课题2　土壤中分解尿素的细菌的分离与计数课时教学实录

选修1专题2课题2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数（预习）

【预习目标】

了解有关选择培养基的基础知识。

【知识梳理】

（一）筛选菌株

1.实验室微生物的筛选原理

2.选择培养基

（1）概念：

（2）作用：加入青霉素的培养基： 不生长， 等真菌能生长。

不加含碳有机物的无碳培养基：分离 型微生物。

（二）统计菌落数目

1.显微镜直接计数

（1）原理：利用特定的 或 ，在 下计算一定容积的样品中微生物的数量。

（2）做法：每一个大方格边长为 1mm ，则每一大方格的面积为1mm，盖上盖玻片后，载玻片与盖玻片之间的高度为0.1mm，所以计数室的容积为0.1mm。

（3）优缺点：

优点： 缺点： 2.间接计数（活菌计数法）

（1）原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个 ，来源于样品稀释液中的一个活菌，通过统计平板上的 数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。

（2）计数：

C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(mＬ)，M代表稀释倍数。

计算公式：每克样品中的菌落数＝ （二）实验设计

土壤中分解尿素的细菌的分离与记数步骤：1. ；2. ； 3. ；4. ；5. 。 （三）操作提示

1.无菌操作

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（1）取土用的小铁铲的盛土样的信封在使用前都需要 。

（2）应在 旁称取土壤。在 附近将称好的土样倒入锥形瓶中，塞好棉塞。

（3）在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在 旁操作。 2.做好标记

注明培养基种类、培养日期、平板培养样品的稀释度等。

3.规划时间 提高效率，在操作时更加有条不紊。

【课前热身】

1．下列生物学实验操作，能够顺利达到实验目的的是（ ）

A．在固体培养基上涂布稀释的大肠杆菌培养液获得单菌落

B．在接种酵母菌的新鲜葡萄汁中通入无菌空气制作果酒

C．土壤浸出液接种于牛肉膏蛋白胨培养基上筛选分解尿素的细菌

D．在分离土壤中的尿素分解菌实验中，采集的土样经高温灭菌后，可以用于制取土壤稀释液

2．分离土壤中分解尿素的细菌，对培养基的要求是（ ）

①加尿素②不加尿素③加琼脂④不加琼脂⑤加葡萄糖⑥不加葡萄糖⑦加硝酸盐⑧不加硝酸盐

A．①③⑤⑦ B．①③⑤⑧

C．②④⑥⑧ D．①④⑥⑦

3.稀释涂布平板法分离分解尿素的细菌时使用的涂布器应保存在体积分数为70%的酒精中,取出后又要放在酒精灯火焰上引燃,这两步分别属于什么技术?（ ）

A．灭菌、灭菌 B．消毒、消毒

C．灭菌、消毒 D．消毒、灭菌

4.从土壤中分离以尿素为氮源的细菌,下列实验操作不正确的是（ ）

A．将土壤用无菌水稀释,制备10～10稀释倍数的土壤稀释液

B．将不同浓度的土壤稀释液涂布于不同平板上

C．用加入刚果红指示剂的选择培养基筛选分解尿素的细菌

D．从周围出现红色环带的菌落中挑取能够分泌脲酶的菌株

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