复习与测试第二课时教学实录

《微生物培养和应用》

1.微生物的分离和培养知识要求B、实验要求b2.某种微生物数量的测定C3.微生物的应用B考点一、微生物的分离和培养

（一）基础知识：

1．培养基

(1)营养构成:一般都含有水、_____、_____和无机盐。此外还要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求。

(2)种类：按照物理性质可分为______培养基和______培养基。

按照功能可分为______培养基和______培养基。

2.无菌技术

项目

条件

较为温和的

物理或化学方法

结果

仅杀死物体表面或内部的部分对人体有害的微生物

杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子

常用方法

巴氏消毒法

应用范围

日常用品

不耐高温的液体

用酒精擦拭双手，用氯气消毒水源

接种工具

玻璃器皿、金属工具

培养基及容器的灭菌

强烈的理化因素

（二）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基

配制步骤：计算→称量→溶化→_____→

。

思考讨论：

①为什么需培养基冷却至50℃时开始倒平板？

②平板倒置有哪些优点？

③在倒平板过程中如何防止杂菌污染？

（三）微生物的纯化

1.原理：由一个细胞生长繁殖而来的细胞群体形成肉眼可见的菌落。

2.接种方法：

法和

法。

法不仅可分离纯化微生物，还可对微生物进行计数

思考与讨论：（平板划线法）

①操作第一步即取菌种之前及每次划线之前都需要进行火焰灼烧灭菌，划线操作结束时，仍需灼

烧接种环，请写出每次灼烧的目的

目的

第一次操作

每次划线之前

划线结束

1

②接种环灼烧灭菌后，能否立即划线？为什么？

③第二次划线是从哪个位置开始？为什么？

考点二、微生物的筛选

原理：人为提供有利于目的菌生长的条件，同时抑制或阻止其他微生物的生长。

土壤中分解尿素的细菌

①选择培养基的成分：

②鉴定方法：在培养基中加入

，若指示剂变红，pH升高，说明细菌能分解尿素

考点三、微生物的数量测定

1.直接计数法

常用的是显微镜直接计数法，该方法所需设备简单，可迅速得到结果，而且在计数的同时能观察所研究微生物的形态特征。

2间接计数法(活菌计数法)：常用稀释涂布平板法。

①理论依据是：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落即代表一个活菌。为了保证结果准确，一般选择菌落数在

的平板进行计数，每个稀释倍数涂布

个平板进行计数，取平均值。

②计算公式：每克样品中的菌落数＝

，其中C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(mL)，M代表稀释倍数。

思考与讨论：

酸奶是以牛奶为原料，经过巴氏杀菌后再向牛奶中添加有益菌，经发酵制成。家庭自制酸奶的安全隐患是有害菌污染问题，为检测自制酸奶是否被杂菌污染，进行如图所示操作。请回答下列问题：

②鉴定方法：

,当纤维素被分解后,培养基出现以纤维素分解菌为中心的透明圈

分解纤维素的微生物

①选择培养基的成分：

(3)在恒温培养箱中培养一段时间后，3个平板上菌落数分别为65个、63个、64个，则可以推测酸奶中每毫升含菌数为________个。运用这种方法统计的结果往往较实际值偏小，原因是________________________________________________________________________

课后练习

一、选择题

1．(2017·苏锡常镇二模)下列有关“微生物的分离与培养”实验的叙述，正确的是(

) A．利用平板划线法可对微生物进行接种、纯化、分离和计数

B．对培养皿进行编号或对菌种进行标注时，应使用记号笔在皿底标记

C．倒平板时，应将打开的培养皿盖放到一边，以免培养基溅到皿盖上

2

D．将好氧型菌株接种到培养液中需静置培养，防止培养液沾染试管壁引发污染

2．(2017·南京二模)某化工厂的污水池中含有一种有害的难以降解的有机化合物A，研究人员用化合物A、磷酸盐、镁盐以及微量元素等配制的培养基，成功筛选到能高效降解化合物A的细菌(目的菌)。实验的主要步骤如图所示。下列有关叙述错误的是(

)

