课题2　土壤中分解尿素的细菌的分离与计数优秀教学实录

课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离和计数

【学习目标】

1.研究培养基对微生物的选择作用

2.进行微生物数量的测定

3.分析研究思路的形成过程，找出共性和差异性

【重点难点】

课题重点：对土样的选取和选择培养基的配制

课题难点: 对分解尿素的细菌的计数

【知识链接】

1．培养基一般都含有 、 、 、 四类营养物质，另外还需要满足微生物生长对 、 以及 的要求。

2.培养基的分类：按照物理性质可以分为 、 、 ；按照化学性质分为 和 ；

按照用途分为 和 。

3.尿素可以为农作物提供 肥，但是只有被 分解成 之后，才能被植物吸收利用。

4.以土壤中能分解尿素的细菌为研究对象，要达到的两个主要目的是：

⑴ ；⑵ 。

5．PCR（ ）是一种在体外将 。此项技术的自动化，但是在合成的过程中需要在93℃的条件下，所以要求使用耐高温的

【导学过程】

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（一）筛选菌株

1.原理: 人为提供有利于 生长的条件（包括 等），同时抑制或阻止其他微生物生长。

2.方法：选择培养基

定义：在微生物学中，将允许 的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基，称作选择培养基。

配制的的依据：

①在培养基中加入某种化学物质可以做到这一点，加入 可以分离出酵母菌和霉菌。加入高浓度的食盐可得到 。这里的加入是在培养的培养成分的基础上加入的。

②培养基中的营养成分的改变也可达到分离微生物的目的。如培养基中缺乏 源时，可以分离固氮微生物。

③当培养基的某种营养成分为特定化学成分时，也具有分离效果。

④改变微生物的培养条件，

也可以达到分离微生物的目的，如将培养基放在 环境中培养只能得到耐高温的微生物。

讨论1：怎样找耐高温的酶呢？

讨论2.如何找到能够分解石油的细菌？

(二)统计菌落数目

（1）测定微生物数量的常用方法有 和 。

（2）稀释涂布平板法统计样品中活菌的数目的原理

当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活细菌。为了保证结果准确，一般设置 个平板，选择菌落数在 的

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平板进行计数，并取 。统计的菌落数往往比活菌的实际数目低，因此，统计结果一般用菌落数而不是活菌数来表示。

讨论3.完成课本P22页思考题

讨论4. 完成课本P22页旁栏思考题？

（三）

设置对照

设置对照的主要目的 对照试验的定义：

讨论5.完成课本P23页A同学的两个对照试验？

（四）实验设计

实验设计包括 ，所需 、 、用具和药品，具体的 以及时间安排等的综合考虑和安排。

（1）土壤取样

从富含有机物、潮湿、pH≈ 的土壤中取样。铲去 ，在距地表约 cm的土壤层取样。

（2）制备培养基

准备牛肉膏蛋白胨培养基和用 作为氮源的选择培养基。牛肉膏蛋白胨培养基作为 ，用来判断选择培养基是否起到了选择作用。

（3）微生物的培养与观察

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将土样以1、101、102……依次等比稀释至107稀释度，按照浓度从低到高的顺序涂布平板， （是否）更换移液管。对于不同的微生物要选择不同的稀释浓度，测定细菌一般选择 ，测定真菌一般选择 ，测定放线菌一般选择 。注明培养基种类、培养日期以及平板培养样品的稀释度。将涂布好的培养皿放在 ℃温度下培养。随着培养时间的延长，会有不同的菌产生。比较牛肉膏蛋白胨培养基和选择培养基中菌落的数量、形态等，并做好记录。

讨论6.为什么分离不同的微生物需要不同的稀释浓度？

（4）细菌的计数

当菌落数目稳定时，进行计数，防止因培养时间不足而导致遗漏菌落的数目。求出平均值，根据平板所对应的稀释度计算出样品中细菌的数目。

（五）操作提示

1.本实验中要注意那些无菌操作？

2. 在进行多组实验过程中，应注意做好标记，其目的是什么？应标记哪些内容？怎样操作更有利于实验的进行？

3.如何对分离的菌种作进一步的鉴定？

【课后小结】

资料来源：http://zhdduya100.taobao.com/QQ：1805986694，597161994

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