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课题2　土壤中分解尿素的细菌的分离与计数教案教学设计导入整理｜教案在线预览

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正文

一、课题背景：

1、尿素的利用：

尿素〔CO（NH2）2〕是一种重要的

农业氮肥。尿素不能直接被农作物吸收。

土壤中的细菌将尿素分解成氨之后才能

被植物利用。

2、细菌利用尿素的原因：

土壤中的细菌分解尿素是因为它们能合成脲酶。

CO（NH2）2

+ H2O

NH3 + CO2

3、常见的分解尿素的微生物：

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芽孢杆菌、小球菌、假单胞杆菌、克氏杆菌、棒状杆菌、梭状芽孢杆菌，某些真菌和放线菌也能分解尿素。

4、课题目的：

（1）从土壤中分离出能够分解尿素的细菌；

（2）统计每克土壤样品中究竟含有多少这样的细菌。

二、研究思路：

1、筛选菌株：

（1）自然界中目的菌株的筛选：

①依据：

根据它对生存环境的要求，到相应的环境中去寻找。

②实例：

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DNA多聚酶链式反应（PCR）是一种在体外将少量DNA大量复制的技术，此项技术要求使用耐高

温（93℃）的DNA聚合酶。

美国微生物学科布鲁克（T.Brock）

1966年在美国黄石国家公园的一个热

泉中发现Taq细菌。从热泉中筛选出来

的Taq细菌中分离得到耐高温Taq的DNA聚合酶。

为什么Taq耐热细菌Taq细菌能从热泉中筛选出来呢？

热泉中70～80℃的高温条件淘汰了绝大多数微生物，而使耐热的Taq细菌脱颖而出。

2）实验室中目的菌株的筛选：

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①理论依据：

人为提供有利于目的菌株生长的条件（包括营养、温度、pH等），同时抑制或阻止其他微生物生长。

②配置合适的培养基方法：

a、抑制大多数微生物生长

b、造成有利于该菌株生长的环境，

③途径：

a、选择培养基的概念：

在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基，称为选择培养基。

b、用选择培养基培养的目的：

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是从众多微生物中分离所需要的微生物。

（3）分解尿素的微生物的筛选：

①原理：

培养基的氮源为尿素，只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，以尿素作为氮源。缺乏脲酶的微生物由于不能分解尿素，缺乏氮源而不能生长发育繁殖，而受到抑制，所以用此培养基就能够选择出分解尿素的微生物。

②所需培养基：

a、从物理性质看此培养基属于哪类？

从功能上属于哪类培养基？

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固体培养基；选择培养基。

b、在培养基的配方中，为微生物的生

长提供碳源和氮源的分别是是什么物质？

碳源是葡萄糖、尿素；氮源是尿素。

c、分析该配方的培养基对微生物是否

具有选择作用？如果有，又是如何进行选择的？

有筛选作用。尿素是培养基中的唯一氮源，因此，原则上只有能够利用尿素的微生物才能够生长。

2、统计菌落数目：

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测定微生物数量的常用方法有活菌计数法和显微镜直接计数法。

（1）活菌计数法：

①原理：

当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌，通过统计平板上的菌落数，就能测出样品中大约含有多少活菌。

为了保证结果准确，一般选择菌落数在30～300的平板进行计数。

利用稀释涂布平板法成功统计菌落数目的关键是恰当的稀释度。

②计算公式：

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每克样品中的菌落数＝（C÷V）×M

其中，C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积（mL），M代表稀释倍数。

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