课题3　血红蛋白的提取和分离课时教学实录

1、概念：在一定的范围内，能对抗外来少量强酸、强碱或稍加稀释不引起溶液PH发生明显变化的作用叫做缓冲作用，具有缓冲作用的溶液叫做缓冲溶液。

2、作用：能够抵制（

）对溶液（

）的影响，维持PH基本不变。

3、缓冲溶液的配制

通常由（

）种缓冲剂溶解于水中配制而成。调节缓冲剂的（

）就可以制得（

）使用的缓冲液。

㈢电泳：

1、概念：指带电粒子在电场作用下发生迁移的过程。2、原理：许多重要的生物大分子，如（

）等都具有(

) 在(

)下，这些基团会带上（

）

。在电场的作用下，这些带电分子会向着与其（

）

移动。电泳利用了待分离样品中各种分子（

）以及分子本身（

）、（

）的不同使带电分子产生不同的（

），从而实现样品中各种分子的分离

3、分类：

琼脂糖凝胶电泳

聚丙稀酰胺凝胶电泳。

测定（

蛋白质相对分子质量

）通常用十二烷基硫酸钠（SDS）—聚丙稀酰胺凝胶电泳

蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中的迁移率取决于它所带静电荷的多少以及分子的大小等因素。

为了消除静电荷对迁移率的影响可以在凝胶中加入(

)。SDS能使蛋白质发生完全变性。由几条肽链组成的蛋白质复合体在SDS的作用下会解聚成单条肽链，因此测定的结果只是(

)。SDS能与各种蛋白质形成蛋白质—SDS复合物，SDS所带负电荷的量大大超过了蛋白质分子原有电荷量。因而掩盖了不同种蛋白质间的电荷差别，使电泳迁移率完全取决于(

)。

加入待分离的样品

阴极

带电性质、分子大小和形状的不同，使分子迁移速

阳极

溶液槽【我的疑惑】：

【探究1】结合以往学习的知识，思考下列问题：

思考1：分离生物大分子的基本思路是什么？

思考2：

高温灭菌和酒精灭菌分别利用蛋白质的何种作用，作用结果是什么被破坏？

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分子向阳极移动

缓冲液

凝胶电泳原理示意图

琼脂胶

思考3：人们用鸡的红细胞提取DNA，用人的红细胞提取血红蛋白的原因是什么？

【探究2】阅读教材P64第1自然段和“凝胶色谱法”部分，讨论并回答下列问题：

1．（理解）提取和分离蛋白质的原理：利用蛋白质的各种

（如

、

、电荷性质和电量、溶解度、吸附性和亲和力等）的差异，将不同的蛋白质分离开来。

2．（记忆）凝胶色谱法是根据

分离蛋白质的一种有效方法。

3．（理解）凝胶大多数是由多糖化合物（如葡聚糖、琼脂糖等）构成的微小

球体。当相对分子量不同的蛋白质分子通过凝胶时，

的蛋白质进入凝胶内部的通道，路程

，移动速度

；相反，

的蛋白质在凝胶颗粒外部移动，路程

，移动速度

。

【探究3】阅读教材P65 “缓冲溶液”部分，讨论并回答下列问题：

1．（理解）在一定范围内，缓冲溶液能够抵制

对溶液pH的影响，而保持

。

2．（记忆）缓冲溶液通常由1～2种

溶解于水配制而成。调节

可以制成在不同pH范围内使用的缓冲液。

思考4:维持人体血液pH稳态的缓冲对有

。

思考5:在血红蛋白整个实验室中用的缓冲液是什么？它的目的是什么？

【探究4】阅读教材P65 “电泳”部分，讨论并回答下列问题：

1．（记忆）电泳是指

在电场的作用下发生

的过程。

2．（记忆）在一定的pH下，许多生物大分子上可解离的基团就会带

。

3．（理解）在电泳过程中，决定带电分子迁移方向的是带电分子

，决定带电分子迁移快慢的是带电分子

。

4．（记忆）常用的电泳方法有

电泳和

电泳。为了消除样品分子原有净电量对迁移速率的影响，可以在凝胶中加入

，使样品分子的迁移速率完全取决于

。

〖反思总结〗

〖课后作业〗:基础训练册：将基础知识整理到作业本上；完成该节训练题。

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