课题2　土壤中分解尿素的细菌的分离与计数优秀教案说课稿

专题2课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数

【学习目标】

研究培养基对微生物的选择作用，进行微生物数量的测定。

【学习重点与难点】

1．对土样的选取和选择培养基的配制。

2．对分解尿素的细菌的计数。

【知识链接】

尿素[CO(NH2)2]最初是从人的尿液中发现的，后来也是人工合成的第一个有机物，广泛存在于自然界中。尿素是一种有机态氮肥，经过土壤中细菌将尿素分解成氨之后才能被植物吸收利用。

【新知预习】

一、研究思路

1．筛选菌株[来源:Z,xx,k.Com][来源:学科网]

尿素是一种重要的氮肥，农作物________直接吸收利用，而是首先通过土壤中的细菌将尿素分解为________和CO2，才能被植物利用，这是因为土壤中的这些细菌能合成________。因此，利用这一特点，可以将这些细菌从土壤中筛选出来。

(1)实验室中微生物的筛选的原理：人为提供有利于________生长的条件(包括营养、________、pH等)，同时________或________其他微生物生长。

(2)选择培养基：在微生物学中，将允许________种类的微生物生长，同时________或________其他种类微生物生长的培养基，称作选择培养基。

2．统计菌落数目

常用来统计样品中活菌数目的方法是______________。当样品的________足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中________。通过统计平板上的________，就能推测出样品中大约含有多少活菌。为了保证结果准确，一般选择菌落数在________的平板进行计数。这种方法统计的菌落数比活菌的实际数目________。这是因为当两个或多个细胞在一起时，平板上观察到的只是________个菌落。因此，统计结果一般用________而不是活菌数来表示。除此之外，________________也是测定微生物数量的常用方法。另外，细菌的数目还可以通过________法来测定，例如，测定饮水中大肠杆菌数量的方法是将________的水用细菌过滤器过滤后，将滤膜放到________培养基上培养，大肠杆菌菌落

呈现________色，通过计数得出水样中大肠杆菌的数量。你认为在该实验中至少应取________个水样。

思考：

如何从平板上的菌落数推测出每克样品中的菌落数？

3．设置对照

设置对照的主要目的是排除实验组中________________________________________对实验结果的影响，提高实验结果的________。例如为了排除培养基是否被杂菌污染了，需以培养该种生物的________培养基作为空白对照。

对照实验是指除了________的条件外，其他条件都____ ____的实验。满足该条件的称为________组，未满足该条件的称为________组。

二、实验设计

实验设计的内容包括________、材料用具、_____________________________________ 和时间安排等。关于土壤中某样品细菌的分离与计数的实验操作步骤如下：

1．土壤取样

从肥沃、湿润的土壤中取样。应先铲去________3 cm左右，再取样，将样品装入事先准备好的________中。

2．样品的稀释

样品的__________将直接影响平板上生长的菌落数目。由于不同微生物在土壤中________不同，因此，分离不同的微生物采用不同的________范围，其目的是保证获得菌落数在________之间、适于计数的平板。细菌稀释度为__________，放线菌稀释度为10、10、10，真菌稀释度为____________。第一次实验时，可以将稀释的范围________一点，以保证能从中选择出适于计数的平板。

3．微生物的培养与观察

培养不同微生物往往需要不同培养温度。细菌一般在________°C培养1～2 d，放线菌一般在25～28 °C培养5～7 d，霉菌一般在________°C的温度下培养3～4 d。在菌落计数时，每隔________h统计一次菌落数目。选取__________时的记录作为结果，以防止因________不足而导致遗漏菌落的数目。

一般来说，在________的培养条件下(相同的________、温度及________)，同种微生物表现出稳定的菌落特征。这些特征包括________、大小、________、颜色等方面。

思考：

为什么分离不同的微生物要采用不同的稀释度？

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三、对分离得到的分解尿素的细菌的鉴定

在细菌分解尿素的化学反应中，细菌合成的_________________将尿素分解成了________。氨会使培养基的碱性________，pH________。因此，我们可以通过检测培养基pH变化来判断该化学反 应是否发生。在以________为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂。培养某种细菌后，如果pH________，指示剂将变________，说明该细菌能够分解尿素。

思考：如果分离得到的分解尿素细菌的鉴定结果是脲酶阳性，则说明什么？

【课堂探究】

例1:

“筛选”是分离和培养生物新类型常用的手段，下列有关技术中不能筛选成功的是( ) A．在全营养的培养基中，筛选大肠杆菌

B．在尿素固体培养基中，筛选能够分解尿素的微生物[来源:Zxxk.Com]

C．用纤维素为唯一碳源的培养基，筛选能够分解纤维素的微生物

D．在培养基中加入不同浓度的氯化钠，筛选抗盐突变体植物

例2:

尿素是尿素分解菌的氮源，因此在配制培养尿素分解菌的培养基时(

) A．葡萄糖在培养基中含量越多越好 B．尿素在培养基中含量适中最好

C．培养基中的尿素属于无机氮源

D．尿素在培养基中越多越好

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类型一

菌落数目的统计方法

1．稀释涂布平板法(又称_____ __法) (1)原理：当样品的_____ __足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。

(2)操作：第一，设置重复组，增强实验的说服力与准确性。为使结果接近真实，需将同一浓度溶液涂布到3个或3个以上的平板中，培养后计数平均值。

第二，为了保证结果准确，一般选择菌落数在______ _的平板进行计数。若设置的重复组中结果相差太远，意味着操作有误，需重新实验。

(3)计算公式：每克样品中的菌株数＝(C÷V)×M，其中C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(mL)，M代表稀释倍数。

2．显微镜直接计数法

(1)原理：利用特定细菌计数板或血细胞计数板，在_______镜下计算一定容积的样品中微生物的数量。 (2)操作：计数板是一特殊的载玻片，上面刻有面积为1 mm和高为0.1 mm的计数室(或容积为2 mm×2 mm×0.1 mm的计数室)，在1 mm的计数室内又被划成25(或16)22

个中格，每个中格又进一步划分成16(或25)个小格，计数室都由400个小格组成。将稀释后的样品滴在计数板上，盖上盖玻片，然后在显微镜下计数4～5个中格的细菌数，并求出每小格所含细菌的平均数。

在直接计数中也需选择恰当的稀释度，也要求计数尽量准确，接近真实值，其方法：一是计数4～5个中格中菌体数求平均值；二是计数每个中格内菌体数目时，遵循“计上不计下，计左不计右”的原则

。

(3)计算公式：每毫升原液所含细菌数＝每小格平均细菌数×400×10 000×稀释倍数。

两种计数方法相比较，稀释涂布平板法统计的菌落数往往比活细菌数目低。原因是：一方面由于两个或多个细菌连在一起时，稀释涂布培养后只能观察到一个菌落；另一方面统计结果只是活细菌产生的菌落数，而未包括死细菌数目。

例3:

用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数，在对应稀释倍数为10的培养基中，得到以下几种统计结果，正确的是 (

) A．涂布了一个平板，统计的菌落数是230 B．涂布了两个平板，统计的菌落数是215和260，取平均值238 C．涂布了三个平板，统计的菌落数分别是21、212和256，取平均值163 D．涂布了三个平板，统计的菌落数分别是210、240和250，取平均值233 例4:

下列有关菌落数目统计的说法中不正确的是 ( ) A．活菌计数法是测定微生物数量的唯一方法

B．当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌

C．为了保证结果准确，一般选择菌落数在30～300的平板进行计数

D．统计的菌落数往往少于活菌的实际数目

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