课题2　土壤中分解尿素的细菌的分离与计数名师教学设计1

课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数

一、教学目标

1、知识与技能

利用选择培养基分离细菌，运用相关技术解决生产生活中有关微生物的计数

2、过程与方法

分析研究思路的形成过程，找出共性和差异性

3、情感、态度与价值观

形成无菌不在的概念，养成讲究卫生的习惯

二、教学重难点

1、教学重点：对土样的选取和选择培养基的配制

2、教学难点：对分解尿素的细菌的计数

三、教学方法

启发式教学

四、教学工具

多媒体课件

五、教学过程

（一）复习回顾

上节课我们学习了培养基的配置以及接种技术。那么这节课我们利用以上技术进行细菌的分离，获得所需要的目的微生物。

（二）进行新课

1、背景介绍

尿素是一种重要的氮肥，农作物不能（能，不能）直接吸收利用，而是首先通过土壤中的细菌将尿素分解为氨和CO2，这是因为细菌能合成脲酶

。

常见的分解尿素的微生物：芽孢杆菌、小球菌、假单胞杆菌、克氏杆菌、

棒状杆菌、梭状芽孢杆菌，某些真菌和放线菌也能分解尿素。

课题目的：①从土壤中分离出能够分解尿素的细菌；②统计每克土壤样品中究竟含有多少这样的细菌

2、课题研究思路：

2.1筛选菌株

提出的问题：如何寻找耐高温的酶？

解决问题的思路：寻找耐高温环境；

原理：高温淘汰其他菌，选出耐高温细菌，耐高温菌种提取耐高温酶。

〖思考1〗

在该培养基配方中，为微生物的生长提供碳源的是葡萄糖

，提供氮源的的是尿素，琼脂的作用是凝固剂

。

〖思考2〗该培养基对微生物具有（具有，不具有）选择作用。如果具有，其选择机制是只有能够以尿素作为氮源的微生物才能在该培养基上生长。

引出概念：选择培养基（在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基。）

2.2统计菌落数目

（1）间接计数法（活菌计数法）：常用稀释涂布平板法

（2）显微镜直接计数

注意事项：①为了保证结果准确，一般选择菌落数在

30～300 的平板进行计数。②为使结果接近真实值可将同一稀释度加到三个或三个以上的平皿中，经涂布，培养计算出菌落平均数。（设置重复实验）③统计的菌落往往比活菌的实际数目低。

〖思考3〗从平板上的菌落数推测出每克样品中的菌落数的计算方法是

（平均菌落数÷涂布的稀释液体积）×稀释倍数

。

〖思考4〗利用稀释涂布平板法成功统计菌落数目的关键是恰当的稀释度

。

2.3设置对照

主要目的是排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度。对照实验是指除了被测试的条件外，其他条件都相同的实验。满足该条件的称为对照组，未满足该条件的称为实验组。

〖思考5〗请设计本实验的对照实验组：

方案1：其他同学用A同学的土样进行实验。

方案2：A同学以不接种的培养基作为空白对照。

3．实验设计

3.1实验设计的内容包括实验方案、材料用具、实施步骤和时间安排等。

3.2根据图示2－7填写以下实验流程：

注意事项：

①土壤微生物主要分布在距地表3～8cm的近中性土壤中，约70％～80％为细菌。

②样品的稀释程度将直接影响平板上生长的菌落数目。细菌稀释度为104、105、106，放线菌稀释度为103、104、105，真菌稀释度为102、103、104。

③培养不同微生物往往需要不同培养温度。细菌一般在30～37℃培养1～2d，放线菌一般在25～28℃培养5～7d，霉菌一般在25～28℃的温度下培养3～4d。

④在菌落计数时，每隔24h统计一次菌落数目。选取菌落数目稳定时的记录作为结果，以防止因培养时间不足而导致遗漏菌落的数目。

⑤菌落的特征包括

形状、大小、隆起程度、颜色等方面。

3.3实验过程

1）取土样用的小铁铲和盛土样的的信封在使用前都要灭菌。

2）应在火焰旁称取土壤

10 g。将称好的土样倒入盛有90mL无菌水的锥形瓶中，塞好棉塞。

3）在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在火焰旁进行。

4）实验时要对培养皿作好标记。注明培养基类型、培养时间、稀释度、培养物等。

5）为了提高效率，在操作时更加有条不紊，应当事先规划时间。

注意事项：在研究未知微生物时务必规范操作，以防被致病微生物感染，实验后一定要洗手。

4．结果分析与评价

4.1对分离的菌种作进一步的鉴定，还需要借助生物化学的方法。

4.2在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂。培养某种细菌后，如果PH升高，指示剂将变红，说明该细菌能够分解尿素。

原理：由于NH3的产生，培养基碱性增强，pH升高，因此可通过检测pH的变化来判断该化学反应是否发生。

〖思考6〗

测定饮水中大肠杆菌数量的方法是将一定体积的水用细菌过滤器过滤后，将滤膜放到伊红美蓝培养基上培养，大肠杆菌菌落呈现黑色，通过记述得出水样中大肠杆菌的数量。你认为在该实验中至少应取几个水样？

（三）课堂总结