课题3　分解纤维素的微生物的分离评课稿

分解纤维素的微生物的分离教案

一、教材分析

教材首先介绍了纤维素的化学组成以及纤维素在生物圈的广泛分布，由此转入到如何对纤维素进行有效利用的问题。说明了微生物能利用纤维素是因为能产生纤维素酶，因此对纤维素的利用离不开对分解纤维素的微生物的研究。最后，教材点明了本课题的研究主题，即从土壤中分离能够分解纤维素的微生物。通过对课题中实验设计思路的深入学习，要求学生掌握从土壤中分离某种特定微生物的操作技术。

二、学习目标

1、知识与技能

（1）能简单叙述纤维素酶的种类和作用。

（2）说出刚果红染色法及其原理

（3）掌握从土壤中分离某种特定微生物的操作技术。

2、过程与方法

分析分离分解纤维素的微生物的实验流程，掌握实验操作的原理。

3、情感、态度与价值观

通过自主设计、完成实验，培养勇于探究的科学精神。

三、学习重难点 1．重点：简述纤维素酶的组成及作用。说出刚果红染色法及其原理。

2．难点：从土壤中分离出分解纤维素的微生物的方法。

四、教学准备

多媒体课件、板书

五、教学过程

【复习回顾】

【基础知识】

阅读纤维素与纤维素酶的相关知识，讨论回答下列问题：

1、组成纤维素的基本单位？ 2、自然界中纤维素含量最高的天然产物？ 3、纤维素能被土壤中某些微生物分解利用的原因？ 4、纤维素酶的组成？ 5、写出纤维素酶分解纤维素的反应式。 （一）纤维素和纤维素酶 1、棉花是自然界中纤维素含量最高的天然产物。纤维素是一种由葡萄糖相连而成的高分子多糖类化合物。 2、纤维素酶的组成及作用：纤维素酶是一种复合酶，一般认为它至少包括三种组分，即C1酶、CX酶和葡萄糖苷酶，前两种酶使纤维素分解成纤维二糖，第三种酶将纤维二糖分解成葡萄糖。

即

【延伸】草食性动物是怎样消化食物中纤维素的？

在草食性动物等的消化道内，共生有分解纤维素的微生物，其原理也是产生纤维素酶而分解纤维素，而人没有分解纤维素的能力。

【实验】纤维素酶分解纤维素的实验

①2支20mL的试管

②各加入一张滤纸条

③各加入pH4.8，物质量为0.1mol/L的醋酸－醋酸钠缓冲液11ml和10ml ④在乙试管中加入1mL纤维素酶（70-80U／ML） ⑤两支试管固定在锥形瓶中，放在

140r/min的摇床上振荡1h ⑥结果：乙试管的滤纸条消失

讨论：乙试管的滤纸条为什么会消失？甲试管的作用是什么？

（二）纤维素分解菌的筛选 1、方法：刚果红染色法

刚果红能与纤维素这样的多糖物质形成红色复合物，而不与水解后的纤维二糖和葡萄糖发生这种反应。 2、纤维素分解菌筛选方法的原理

当我们在含有纤维素的培养基中加入刚果红时，刚果红能与培养基中的纤维素形成红色复合物。当纤维素被纤维素酶分解后，刚果红-纤维素的复合物就无法形成，培养基中就会出现以纤维素分解菌为中心的透明圈，这样我们就可以通过是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌。

【实验设计】

（一）分离分解纤维素的微生物的实验流程

1、土壤取样

选择纤维素丰富的环境，依赖于生物与环境的互相依存关系，在富含纤维素的环境中纤维素分解菌的含量相对提高，因此从这种土壤中获得目的微生物的几率要高于普通环境。

2、选择培养 （1）目的：增加纤维素分解菌的浓度，以确保能够从样品中分离到所需要的微生物 （2）操作：将土样加入装有30ml选择培养基的锥形瓶中，将锥形瓶固定在摇床上，在一定温度下震荡培养1～2天，直至培养液变浑浊。也可重复选择培养。

3、梯度稀释

按照课题1的稀释操作方法，将选择培养后的培养液进行等比稀释101~107倍，之后，将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上。 4、将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上 （1）制备培养基：参照旁栏中的比例。

（2）倒平板操作。

（3）涂布平板：将稀释度为104～106的菌悬液各取0.1ml涂布在培养基上，30℃倒置培养，菌落周围会出现明显的透明圈。 5、挑选产生透明圈的菌落

参照课本刚果红染色法，挑选产生透明圈的菌落，一般即为分解纤维素的菌落 （二）结果分析与评价

1.培养基的制作是否合格以及选择培养基是否筛选出菌落

2.分离的结果是否一致

（三）课题延伸

1．为了确定分离得到的是纤维素分解菌，还需要进行发酵产纤维素酶实验，纤维素酶的发酵方法有液体发酵和固体发酵两种。

2．纤维素酶的测定方法，一般是对纤维素酶分解滤纸等纤维素产生的葡萄糖含量进行定量测定。