复习与测试优质课教学设计

课题1 微生物的实验室培养

一、课前预习

（一）预习内容

阅读教材14-20页

（二）预习目标

1．通过预习能说出培养基的种类和成分，对于一些常考微生物的特殊要求要铭记在心；

2．通过阅读P15“（二）无菌技术”内容，能知道如何才能避免杂菌的污染；

3．知道消毒和灭菌的区别及方法，掌握高压蒸汽灭菌和干热灭菌的方法；

4．掌握培养基的制备方法；

5．掌握倒平板操作技术、平板划线操作和稀释涂布平板法。

（三）预习检测

一、培养基

1．概念：人们按照微生物对 的不同需求，配制出供其 的营养基质叫培养基。按照物理性质可分为 培养基和 培养基。实验室中最常用的培养基之一是 。 2．营养构成：各种培养基一般都含有 、 、 和 ，此外还要满足微生物生长对 、 以及 的要求。 3．培养乳酸杆菌时需在培养基中添加 、培养霉菌时需将培养基PH调至 、培养细菌时需将PH调至 、培养厌氧微生物则需提供 条件。

【探究释疑1】从细胞的化学元素组成来看，培养基中为什么都含有这些营养成分？

二、无菌技术：阅读“无菌技术”及P85附录4，讨论回答下列问题：

(一)获得纯净培养物的关键是 ，具体操作如下：

1．对实验操作的 、操作者的 和 ，进行清洁和消毒。

2．将用于微生物培养的 、 和 等器具进行 。

3．为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在 附近进行。

4．实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与 相接触。

(二)消毒和灭菌

1．消毒是指 。常用的方法有 、 、 消毒法。

2．灭菌是指 。常用的方法有： 、 、 灭菌。分别适用于哪些用具？

【探究释疑2】无菌技术除了防止培养物被污染外，还具有的目的是什么？

【探究释疑3】利用干热灭菌箱对玻璃器皿灭菌时物品不能摆得太挤，目的是什么？

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【探究释疑4】物品装入高压蒸汽灭菌锅灭菌后，要首先打开排气阀，煮沸并排除锅内冷空气，其目的是 ；随后关闭排气阀继续加热，气压升至 ，温度为 ，并维持 min；最后切断热源，使温度自然降温，气压务必降至

时打开锅盖，其目的是防止 。

实验操作----大肠杆菌的纯化培养

本实验所用的培养基是 ，本实验可分成 和 两个阶段进行。

一、制备牛肉膏蛋白胨固体培养基

1.制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的操作步骤是：

、 、 、 、 。

【探究释疑5】在制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的称量操作中，动作要迅速，原因是什么？溶化操作中需要不断用玻璃棒搅拌的目的是什么？

