课题2　土壤中分解尿素的细菌的分离与计数优质教案设计

选修1专题2课题1微生物的实验室培养教案

一、课题目标

1.知识目标

a.了解有关培养基的基础知识。

b.了解消毒和灭菌方法。

2.能力目标

a.进行无菌技术操作。

b.进行微生物培养。

3.情感目标

形成勇于实践、严谨求实的科学态度和科学精神。

二、课题重点

无菌技术操作。

三、课题难点

无菌技术操作。

四

教学流程

教学流程

环节一：课程导入

材料：生物学的发展史表明，诸多革命性改变人类对生命认识的事件，都与微

生物有着千丝万缕的联系。例如，肺炎双球菌转化实验证明DNA是遗传物质，青霉素的发现，第一个在和DNA分子的体外构建等。

微生物包括五类：

病毒、细菌、放线菌、真菌、野生动物。

2.课题导入：讲解课题背景和课堂目标。

课题背景： 19世纪中期，关系到法国经济命脉的酿造业曾一度遭受毁灭性打击。

在生产过程中，出现了葡萄酒变酸、变味的怪事。

经过一番研究，法国科学家巴期德发现，导致生产失败的根源在于

发酵物混入杂菌。由此人们认识到保持培养物纯净的重要性。 防止杂菌入侵，获得纯净的培养物，是研究和应用微生物的前提。在实验室培1.专题导入：提供章页图材料和微生物相关图片，讲解微生物与人类的密切关系，导入本专题。

