课题2　土壤中分解尿素的细菌的分离与计数PPT配套优秀教学设计内容

土壤中分解尿素的细菌的分离与计数教案

四川省仁寿县清水高中校

夏秀萍

课题目标：研究培养基对微生物的选择作用，进行微生物数量的测定。

课题重点：对土样的选取和选择培养基的配制。

课题难点：对分解尿素的细菌的计数. 教学设计：三课时，这节课的教学内容，细菌的计数每克样品中的菌株数=（C÷V）×M 教学过程

复习（一）：选择培养基：是在培养基中加入某种化学物质，使之抑制某些细菌生长，而利于另一些细菌的生长，从而使后者从含有杂菌的标本中分离出。

（1）在培养基中加入某些化学物质

（2）改变培养基的营养成分

（3）改变微生物

的培养条件

鉴别培养基：主要用于分离并区分不同的细菌。

复习二;分离纯化细菌的方法

（1）平板划线法

分离不计数

（2）稀释涂布平板法（活菌计数）

a先稀释，b再涂布

计数方法

1、

显微镜直接计数（

不分死活）

2、血球计数法

3、标志重捕法计数

4、样方法、

5、记名计算法

6、目测估计法

区别平板划线法

平板划线法

和稀释涂布平板法

稀释涂布平板法

接种工具

作用

接种环

分离

涂布器

分离计数

共同点

1、都使用固体培养基2、都在火焰旁接种，避免空气中的微生物混入培养基

每克样品中的菌株数=（C÷V）×M，其中，C表示某稀释度下的平板上生长的平均菌落数，V表示涂布平板时所用的稀释液的体积，M表示稀释倍数

例：在105稀释度下平板上生长的平均菌落数为50，(涂布平板时所用稀释液的体积为0.1mL)则每克样品中的菌落数是（

）

每克样品中的菌落数=（C÷V）×M=(50÷0.1)×105=500×105=5×107。

学生动手练习

1、某同学在101、102、103倍稀释液的平均菌落数为2760、295和46,则菌落总数(个/mL)为(

) A.2.76×104

B.2.95×104

C.4.6×104

D.3.775×104

稀释涂布平板法图例展示。

题干思路分析

菌落计数法，注意是计算不同稀释度的平均菌落数。首先选择平均菌落数在30～300之间的，当只有一个稀释倍的平均菌落数符合此范围时，则以该平均菌落乘以稀释倍数即为该样品的细菌总数（例如接种1ML，稀释度2760X101,2000X102,295X103）；若有两个稀释倍的平均菌落数均在30～300之间，则按两者菌落总数之比值来决定，若比值小于2应采取两者的平均数，若大于2，则取其中较小的菌落总数。本题295、46在30～300之间，46×103与295×102比值为1.6。应取二者平均数(46×103＋295×102)÷2＝3.775×104。若所有稀释倍数的菌落数均不在30～300之间，则应以最接近300或30的平均菌落乘以稀释倍数。（A29X105

B

18X106）选A 温馨提示：因为土壤中各类微生物的数量(单位:株/kg)是不同的，例如在干旱土壤中的上层样本中:好氧及兼性厌氧细菌数约为2 185万，放线菌数约为477万，霉菌数约为23.1万。因此，为获得不同类型的微生物，就需要按不同的稀释度进行分离，同时还应当有针对性地提供选择培养的条件。而稀释的原则是保证平板上的菌落数在30到300之间。

土壤取样时，

（能/不能）直接选择表层土，用于取样的小铁铲和盛土样的信封在使用前必须

，称取和稀释土样都应该在

完成。测定土壤中细菌数量时，一般选用

倍的稀释液进行涂布平板并培养，温度一般控制在

，培养时间一般

天；测定土壤中放线菌数量时，一般选用

倍的稀释液进行涂布平板并培养，温度一般控制在

，培养时间一般

天；测定土壤中真菌数量时，一般选用

倍的稀释液进行涂布平板并培养，温度一般控制在

，培养时间一般

天。若要初步判断培养基上的两个细菌是否为同种，可以根据

的特征，这些特征主要包括其

、

、

、

。

选择30---300的原因主要包括以下几点：①稀释度过低，容易计数不准确，造成实验误差。②稀释度过低，可能导致两个或者两个以上的菌体连在一起形成一个菌落，造成实验误差。③稀释度过低，会造成培养基中的微生物的种内斗争、种间竞争激烈，使得一些个体无法形成菌落，而造成实验误差。④稀释度过高，形成的菌落数过少，不具有代表性。该方法统计的菌落数往往比活菌的实际数目

，原因是

在用该方法进行菌落计数时，每个稀释度下至少涂布

个平板，当几个平板上的菌落数都在30---300时，且数据相差不是很大的情况下，应该用几个数据的

作为该稀释度下的菌落值做计算。

灵活运用：某同学在稀释倍数为106的培养基中测得平板上菌落数的平均值为234，那么每克样品中的菌落数是(涂布平板时所用稀释液的体积为0.1mL)（

）(涂布平板时所用稀释液的体积为0.2mL)（

）

A．2.34×108

B．2.34×109

C．234

D．23.4

E11.7×109

知识补充：显微镜直接计数的计算公式可描述为：

1ml原液中的菌体数=每中格平均菌落数×25（或16）×

×

=每小格平均菌体数×400×

×

。该方法得到的数据比实际的活菌数目

。

总结：每克样品中的菌株数=（C÷V）×M，其中，C表示某稀释度下的平板上生长的平均菌落数，V表示涂布平板时所用的稀释液的体积，M表示稀释倍数

学生完成相关的课后练习。并温习该教案相关的知识。

谢谢大家