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课题3 血红蛋白的提取和分离目标:1.了解凝胶色谱法和电泳法;2.掌握蛋白质的提取和分离过程。重难点:蛋白质的提取和分离过程一、基础知识(学生完成填空或在书上找到)1.分离生物大分子的基本思路:2.蛋白质分离和提取的原理:3.凝胶色谱法:①概念:②凝胶:③原理及过程:4.缓冲溶液: ①概念②作用③配

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课题3 血红蛋白的提取和分离课堂实录【3】

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课题3 血红蛋白的提取和分离课堂实录【3】

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关键词:课题3 血红蛋白�…课堂实录【3】

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课题3

血红蛋白的提取和分离

目标:

1.了解凝胶色谱法和电泳法;

2.掌握蛋白质的提取和分离过程。

重难点:

蛋白质的提取和分离过程

一、基础知识(学生完成填空或在书上找到)

1.分离生物大分子的基本思路:

2.蛋白质分离和提取的原理:

3.凝胶色谱法:

①概念:

②凝胶:

③原理及过程:

4.缓冲溶液: ①概念

②作用

③配制

Q:提问:在本课题中使用的缓冲液是:____ ,其目的是:

5.电泳

①概念

②原理

③类型

二、实验操作(先观看视频)

(一)蛋白质的提取和分离步骤

样品处理→粗分离→纯化→纯度鉴定

(二)操作过程

1.样品处理

提问:用鸡的红细胞提取DNA,用猪、牛、羊的红细胞提取血红蛋白的原因是什么?

提问:血液有哪些成分?

(1)红细胞的洗涤。

①目的:

。②

提问:为什么低速短时间?

(2)血红蛋白的释放。

提问:加入蒸馏水和甲苯的作用分别是:

(3)分离血红蛋白溶液。

离心后试管中的溶液分为4层,从上往下依次为:

第1层:无色透明的

。

第2层:脂溶性物质的沉淀层——白色薄层固体。

第3层:

的水溶液——

透明液体。

第4层:其他杂质的暗红色沉淀物。

将试管中的液体用

过滤,除去

,于分液漏斗中静置片刻后,分出下层的

液体。

2.透析——粗分离

(1)过程:取1mL的

溶液装入

中,将其放入盛有300 mL的物质的量浓度为20 mmol/L的

中(pH为7.0),透析12 h。

(2)原理:透析袋能使

自由进出,而将

保留在袋内。

(3)目的:去除样品中

的杂质。

提问:透析袋是选择透过性膜吗?为什么?

3.凝胶色谱操作——纯化:

制作

→装填

:因为干的凝胶和用

的凝胶的体积差别很大,所以装柱前需要根据色谱柱的内体积计算所需要的凝胶量。在装填色谱柱时,不能有

存在。→

4.SDS一聚丙烯酰胺凝胶电泳——纯度鉴定

判断纯化的蛋白质是否达到要求,需要进行

的鉴定。鉴定方法中,使用最多的是

。

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