教师活动

学生活动

阅读、倾听。

设计意图

情景导入本章和本节目标。

养微生物，一方面需要为培养的微生物提供合适的营养和环境条件，另一方面需要确保其他微生物无法混入。在本课题，我们将通过培养大肠杆菌实验，学习微生物培养的基本技术。

课题目标：

a.了解有关培养基的基础知识； b.进行无菌技术的操作； c.进行微生物的培养。

一、基础知识

（一）培养基

1.概念：讲解培养基概念：由人工方法配制而成的，专供微生物生长繁殖使用的混合营养基质。

2.种类

展示培养基相关图片，讲解根据物理性质划分的培养基种类、用途。

3.成分

（1）基本成分

展示 1000mL牛肉膏蛋白胨培养基的营养构成表格，让学生分析回答问题。

培养基成分

牛肉膏5g 蛋白胨10g NaCl 5g H2O定容至1000ml 问题1：培养基包括哪些基本成分？

水、碳源、氮源、无机盐

提供的主要营养物质

碳源、磷酸盐和维生素

氮源和维生素

无机盐

氢元素、氮元素

分析、关知识。

阅读、了解培倾听。

养基相回答。

问题2：从细胞的化学元素组成来看，培养基中为什么都含有这些营养成分？

归纳、C、H、O、N、P、S是构成细胞原生质的基本元素，约占原生质总量的97％以上。

【小结】共同归纳培养基的基本成分和主要来源。

营养物质

含义

主要来源

无机物：CO2、NaHCO3；有机物：糖类、脂肪酸、石油、花生粉饼等

回答。

碳源

能提供碳元素的物质

氮源

能提供氮元素的物质

细胞生命活动必不可少的物质

提供除碳、氮元素以外的各种重要元素，包括某些大量元素

无机物：N2、NH3、氨盐、硝酸盐；

有机物：尿素、牛肉膏、蛋白胨等

培养基、大气、代谢产物

倾听、

水

无机盐

培养基、大气

阅读、思考、（2）特殊成分和条件

提醒学生培养基还需要满足不同微生物生长对PH、氧气、特殊营养物质的要求：回答。

如乳酸杆菌时需要添加维生素

，霉菌需要将培养基pH调节为酸性

，细菌时需要将pH调节为中性或微碱性

。

（二）无菌技术

讲解：无菌操作泛指在培养微生物的操作中，所有防止杂菌污染的方法。

强调无菌操作是培养微生物成功的关键。

1.主要方面

讲解无菌技术主要方面：

（1）对实验操作空间、操作者的衣着和手进行

清洁和消毒

；

（2）将培养器皿、接种用具和培养基等器具进行

灭菌

；

（3）为避免周围微生物污染，实验操作应在

酒精灯火焰附近

旁进行；

（4）避免已灭菌处理的材料用具与

周围物品相接触。

2.消毒与灭菌的比较

列表让学生进行比较。

项目

理化因素强度

消灭微生物数量

是否消灭芽孢和孢子

消毒

温和

灭菌

强烈

部分

全部

否

是

阅读、归纳、

比较、法。

了解消毒和灭菌方回答。

回答。

3.常用的消毒与灭菌的方法

让学生阅读教材“实验室常用的消毒和灭菌方法”材料，共同归纳常用的消毒与灭菌的方法，回答问题。

（1）消毒方法：

①日常生活经常用到的是煮沸消毒法；

②对一些不耐高温的液体，则使用巴氏消毒法（作简要介绍）；

③对接种室、接种箱或超净工作台首先喷洒石炭酸或煤酚皂

等溶液以增强消毒效果，然后使用紫外线进行物理消毒。

④实验操作者的双手使用酒精进行消毒；

⑤饮水水源用氯气进行消毒。

（2）灭菌方法：

①接种环、接种针、试管口等使用灼烧灭菌法；

②玻璃器皿、金属用具等使用干热灭菌法，所用器械是干热灭菌箱

；

演练、

回答。

进行无菌技术操作。

③培养基、无菌水等使用

高压蒸汽灭菌法，所用器械是

高压蒸汽灭菌锅

。

④表面灭菌和空气灭菌等使用紫外线灭菌法，所用器械是紫外灯。

问题1.无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么目的？

还能有效避免操作者自身被微生物感染。 问题2.请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。如果需要，请选择合适

的方法。（1）

培养细菌用的培养基与培养皿；（2）

玻棒、试管、烧瓶和吸管；

（3）

实验操作者的双手

（1）、（2）需要灭菌；（3）需要消毒。 【典型例题】 (2015·江苏)做“微生物的分离与培养”实验时，下列叙述正确的是(

) A.高压灭菌加热结束时，打开放气阀使压力表指针回到零后，开启锅盖 B.倒平板时，应将打开的皿盖放到一边，以免培养基溅到皿盖上

C.为了防止污染，接种环经火焰灭菌后应趁热快速挑取菌落

D.用记号笔标记培养皿中菌落时，应标记在皿底上

【答案】D 二、实验操作

（一）制备牛肉膏蛋白胨培养基

让学生阅读教材，讲解制备步骤：

1.计算：根据配方比例，计算100mL培养基各成分用量。

2.称量：准确称取各成分。称取牛肉膏和蛋白胨时动作要迅速，目的是防止牛

阅读、倾听、思考、回答。

。

肉膏吸收空气中水分。

3.溶化：①加水加热熔化牛肉膏；②加入蛋白胨和氯化钠继续加热；③加入琼脂；④用蒸馏水定容到100mL。整个过程不断用玻棒搅拌，目的是防止琼脂糊底而导致烧杯破裂。

4.调pH：用1mol/LNaOH溶液调节pH至偏碱性。

5.灭菌：将配制好的培养基转移到锥形瓶中，加塞包扎后用高压蒸汽灭菌锅灭菌；所用培养皿用报纸包扎后用干热灭菌箱灭菌。

6.倒平板：待培养基冷却至50℃左右时在酒精灯火焰附近操作进行。

【方法点拨】倒平板的方法及注意事项

图文讲解倒平板的方法及注意事项，让学生回答问题。

倾听、

①火焰旁右手拿锥形瓶，左手拔出棉塞； ②右手拿锥形瓶，使锥形瓶的瓶口迅速通过火焰；

③左手将培养皿打开一条缝隙，右手将培养基倒入培养皿，立刻盖上皿盖。

④待平板冷却凝固后，将平板倒过来放置。

问题1.培养基灭菌后，需要冷却到50 ℃左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？

问题2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？

问题3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？

思考。

进行微问题4.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，阅读、这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？ （二）纯化大肠杆菌

