课题2　土壤中分解尿素的细菌的分离与计数ppt课件教学实录

土壤中分解尿素的细菌的分离与计数

一、教学目的

1..掌握利用选择培养基分离细菌的方法。

2.相关技术解决生产生活中有关微生物的计数。

3.分析研究思路的形成过程。

4.认识微生物无处不在，养成良好的卫生习惯。

二、教学重难点

1.重点：分离思路及选择培养基的配制。

2.难点：对分解尿素的细菌的计数。

三、教学方法：启发式教学

四、教学工具：多媒体课件

五、教学过程

（一）背景介绍：

1. 尿素是一种重要的氮肥，农作物不能直接吸收利用，而是首先通过土壤中的细菌将尿素分解为氨和CO2

。细菌能合成脲酶

。

2. 提问：

科学家如何筛选耐热细菌？

热泉的高温条件淘汰了绝大多数微生物。

这为实验室中筛选微生物提供了思路。我们可以人为提供有利于目的菌株生长的条件（包括营养、温度、PH等），同时抑制或阻止其他微生物生长

。

（二）尿素分解菌的筛选及计数：

1. 分析课本上土壤中分解尿素的细菌的分离的培养基成分，思考以下问题：

从物理性质看此培养基属于哪类？

固体培养基

在此培养基中哪些作为碳源、氮源？

碳源：葡萄糖

氮源：尿素

筛选原理是什么？

培养基的氮源为尿素，只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，以尿素作为氮源。

2. 如何设置对照说明该培养基起到了选择作用？

对照组将等量相同的土壤稀释液涂布在牛肉膏蛋白胨培养基上，与实验组放在相同条件下培养。若实验组菌落数目明显小于对照组，则说明起到了选择作用。

3.

如何统计菌落数目？

（1）显微镜下直接计数：利用血球计数板(血细胞计数板），在显微镜下计算一定容积里样品中微生物的数量。（不能区分死菌和活菌）

（2）间接计数法（活菌计数法）

在稀释度足够高时，微生物在固体培养基上所形成的一个菌落是由一个单细胞繁殖而成的，即一个菌落代表原先的一个单细胞。

常用方法：稀释涂布平板法。

每克样品中的菌落数＝(C÷V)×M 4.

阅读课本上同学的操作实例，思考课本上的问题。

总结：在设计实验时，需涂布至少3个平板，作为重复组，以增强实验的说服力与准确性。分析结果时要考虑所设置的重复组的结果是否一致。若不一致，则意味着操作有误，需要重新实验。

（三）实验设计

1. 实验流程：

配制土壤溶液

菌落计数

系列稀释

涂布平板与培养

2.

土壤微生物主要分布在距地表3～8cm的近中性土壤中，约70％～80％为细菌。分离不同的微生物采用不同的稀释度，其原因是不同微生物在土壤中含量不同，其目的是保证获得菌落。数在30～300之间、适于计数的平板。细菌稀释度为104、105、106，放线菌稀释度为103、104、105，真菌稀释度为102、103、104。

培养不同微生物往往需要不同培养温度。细菌一般在30～37℃培养1～2d，放线菌一般在25～28℃培养5～7d，霉菌一般在25～28℃的温度下培养3～4d。在菌落计数时，每隔24h统计一次菌落数目。选取菌落数目稳定时的记录作为结果，以防止因培养时间不足而导致遗漏菌落的数目。

菌落的特征包括

形状、大小、隆起程度、颜色

等方面。

3.

实验过程

（1）取土样用的小铁铲和盛土样的的信封在使用前都要灭菌。

（2）在火焰旁称取土壤

10 g。将称好的土样倒入盛有90mL无菌水的锥形瓶中，塞好棉塞。

（3）在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在火焰旁进行。

（4）实验时要对培养皿作好标记。注明培养基类型、培养时间、稀释度、培养物等。

（5）为了提高效率，应当事先规划时间。

4．结果分析与评价

（1）对分离的菌种作进一步的鉴定，还需要借助生物化学的方法。

（2）在细菌分解尿素的化学反应中，细菌合成的脲酶将尿素分解成了氨。氨会使培养基的PH 升高

。因此，可以通过检测培养基

pH 变化来判断该化学反应是否发生。在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红

指示剂。培养某种细菌后，如果PH升高，指示剂将变红，说明该细菌能够分解尿素

。

（四）课堂总结及练习