资料摘要
课题3 血红蛋白的提取和分离目标:1.了解凝胶色谱法和电泳法;2.掌握蛋白质的提取和分离过程。重难点:蛋白质的提取和分离过程一、基础知识(学生完成填空或在书上找到)1.分离生物大分子的基本思路:2.蛋白质分离和提取的原理:3.凝胶色谱法:①概念:②凝胶:③原理及过程:4.缓冲溶液: ①概念②作用③配
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课题3 血红蛋白的提取和分离课堂实录【3】
未知
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关键词:课题3 血红蛋白�…课堂实录【3】
正文
课题3
血红蛋白的提取和分离
目标:
1.了解凝胶色谱法和电泳法;
2.掌握蛋白质的提取和分离过程。
重难点:
蛋白质的提取和分离过程
一、基础知识(学生完成填空或在书上找到)
1.分离生物大分子的基本思路:
2.蛋白质分离和提取的原理:
3.凝胶色谱法:
①概念:
②凝胶:
③原理及过程:
4.缓冲溶液: ①概念
②作用
③配制
Q:提问:在本课题中使用的缓冲液是:____ ,其目的是:
5.电泳
①概念
②原理
③类型
二、实验操作(先观看视频)
(一)蛋白质的提取和分离步骤
样品处理→粗分离→纯化→纯度鉴定
(二)操作过程
1.样品处理
提问:用鸡的红细胞提取DNA,用猪、牛、羊的红细胞提取血红蛋白的原因是什么?
提问:血液有哪些成分?
(1)红细胞的洗涤。
①目的:
。②
提问:为什么低速短时间?
(2)血红蛋白的释放。
提问:加入蒸馏水和甲苯的作用分别是:
(3)分离血红蛋白溶液。
离心后试管中的溶液分为4层,从上往下依次为:
第1层:无色透明的
。
第2层:脂溶性物质的沉淀层——白色薄层固体。
第3层:
的水溶液——
透明液体。
第4层:其他杂质的暗红色沉淀物。
将试管中的液体用
过滤,除去
,于分液漏斗中静置片刻后,分出下层的
液体。
2.透析——粗分离
(1)过程:取1mL的
溶液装入
中,将其放入盛有300 mL的物质的量浓度为20 mmol/L的
中(pH为7.0),透析12 h。
(2)原理:透析袋能使
自由进出,而将
保留在袋内。
(3)目的:去除样品中
的杂质。
提问:透析袋是选择透过性膜吗?为什么?
3.凝胶色谱操作——纯化:
制作
→装填
:因为干的凝胶和用
的凝胶的体积差别很大,所以装柱前需要根据色谱柱的内体积计算所需要的凝胶量。在装填色谱柱时,不能有
存在。→
4.SDS一聚丙烯酰胺凝胶电泳——纯度鉴定
判断纯化的蛋白质是否达到要求,需要进行
的鉴定。鉴定方法中,使用最多的是
。
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