讲述：微生物接种方法很多，最常用的接种方法有：平板划线法和稀释涂布平倾听、思考、

板法。

1.平板划线法

（1）定义和目的

讲解平板划线法定义和目的：通过接种环在琼脂固体培养基表面连续画线的操作,将聚集的菌钟逐步稀释分散到培养基的表面。在数次画线后,可以分离到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体,这就是菌落。

分离后，一个菌体便会形成一个菌落，这是消除污染杂菌的通用方法，也是用于筛选菌株的最简便方法之一。

（2）操作步骤

让学生阅读教材平板划线法操作图文资料，讲解操作步骤，让学生回答问题。

①将接种环在酒精灯火焰上灼烧直至烧红。

②在酒精灯火焰旁冷却接种环，并打开大肠杆菌的菌种试管的棉塞。

③将菌种试管口通过火焰达到消灭试管口杂菌的目的。

④将冷却的接种环伸入到菌液中取出一环菌种。

⑤将菌种试管口再次通过火焰后塞上棉塞。

⑥将皿盖打开一条缝隙，把接种环伸入平板内划3～5条平行线，盖上皿盖，不要划破培养基。

⑦灼烧接种环，冷却后从第一区划线末端开始向第二区域内划线。重复上述过程，完成三、四、五区域内划线。注意不要将第五区的划线与第一区划线相连。

⑧将平板倒置放在培养箱中培养。

问题1.为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？

问题2.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？ 问题3.在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？ 2.稀释涂布平板法

（1）定义和目的

讲解定义和目的：将菌液进行一系列梯度稀释，并将不同稀释度菌液分别涂布到琼脂固体培养基上进行培养。当稀释倍数足够高时，即可获得单个细菌形成回答。

生物培

倾听、阅读、思考、养。

回答。

的标准菌落。 （2）操作步骤

让学生阅读教材稀释涂布平板法的系列稀释操作和涂布平板操作图文材料，讲解相关操作步骤，让学生回答问题。

系列稀释操作

①取盛有9mL水的无菌试管6支，编号10、10、10、10、10、10。

②用灼烧冷却的移液管吸取1mL菌液注入编号为10试管中，并吹吸3次，使之混匀。

③从10倍液中吸取1mL菌液注入到编号为10试管内吹打均匀，获得10倍液。依此类推。

注意：移液管需要经过灭菌。操作时，试管口和移液管离火焰1~2cm处。 涂布平板操作

1221123456

演练、回答。

【典型例题】 （2016江苏卷.25）（多选）漆酶属于木质降解酶类，在环境修复、农业生产等领域有着广泛用途。下图是分离、纯化和保存漆酶菌株的过程，相关叙述正确的是（ ）

分析、

回答。

A．

生活污水中含有大量微生物，是分离产漆酶菌株的首选样品

B．

筛选培养基中需要加入漆酶的底物，通过菌落特征挑出产漆酶的菌落

C．

在涂布平板上长出的菌落，在通过划线进一步纯化

D．

斜面培养基中含有大量营养物，可在常温下长期保存菌株

【答案】BC 三、结果分析与评价

让学生分析回答相关问题，加以讲解。

1.未接种的培养基表面是否有菌落生长？如果有菌落生长，说明什么？

培养未接种培养基作用是对照，有菌落形成，说明培养基灭菌不彻底。 2.接种大肠杆菌培养基上，独立菌落颜色、形状、大小如何？

大肠杆菌菌落呈白色，为圆形，光滑有光泽，边缘整齐。

3.培养12h和24h后，观察到结果一样吗？如果不同，分析产生差异原因。

菌落大小不同；菌落分布位置相同。原因是时间越长，菌落中细菌繁殖越多，菌落体积越大；菌落的位置不动，但菌落数增多。

4.如果你在培养基上观察到不同形态菌落，可能是哪些原因引起的？

培养基灭菌不彻底或杂菌感染等。

共同回顾本节要点：

一、培养基

(1)营养构成：

都含有水、碳源、氮源和无机盐。 (2)种类：

液体培养基和固体培养基。 二、无菌技术 呼应、

能够对实验结果进行分析。

突出本回答。

节重点。

三、大肠杆菌的纯化培养 (1)制备牛肉膏蛋白胨固体培养基

（2）常用的微生物接种方法

a.平板划线法 b.稀释涂布平板法