课题2　土壤中分解尿素的细菌的分离与计数优秀教学设计

专题二课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数

一、课题背景：

1．尿素只有被 分解成 之后，才能被植物吸收利用。

反应式 2．以土壤中能分解尿素的细菌为研究对象，要达到的两个主要目的是：

⑴ ；⑵ 。

3．PCR（ ）是一种在体外将 。此项技术此项技术的自动化，要求使用 （Taq） 。

一、理论基础

1．筛选菌株

(1)实验室中微生物筛选的原理：人为提供有利于 生长的条件(包括营养、温度、pH等)，同时 或 其他微生物生长。 (2)选择培养基：在微生物学中，将允许 种类的微生物生长，同时 和 其他种类微生物生长的培养基，称作选择培养基。

（3）配制选择培养基的依据

根据选择培养的菌种的生理代谢特点加入某种物质以达到选择的目的。例如，培养基中不加入有机物可以选择培养

微生物；培养基中不加入氮元素，可以选择培养 ；的微生物.加入高浓度的食盐可选择培养金黄色葡萄球菌等。

2．统计菌落数目

（1）常用来统计样品中活菌数目的方法是

法

。除此之外，

也是测定微生物数量的常用方法,缺点是

。

（2）稀释涂布平板法统计样品中活菌的数目的原理

当样品的 足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个 。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。为了保证结果准确，一般选择菌落数在 的平板进行计数。 （3）一般来说，统计的菌落数往往比活菌的实际数目 。这是因为 。因此，统计结果一般用 而不是活菌数来表示。

3．设置对照

设置对照的主要目的是排除实验组中 对实验结果的影响，提高实验结果的 。例如为了排除培养基是否被杂菌污染了，需以培养 的培养基作为空白对照。

二、实验设计

（1）、

实验设计包括的内容有： 、 、 和 ，具体的实验步骤以及时间安排等的综合考虑和安排。

（2）、根据图示2－7填写以下实验流程：

配制

溶液

稀释

与培养

---------- （3）、关于土壤中某样品细菌的分离与计数实验操作步骤如下：

1． 取样：从肥沃、湿润的土壤中取样。应先 3 cm左右，再取样，将样品装入事先准备好的 中。

2．制备 ：准备牛肉膏蛋白胨培养基和选择培养基，将菌液稀释相同的倍数，在牛肉膏蛋白胨培养基上生长的菌落数目应明显 选择培养基上的数目，因此，牛肉膏蛋白胨培养基可以作为 ，用来判断选择培养基是否起到了选择作用。

3．微生物的 与观察

（1）、不同种类的微生物，往往需要不同的培养 和培养 。在实验过程中，一般每隔24小时统计一次菌落数目，选取菌落数目稳定时的记录作为结果，这样可以 。

（2）、培养不同微生物往往需要不同培养温度和时间。细菌一般在

培养1～2d，放线菌

一般在

培养5～7d，霉菌一般在

的温度下培养3～4d。

2．6菌落的特征包括

等方面。

4．细菌的计数

当菌落数目稳定时，选取菌落数在 的平板进行计数。在同一稀释度下，至少对3个平板进行重复计数，然后求出 ，并根据平板所对应的稀释度计算出样品中细菌的数目。

三：操作

1）取土样用的小铁铲和盛土样的的信封在使用前都要

。

2）应在

旁称取土壤

10 g。将称好的土样倒入盛有90mL

的锥形瓶中，塞好棉塞。

3）在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在

旁进行。

4）实验时要对培养皿作好标记。注明

等，其目的是 。

5）为了提高效率，在操作时更加有条不紊，应当事先

。

四．结果分析与评价

1

对分离的菌种作进一步的鉴定，还需要借助

的方法。

2

在细菌分解尿素的化学反应中，细菌合成的

将尿素分解成了

。氨会使培养基的碱性

，PH

。因此，我们可以通过检测培养基

pH 变化来判断该化学反应是否发生。

3

在以

为唯一氮源的培养基中加入

指示剂。培养某种细菌后，如果PH升高，指示剂将变

，

说明该细菌能够

。