液泡），质量浓度0.3g/mL的蔗糖溶液，清水等。

3、步骤：制作洋葱鳞片叶外表皮细胞临时装片→观察→盖玻片一侧滴蔗糖溶液,另一侧用吸水纸吸引→观察(液泡由大到小,颜色由浅变深,原生质层与细胞壁分离)→盖玻片一侧滴清水, 另一侧用吸水纸吸引→观察(质壁分离复原)

4、结论: 细胞外溶液浓度

＞

细胞内溶液浓度，细胞失水

质壁分离

细胞外溶液浓度

＜

细胞内溶液浓度，细胞吸水

质壁分离复原

知识概要：制片

观察

加液

观察

加水

观察

考点提示：

（1）洋葱为何要选紫色的？若紫色过淡怎么办？

紫色的洋葱有紫色的大液泡，便于观察液泡的大小变化；让阳光照射。

（2）植物细胞为何会出现质壁分离？

动物细胞会吗？

当细胞失去水分时，其原生质层的伸缩性大于细胞壁的伸缩性；动物细胞不会发生质壁分离，因为动物细胞没有细胞壁。

（3）质壁分离时，液泡大小和颜色的变化？复原时呢？

细胞发生质壁分离时，液泡变小，紫色加深；当细胞质壁分离复原时，液泡变大，紫色变浅。

（4）若发生质壁分离后的细胞，不能发生质壁分离复原，其原因是什么？

细胞已经死亡（可能是外界溶液浓度过大，细胞失水过多或质壁分离时间过长）

（5）高倍镜使用前，装片如何移动？

若要把视野中上方的物像移到视野的正中心，则要将装片继续向上移动。若要把视

野中左方的物像移到视野的正中心，则要将装片继续向左方移动，因为显微镜视野

中看到的是倒像。

（6）换高倍物镜后，怎样使物像清晰？视野明暗度会怎样变化？如何调亮？

换高倍物镜后，应调节细准焦螺旋使物像变得清晰；视野会变暗，可调大光圈或改用反光镜的凹面镜来使视野变亮。

（7）所用目镜、物镜的长度与放大倍数的关系？

目镜越长，放大倍数越小；物镜越长，放大倍数越大。

（8）物像清晰后，物镜与载玻片之间的距离和放大倍数的关系？

物镜与载玻片之间的距离越小，放大倍数越大。

（9）总放大倍数的计算方法？放大倍数具体指面积的放大倍数还是长度的放大倍数？

总放大倍数等于目镜放大倍数与物镜放大倍数的乘积；放大倍数是指细小物体长度或宽度的放大倍数。

（10）放大倍数与视野中细胞大小、多少、视野明暗的关系？

放大倍数越大，视野中细胞越大、数目越少、视野越暗。

（11）更换目镜，若异物消失，则异物在目镜上；更换物镜，若异物消失，则异物在物镜上、移动载玻片，若异物移动，则异物在载玻片上。

（12）怎样利用质壁分离现象来测定植物细胞液的浓度？

①配制一系列浓度从小到大的蔗糖溶液

②分别用以上不同浓度的溶液制成某植物细胞的临时装片

③用显微镜观察某植物细胞是否发生质壁分离。

某植物细胞液的浓度就介于不能引起质壁分离的浓度和能引起质壁分离的浓度之间。

实验六

比较过氧化氢在不同条件下的分解

考点提示：

（1）为何要选新鲜的肝脏？

因为在不新鲜的肝脏中，过氧化氢酶的活性会由于细菌的破坏而降低。

（2）为何要选动物的肝脏组织来做实验，其他动植物的组织的研磨液能替代吗？

因为肝脏组织中过氧化氢酶含量较丰富；其它动植物组织也含有少量的过氧化氢酶，所以能够替代。

实验七

绿叶中色素的提取和分离

1.原理：叶绿体中的色素能溶解在有机溶剂丙酮或无水乙醇——提取色素

各色素在层析液中的溶解度不同,随层析液在滤纸上扩散速度不同——分离色素

2、步骤：

（1）提取色素

研磨

（2）制备滤纸条

（3）画滤液细线：均匀，直，细，重复若干次

（4）分离色素：不能让滤液细线触及层析液

（5）观察和记录:

结果滤纸条上从上到下依次为:橙黄色(胡萝卜素)、黄色(叶黄素)、蓝绿色(叶绿素a)、黄绿色(叶绿素b). 考点提示：

（1）对叶片的要求？为何要去掉叶柄和粗的时脉？

绿色、最好是深绿色。因为叶柄和叶脉中所含色素很少。

（2）二氧化硅的作用？不加二氧化硅对实验有何影响？

为了使研磨充分。不加二氧化硅，会使滤液和色素带的颜色变浅。

（3）碳酸钙的作用？不加碳酸钙对实验有何影响？

保护色素，防止在研磨时叶绿体中的色素受到破坏。不加碳酸钙，滤液会变成黄绿色或褐色。

（4）丙酮的作用？它可用什么来替代？用水能替代吗？

溶解色素。它可用酒精等有机溶剂来代替，但不能用水来代替，因为色素不溶于水。

（5）研磨为何要迅速？要充分？过滤时为何用布不用滤纸？

研磨迅速，是为了防止丙酮大量挥发；只有充分研磨，才能使大量色素溶解到丙酮中来。色素不能通过滤纸，但能通过尼龙布。

（6）滤纸条为何要剪去两角？

防止两侧层析液扩散过快。

（7）为何不能用钢笔或圆珠笔画线？

因为钢笔水或圆珠笔油中含有其它色素，会影响色素的分离结果。

（8）滤液细线为何要直？为何要重画几次？

防止色素带的重叠；增加色素量，使色素带的颜色更深一些。

（9）滤液细线为何不能触到层析液？

防止色素溶解到层析液中。

（10）滤纸条上色素为何会分离？

由于不同的色素在层析液中的溶解度不同，因而它们随层析液在滤纸条上的扩散速度就不同。

（11）色素带最宽的是什么色素？它在层析液中的溶解度比什么色素大一些？

最宽的色素带是叶绿素a，它的溶解度比叶绿素b大一些。

（12）滤纸条上相互间距最大的是哪两种色素？

胡萝卜素和叶黄素。

（13)色素带最窄的是第几条色素带？为何？

第一条色素带，因为胡萝卜素在叶绿体的四种色素中含量最少。

实验八

观察根尖分生组织细胞的有丝分裂

1、材料：洋葱根尖（葱，蒜）

2、步骤：

（一）洋葱根尖的培养

（二）装片的制作

制作流程：解离→漂洗→染色→制片

1. 解离: 药液: 质量分数为15%的盐酸,体积分数为95%的酒精(1 : 1混合液). 时间: 3~5min .目的: 使组织中的细胞相互分离开来.

2. 漂洗: 用清水漂洗约3min. 目的: 洗去药液,防止解离过度,并有利于染色.

3. 染色: 用质量浓度为0.01g / mL或0.02g / mL的龙胆紫溶液(或醋酸洋红液)染色3~ 5min 目的: 使染色体着色,利于观察.

4. 制片: 将根尖放在载玻片上,加一滴清水,并用镊子把根尖弄碎,盖上盖玻片,在盖玻片上再加一片载玻片. 然后用拇指轻轻地按压载玻片. 目的: 使细胞分散开来,有利于观察.

（三）观察

1、先在低倍镜下找到根尖分生区细胞：细胞呈正方形，排列紧密,有的细胞正在分裂。

2、换高倍镜下观察：分裂中期→分裂前、后、末期→分裂间期。（注意各时期细胞内染色体形态和分布的特点）。其中，处于分裂间期的细胞数目最多。

考点提示：

（1)培养根尖时，为何要经常换水？

增加水中的氧气，防止根进行无氧呼吸造成根的腐烂。

（2）培养根尖时，应选用老洋葱还是新洋葱？为什么？

应选用旧洋葱，因为新洋葱尚在休眠，不易生根。

（3）为何每条根只能用根尖？取根尖的最佳时间是何时？为何？

因为根尖分生区的细胞能进行有丝分裂；上午10时到下午2时；因为此时细胞分裂活跃。

（4）解离和压片的目的分别是什么？压片时为何要再加一块载玻片？

解离是为了使细胞相互分离开来，压片是为了使细胞相互分散开来；再加一块载玻片是为了受力均匀，防止盖玻片被压破。

（5）若所观察的组织细胞大多是破碎而不完整的，其原因是什么？

压片时用力过大。

（6）解离过程中盐酸的作用是什么？丙酮可代替吗？

分解和溶解细胞间质；不能，用硝酸可代替。

（7）为何要漂洗？

洗去盐酸便于染色。

（8）细胞中染色最深的结构是什么？

染色最深的结构是染色质或染色体。

（9）若所观察的细胞各部分全是紫色，其原因是什么？

染液浓度过大或染色时间过长。

（10）为何要找分生区？分生区的特点是什么？用高倍物镜找分生区吗？为什么？

因为在根尖只有分生区的细胞能够进行细胞分裂；分生区的特点是：细胞呈正方形，排列紧密，有的细胞处于分裂状态；不能用高倍镜找分生区，因为高倍镜所观察的实际范围很小，难以发现分生区。

（11）分生区细胞中，什么时期的细胞最多？为什么？

间期；因为在细胞周期中，间期时间最长。

（12）所观察的细胞能从中期变化到后期吗？为什么？

不能，因为所观察的细胞都是停留在某一时期的死细胞。

（13）观察洋葱表皮细胞能否看到染色体？为什么？

不能，因为洋葱表皮细胞一般不分裂。

（14）若观察时不能看到染色体，其原因是什么？

没有找到分生区细胞；没有找到处于分裂期的细胞；染液过稀；染色时间过短。