课题2　土壤中分解尿素的细菌的分离与计数教学设计思路

课题2

土壤中分解尿素的细菌的分离和计数

第一课时

一、课题背景

1、尿素的利用

尿素是一种重要的农业氮肥，尿素不能直接被农作物吸收，土壤中的细菌将尿素分解成氨之后才能被植物利用。

2、细菌能利用尿素的的原因

土壤中的细菌能分解尿素是因为它们能合成脲酶

二、课题目标：研究培养基对微生物的选择作用，进行微生物数量的测定，运用相关技术解决生产生活中有关微生物的计数。

三、课题重点和难点

1.

课题重点：对土样的选取和选择培养基的配制。

2.

课题难点：对分解尿素的细菌的计数。

四、教学方法：

启发式教学。

五、教学工具：

多媒体课件

六、教学过程：

（一）引入新课

上节课我们学习了培养基的配制以及接种技术，下面我们来学习如何进行细菌的分离，获得所需要的目的微生物。

（二）进行新课

科学家能从热泉中筛选出耐高温的细菌，原因：因为热泉温度70～800C，淘汰了绝大多数微生物,只有Taq细菌被筛选出来。

启示：寻找目的菌种时要根据它对生存环境的要求，到相应的环境中去寻找。

实验室中微生物的筛选原理：

人为提供有利于目的菌株生长的条件(包括营养、温度、pH等)，同时抑制或阻止其他微生物生长。

要分离一种微生物，必须根据该微生物的特点，包括营养、生理、生长条件等；

方法：

⑴抑制大多数微生物的生长

⑵促进目的菌株的生长

结果：培养一定时间后，该菌数量上升，再通过平板稀释等方法对它进行纯化培养分离。

（三）土壤中分解尿素的细菌的分离与计数所需培养基配方P22：

①从物理性质看此培养基属于哪类？

固体培养基

②在此培养基中哪些作为碳源、氮源？

碳源：葡萄糖

氮源：尿素

（四）培养基选择分解尿素的微生物的原理

培养基的氮源为尿素，只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，以尿素作为氮源。缺乏脲酶的微生物由于不能分解尿素，缺乏氮源而不能生长发育繁殖，而受到抑制，所以用此培养基就能够选择出分解尿素的微生物。

允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基，叫做选择培养基。

（五）怎样证明此培养基具有选择性呢？

培养基类型

是否接种

目的

结果

实验组

以尿素为唯一氮源的培养基

是

分离尿素细菌

只生长尿素细菌

对照组

牛肉膏蛋白胨培养基

是

判断该培养基有无选择性

生长多种微生物

（六）统计菌落数目：

1、显微镜直接计数：

利用血球计数板(血细胞计数板），在显微镜下计算一定容积里样品中微生物的数量。

缺点：不能区分死菌与活菌；不适于对运动细菌的计数；

说明设置重复组的重要性。在设计实验时，一定要涂布至少3个平板，作为重复组，才能增强实验的说服力与准确性。在分析实验结果时，一定要考虑所设置的重复组的结果是否一致，结果不一致，意味着操作有误，需要重新实验。

注意事项

①为了保证结果准确，一般选择菌落数在30——300的平板上进行计数。

②为使结果接近真实值可将同一稀释度加到三个或三个以上的平板中，经涂布，培养计算出菌落平均数。

③统计的菌落往往比活菌的实际数目低。

（七）设置对照

主要目的是排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度。

判断培养基中是否有杂菌污染：

将未接种的培养基同时进行培养。

判断选择培养基是否具有筛选作用：

完全培养基（营养成分齐全）接种后培养观察菌落数目。

（八）样品的稀释

应在火焰旁称取土壤10g。

◆在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在火焰旁进行

分离不同的微生物采用不同的稀释度

原因：不同微生物在土壤中含量不同

目的：保证获得菌落数在30～300之间、适于计数的平板

微生物的培养与观察

板书设计

土壤中尿素分解菌的分离与计数：

分离筛选微生物的原理

有利于目的菌株生长抑制或阻止其他微生物生长

稀释涂布平板法显微镜直接计数

微生物计数方法与原理

对照设置与重复设置

实验设计

实践训练

1.使用选择培养基的目的是（

）

A.培养细菌

B.培养真菌

C.使需要的微生物大量繁殖

D.表现某微生物的特定性状与其他微生物加以区别

2.能合成脲酶的微生物所需要的碳源和氮源分别是(

)

A.CO2和N2

B.葡萄糖和NH3

C.CO2和尿素

D.葡萄糖和尿素

3.下列说法不正确的是（

）

A.科学家从70－80度热泉中分离到耐高温的TaqDNA聚合酶。

B.统计某一稀释度的5个平板的菌落数依次为M1、M2、M3、M4、M5，以M3作为该样品菌落数的估计值。

C.设置对照实验的主要目的是排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度

D.同其他生物环境相比，土壤中的微生物数量最大，种类最多。

4.为培养和分离出酵母菌并淘汰杂菌，常在培养基中加入（

）

A.较多的氮源物质

B.较多的碳源物质

C.青霉素类药物

D.高浓度食盐