A．培养基中加入化合物A作为唯一碳源，目的是为了筛选目的菌

B．实验培养过程中进行振荡培养，可使目的菌和培养液充分接触

C．实验操作过程中，获得纯净“目的菌”的关键是防止外来杂菌污染

D．将固体培养基得到的目的菌重复多次上述实验的目的是获得大量菌种

3．(2018·南通一模)养殖池中存在的有毒物质主要是氨及亚硝酸，这两种物质可被硝化细菌吸收利用。在“养殖池底泥中硝化细菌的分离与计数”实验中(

) A．需要配制添加一定浓度氨盐的牛肉膏蛋白胨培养基，以筛选硝化细菌

B．应对采集底泥使用的工具进行灭菌，全部接种过程均需在酒精灯火焰旁进行

C．可以采用平板划线法进行接种，还需与未接种的空白培养基同时培养

D．应将培养基置于30 ℃恒温下培养12 h后，统计培养基中全部菌落数

4．(2017·盐城三模)如图为纤维单胞菌(能产生纤维素酶)的获取过程。下列有关叙述错误的是(

)

A．①②③④培养基都应以纤维素为唯一碳源

B．图中所用培养基灭菌常用的方法是高压蒸汽灭菌

C．④所用的接种方法可对培养的微生物进行计数

D．可用刚果红染料鉴定，看菌落周围是否出现透明圈

5．(2017·南通三模)如图是研究人员从红棕壤中筛选高效分解尿素细菌的过程示意图，有关叙述错误的是(

)

A．在配制步骤②③的培养基时，应先调pH后高压蒸汽灭菌

B．步骤③纯化分解尿素的原理是将聚集的细菌分散，可以获得单细胞菌落

C．步骤③采用涂布平板法接种，并需向牛肉膏蛋白胨培养基中加入尿素

D．步骤④是挑取③中不同种的菌落分别接种，比较细菌分解尿素的能力

6．(2018·扬州一模，多选)下列有关“微生物的分离与培养”实验的叙述，错误的是(

) A．高压蒸汽灭菌锅加盖时应按顺时针方向依次旋紧螺栓

B．选择培养基可以鉴定某种微生物的种类

3

C．待培养基冷却至室温时倒平板

D．统计样品中活菌数量时，接种方法可采用稀释涂布平板法

二、非选择题

7．(2018·南京一模)如图为果酒、果醋工厂化生产流程。请据图回答问题：

(1)家庭自制葡萄酒所用菌种常来自________________，图中的候选菌A、B经筛选和纯化分别获取__________和________菌种。

(2)图中所用的培养基都需要在接种前用____________法进行灭菌。

(3)在纯化菌种A时接种了5个平板，每个平板均接种0.1 mL样品并培养。其中乙平板的菌落分布如图，纯化菌种A的接种方法是__________________，推测出现平板乙可能的操作失误是____________________。其余的甲、丙、丁、戊平板操作正常，其菌落数分别是210、230、470、190，则样品中菌种A的数量为________个/mL。

(4)果酒发酵罐与果醋发酵罐需要控制的温度条件差异是

________________________________________________________________________。

8.回答下列微生物培养的问题：

(1)如表是某培养液的成分及含量，该培养液培养的微生物同化作用类型是________；若用此培养液培养固氮微生物，则应除去的成分是________，应加入的物质是________。

编号

成分

含量

①

(NH4)HCO3

0.5 g ②

KH2PO4

3.0 g ③

CaSO4

0.5 g ④

FeCl2

0.5 g ⑤

维生素

少许

⑥

水

1 000 mL (2)下表为牛肉膏蛋白胨培养基的成分列表，据此回答：

成分

含量

牛肉膏

0.5 g 蛋白胨

1 g NaCl 0.5 g H2O 100 mL ①牛肉膏、蛋白胨在培养基中的作用是提供_________、_______、_______等营养。

②要用表中所给材料配制观察细菌菌落状况的培养基，还需添加的成分是________。

③表中各成分含量确定的原则是___________________________________________。

④培养基配制好后，分装前应进行的工作是________。

⑤从配制培养基直到培养完成，所采用的预防杂菌感染的方法是______________、______________、______________等。

(3)微生物接种的方法很多，最常用的是______________和________。

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