课题2　土壤中分解尿素的细菌的分离与计数课件配套优秀教案案例

课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数

课标要求：

1．研究培养基对微生物的选择作用，进行微生物数量的测定。

2．能利用选择培养基分离细菌，运用相关技术解决生产生活中有关微生物的计数。

教学目标: 知识：了解土壤中能分解尿素的细菌；

能力：学会用实验对分解尿素的细菌的计数的能力；

情感：联系生活实际，使学生对尿素的细菌形成一定的感性认识。

【重点难点】

重点：对土样的选取和选择培养基的配制

难点：对分解尿素的细菌的计数

【课前预习】

1．实验室中微生物筛选的原理：人为提供有利于 生长的条件(包括营养、温度、pH等)，同时 或 其他微生物生长。 2．选择培养基是指在微生物学中，将允许 种类的微生物生长，同时 和 其他种类微生物生长的培养基。

3．配制选择培养基是根据选择培养的菌种的生理代谢特点加入某种物质以达到选择的目的。例如，培养基中不加入有机物可以选择培养 微生物；培养基中不加入氮元素，可以选择培养 ；的微生物.加入高浓度的食盐可选择培养金黄色葡萄球菌等。

4．测定微生物数量的常用方法有 和 。

5．稀释涂布平板法统计样品中活菌的数目的原理：当样品的 足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个 。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。为了保证结果准确，一般选择菌落数在 的平板进行计数。此外，测定微生物数量的常用方法还有 直接计数。

6．设置对照的主要目的是排除实验组中 对实验结果的影响，提高实验结果的 。

【我要提问】

【精讲点拨】

1.

自然界中的微生物往往是混杂生长的。人们在研究微生物时一般先要将它们分离提纯，然后进行数量的测定。下面是对大肠杆菌进行数量测定的实验，请回答有关问题。

实验步骤如下：

23456A．制备稀释倍数为10、10、10、10、10的系列稀释液：

B．为了得到更加准确的结果，你选用_______(填“稀释混合平板法”或“稀释涂布平板法”)接种样品；

C．适宜温度下培养。

结果分析：

6(1)测定大肠杆菌数，再对应稀释倍数为10的培养基，得到以下几种统计结果，其中正确可信的是_____ A．一个平板，统计的菌落数是23 B．两个平板，统计的菌落数是22和26，取平均值24 C．三个平板，统计的菌落数是21、5和52，取平均值26 D．四个平板，统计的菌落数是21、30、24和25，取平均值25 6(2)一同学在稀释倍数为10的培养基中测得平板上菌落数的平均值为23.4，那么每毫升样品中的菌落数是(0.2mL)____________。

(3)用这种方法测定密度，实际活菌数量比测得的数量_____________，因为

____________ 。

(4)某同学在测定大肠杆菌的密度时发现，在培养基上还有其他杂菌的菌落，能否肯定该大肠杆菌的品系被污染了？为什么？

2.

根据各类微生物的形态结构特点和新陈代谢类型，利用选择培养基和鉴别培养基，结合显微镜镜检以及菌落特征，可以把混杂在一起的大肠杆菌、硝化细菌、乳酸菌、酵母菌、金黄色葡萄球菌、圆褐固氮菌分离开来。下面是分离筛选的方法步骤，请根据各个步骤的条件，填写空格中的内容。

首先配制一系列不同性质的固体培养基，然后进行高温灭菌。再将上述微生物的混合液分别接种到各种培养基上进行培养。

（1）用无氮培养基可以筛选出 圆褐固氮菌 。

（2）用不含有机碳源的选择培养基可以筛选出 硝化细菌 。

（3）酵母菌的筛选需要在常规培养基中另加入 青霉素 。

（4）用加了较高浓度NaCl的培养基可以筛选出

金黄色葡萄球菌 ，根据菌落的颜色呈现 桔红（金黄） 色，将其挑取单独培养。

（5）利用伊红—美蓝培养基培养混合菌，菌落呈 深紫 色并带有金属光泽为 大肠杆菌 ，挑取该菌落单独培养。结合显微镜镜检和进一步用伊红——美蓝培养基鉴别来确定。

（6）在无氧环境下培养混合菌， 乳酸菌和酵母菌 可以生长。加入一定浓度的乳酸，使培养基pH充分降低，可抑制 酵母

菌的生长，利用菌落特征，结合显微镜镜检，选取具有生长优势的菌落，即可分离出

乳酸菌

。

【巩固练习】

1．分析下面培养基的配方：KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4·7H20、葡萄糖、尿素、琼脂。请回答：

(1)在该培养基的配方中，为微生物的生长提供碳源和氮源的分别 和 。

(2)想一想这种培养基对微生物是否具有选择作用?如果具有，又是如何进行选择的? 62．用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数，在对应稀释倍数为10的培养基中．得到以下几种统计结果，正确的是 ( ) A．涂布了一个平板，统计的菌落数是230. B．涂布了两个平板，统计的菌落数是215和260，取平均值238. C．涂布了三个平板，统计的菌落数分别是21、212和2墨6，取平均值163. D．涂布了三个平板，统计的菌落数分别是2l0、240和250，取平均值233. 3．用来判断选择培养基是否起到了选择作用需要设置的对照是 ( ) A．未接种的选择培养基 B．未接种的牛肉膏蛋白胨(全营养)培养基

C．接种了的牛肉膏蛋白胨(全营养)培养基 D．接种了的选择培养基

4．要将从土壤中提取的自生固氮菌与其他的细菌分离出来，应将它们接种在（ ）

A．加入氮源和杀菌剂的培养基上 B．不加入氮源和不加杀菌剂的培养基上

C．加入氮源，不加杀菌剂的培养基上 D．不含氮源和杀菌剂的培养基上

5．将圆褐固氮菌接种到彻底灭菌的固体培养基上，经过一段时间培养，就能够得到（ ）

A．菌丝 B．无一定形态的群体 C．单个细菌 D．菌落

6．在接种操作的过程中，不正确的是 （ ）

A．要将接种环灼烧灭菌 B．取下棉塞后要将试管口灼烧灭菌

C．将接种环伸入试管内，先接触长菌多的部位 D．接种后还要将管口灭菌加塞

7．高压蒸气灭菌的原理是 （ ）

A．高压使细菌DNA变性 B．高压使细菌蛋白质凝固变性 C．高温烫死细菌 D．高温使细菌DNA变性

8．尿素是尿素分解菌的氮源，因此在配制培养基时 （ ）

A．葡萄糖在培养基中含量越多越好 B．尿素在培养基中含量越少越好

C．尿素分解菌有固氮能力，故培养基中尿素为无机氮

D．尿素分解菌无固氮能力，故培养基中的尿素为化合态氮