课题2　土壤中分解尿素的细菌的分离与计数特级教师教学实录

土壤中分解尿素的细菌的分离与计数教学设计

一、【课题目标】

（一）知识与技能

利用选择培养基筛选分解尿素的细菌，并学习两种方法统计菌落数目；

（二）过程与方法

分析实验的设置过程，设置对照实验；

（三）情感、态度与价值观

形成无菌不在的概念，养成讲究卫生的习惯

二、【课题重点】

对土样的选取和统菌落数目的方法

三、【课题难点】

对分解尿素的细菌的计数

四、【教学方法】

启发式教学

五、【教学工具】

多媒体课件

六、【教学过程】

（一）引入新课

上节课我们学习了培养基的配置以及接种技术。下面我们来学习如何进行细菌的分离，获得所需要的目的微生物。

（二）进行新课

1 首先介绍尿素的相关背景，抛出问题如何成功筛选出能分解尿素的细菌呢？以小组为单位，进行讨论，设计出合理的培养基配方。

2 对知识进行补充，结合考点内容对培养基进行分类，包括从物理性质和功能角度进行划分。

3 介绍两种统计菌落数目的方法：间接计数法（活菌计数法）与显微镜直接计数法（稀释涂布平板法），并对两种方法的优缺点进行比较。

4

介绍具体的实验流程：

配制土壤溶液

菌落计数

系列稀释

涂布平板与培养

4.1 土壤微生物主要分布在距地表3～8cm的近中性土壤中，约70％～80％为细菌。

4.2 分离不同的微生物采用不同的稀释度，其原因是不同微生物在土壤中含量不同，其目的是保证获得菌落数在30～300之间、适于计数的平板。细菌稀释度为104、105、106，放线菌稀释度为103、104、105，真菌稀释度为102、103、104。

4.3 培养不同微生物往往需要不同培养温度。细菌一般在30～37℃培养1～2d，放线菌一般在25～28℃培养5～7d，霉菌一般在25～28℃的温度下培养3～4d。

4.4 在菌落计数时，每隔24h统计一次菌落数目。选取菌落数目稳定时的记录作为结果，以防止因培养时间不足而导致遗漏菌落的数目。

点评：菌种中有些菌体增殖快，有些菌体增值慢，所以培养时间要充足，使得每个菌体都能形成肉眼可观察到的菌落。

4.5 菌落的特征包括

形状、大小、隆起程度、颜色

等方面。

〖思考8〗土壤微生物种类最多、数量最大的原因是什么？土壤中营养物质含量丰富，环境条件适宜

1

等。

4.6

实验过程

1）取土样用的小铁铲和盛土样的的信封在使用前都要灭菌。

2）应在火焰旁称取土壤

10 g。将称好的土样倒入盛有90mL无菌水的锥形瓶中，塞好棉塞。

3）在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在火焰旁进行。

4）实验时要对培养皿作好标记。注明培养基类型、培养时间、稀释度、培养物等。

5）为了提高效率，在操作时更加有条不紊，应当事先规划时间。

〖思考9〗在研究未知微生物时务必规范操作，以防被致病微生物感染，实验后一定要洗手。

（三）课外延申

1 在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂，指示剂将变红，说明该细菌能够分解尿素。

2 测定饮水中大肠杆菌数量的方法是将一定体积的水用细菌过滤器过滤后，将滤膜放到

伊红-美蓝

培养基上培养，大肠杆菌菌落呈现黑色，通过记算得出水样中大肠杆菌的数量。

（四）课堂知识小结

（五）课堂习题演练

1.对细菌群体生长规律测定的正确的表述是（

A

）

A.在液体培养基上进行

B.至少接种一种细菌

C.接种一个细菌

D.及时补充消耗的营养物质

2.使用选择培养基的目的是（

C

）

A.培养细菌

B.培养真菌

C.使需要的微生物大量繁殖

D.表现某微生物的特定性状与其他微生物加以区别

3.能合成脲酶的微生物所需要的碳源和氮源分别是(

D

)

A.CO2和N2

B.葡萄糖和NH3

C.CO2和尿素

D.葡萄糖和尿素

4.下列说法不正确的是（

B

）

A.科学家从70－80度热泉中分离到耐高温的TaqDNA聚合酶

B.统计某一稀释度的5个平板的菌落数依次为M1、M2、M3、M4、M5，以M3作为该样品菌落数的估计值

C.设置对照实验的主要目的是排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度

D.同其他生物环境相比，土壤中的微生物数量最大，种类最多。

5.为培养和分离出酵母菌并淘汰杂菌，常在培养基中加入（

C

）

A.较多的氮源物质

B.较多的碳源物质

C.青霉素类药物

D.高浓度食盐

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