【探究释疑6】牛肉膏和蛋白胨主要为微生物提供什么等营养物质？

2．倒平板：待培养基冷却至 ℃左右时在酒精灯火焰附近操作进行。其过程是：

①在火焰旁右手拿 ，左手 ；

②使锥形瓶的瓶口 ；

③左手将培养皿 ，右手 ，立刻盖上皿盖。

④待平板冷却凝固后，将平板 。

【探究释疑7】锥形瓶的瓶口通过火焰的目的是什么？

【探究释疑8】平板冷凝后，为什么要将平板倒置？

【探究释疑9】若皿盖和皿底之间粘有培养基，则该平板能否培养微生物？为什么？

【探究释疑10】试管为什么要加塞棉塞？

二、纯化大肠杆菌

微生物接种：最常用的是 法和 法。另外还有穿刺接种和斜面接种等。

1．平板划线法是 的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。其操作步骤是：

①将 在酒精灯火焰上灼烧直至 。

②在酒精灯火焰旁冷却接种环，并打开大肠杆菌的菌种试管的棉塞。

③将菌种试管口通过火焰达到 的目的。

2

④将冷却的接种环伸入到 。

⑤将菌种试管口再次通过火焰后塞上棉塞。

⑥将皿盖打开一条缝隙，把接种环 ，盖上皿盖，不要划破培养基。

编号

成分

含量

⑦灼烧接种环，冷却后从 ①

粉状硫

10g 划线。重复上述过程，完成三、四、五区域内划线。注意不要将 ②

（NH4）2SO4

0.4g 相连。

③

K2HPO4

4.0g ⑧将平板 培养。

④

MgSO4

9.25g 【探究释疑11】取菌种前灼烧接种环的目的是什么？

⑤

FeSO4

0.5g

⑥

CaCl2

0.5g 2．稀释涂布平板法则是将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将 ⑦

H2O 100ml 进行培养。当稀释倍数足够高时，即可获得单个细菌形成的标准菌落。系列稀释操作：

123456①取分别盛有 mL水的试管6支 ，编号10、10、10、10、10、10

。

1②用灼烧冷却的移液管吸取 mL菌液注入编号为10试管中，并吹吸3次使之混匀。

122③从10倍液中吸取 mL菌液注入到编号为10试管内吹吸均匀，获得10倍液。依此类推。

【探究释疑12】系列稀释操作的注意事项是什么？

【探究释疑13】若某培养基上出现了3种特征不同的菌落是什么原因？

【探究释疑14】频繁使用的菌种利用什么法保存？长期保存菌种的方法是什么？

二、检测与反馈（课堂完成）

1.下列关于微生物营养的说法，正确的是 ( ) A．同一种物质不可能既作碳源又作氮源 B．凡是碳源都能提供能量

C．除水以外的无机物仅提供无机盐 D．无机氮源也能提供能量

2.细菌培养过程中分别采用了高压蒸气、酒精、火焰灼烧等几种不同的处理，这些方法依次用于杀灭哪些部位的杂菌 ( ) A．接种针、手、培养基 B．高压锅、手、接种针

C．培养基、手、接种针 D．接种针、手、高压锅

3.以下关于制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的叙述错误的是 ( ) A．操作顺序为计算、称量、溶化、倒平板、灭菌

B．将称好的牛肉膏连同称量纸一同放入烧杯

C．待培养基冷却至50℃左右时进行倒平板

D．待平板冷却凝固约5～10 min后将平板倒过来放置

4.下面对发酵工程中灭菌的理解不正确的是（ ）

A.防止杂菌污染 B.消灭杂菌 C.培养基和发酵设备都必须灭菌 D.灭菌必须在接种前

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5.下表是某微生物培养基成分，请据此回答：

（1）右表培养基可培养的微生物类型是 。

（2）若不慎将过量NaCl加入培养基中。如不想浪费

此培养基，可再加入 ，用于培养 。

（3）若除去成分②，加入（CH2O），该培养基可用于培

养 。

（4）表中营养成分共有 类。

（5）不论何种培养基，在各种成分都溶化后分装前，要

进行的是 。

（6）右表中各成分重量确定的原则是 。

（7）若右表培养基用于菌种鉴定，应该增加的成分是 。

【解析】对于一个培养基，它能培养何种微生物，要看它的化学成分。当然这只适用于合成培养基，如果是一个天然培养基就不能从培养基的成分上区分它是培养何种微生物的。分析化学成分要从营养物质的类型出发。右表中的营养物质有水、无机盐、氮源三类，缺乏碳源和特殊营养物质。对特殊营养物质，有的微生物是不需要的，但没有微生物是不需要碳源的。该培养基中没有碳源，说明培养的微生物是从空气中获得碳源的，即可培养的微生物就是自养型微生物了。该培养基中加入了过量食盐，就可以成为金黄色葡萄球菌鉴别培养基，但金黄色葡萄球菌是异养型微生物，这个培养基就还需要加入有机碳源。该培养基若加入（CH2O），培养基中就有了碳源，但除去成分②，却使培养基中没有了氮源，这时就只能用于培养固氮微生物了。对于菌种鉴定，往往用的是固体培养基，而表中没有凝固剂，需要加入常见的凝固剂——琼脂。

【答案】（1）自养型微生物 （2）含碳有机物 金黄色葡萄球菌 （3）固氮微生物 （4）3 （5）调整pH （6）依微生物的生长需要确定 （7）琼脂（或凝固剂）

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