课题2　土壤中分解尿素的细菌的分离与计数评课稿

天津开发区第一中学2018-2019学年度第2学期高二年级生物学科目标教学案 勤学深思 德智兼修 编号8 选修1 生物技术实践

专题2 微生物的培养与应用

课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 班级：

姓名：

学号：

课型：新课

执笔人：郑侠

审核人1：郑侠

审核人2：赵志军

【学习目标】

1、研究培养基对微生物的选择作用，进行微生物数量的测定。

2．能利用选择培养基分离细菌，运用相关技术解决生产生活中有关微生物的计数。

3、领悟生物与环境相适应的观点，体会微生物分离计数过程的严谨性、科学性。

【学习过程】

一、基础知识

阅读P13-20

自主学习

1.筛选菌株

(1)实验室中微生物筛选的原理：人为提供有利于

生长的条件(包括营养、温度、pH等)，同时

或

其他微生物生长。 (2) 途径：用

培养基筛选。在微生物学中，将允许

种类的微生物生长，同时

或

其他种类微生物生长的培养基，称作选择培养基。用其培养的目的是从众多微生物中

所需的微生物。

2.统计菌落数目

（1）测定微生物数量的常用方法有

和 。

（2）稀释涂布平板法统计样品中活菌的数目的原理

当样品的

足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一

。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。

为了保证结果准确，同一稀释浓度下，一般设置

个平板，选择菌落数在

的平板进行计数,并取

。

统计的菌落数往往比活菌的实际数目

，因此，统计结果一般用

，而不是用

来表示。

3.设置对照

对照实验是指除了

之外，其他条件都

的实验，其作用是

实验组，排除任何其他可能原因的干扰，证明确实是所测试的条件引起的结果。（常用的对照方式有：空白对照、自身对照、相互对照、条件对照）

设置对照的主要目的是排除实验组中

对实验结果的影响，提高实验结果的

。例如为了排除培养基是否被杂菌污染了，需以 的培养基作为 对照。

二、实验操作

1.实验设计的内容包括 ，

，

以及

等。

2.实验流程：

配制土壤溶液----系列稀释---涂布平板与培养---菌落计数

教学札记：

........................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................... 3.实验步骤：

教学札记：

3-1土壤取样

（1）取样原因：土壤有“

”之称。同其他生物环境相比，土壤的微生物，数量

，种类

。

（2）土壤要求：富含

，pH接近

且潮湿。

（3）取样部位：土壤微生物主要分布在距地表

的近中性土壤中，约 为细菌。

3-2样品稀释：

样品的

直接影响平板上生长的

。分离不同的微生物采用不同的稀释度，其目的是保证获得菌落数在 之间、 的平板

3-3微生物的培养与观察

培养不同微生物往往需要不同培养 和培养 。

...........................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................

土壤中含量

细菌

放线菌 / 真菌 / 稀释倍数

适宜PH

适宜温度/℃

培养时间/天

3-4在菌落计数时，每隔

统计一次

数目，选取菌落数目

时的记录作为结果，以防止因培养

而导致遗漏菌落的数目。同时选取同一

下的3个

计数，然后求出

，并根据平板所对应的

计算出样品中细菌的数目。并记录菌落特征。

3-5菌落的特征包括菌落的

、 、 、

等方面。

三、操作提示

1.无菌操作：

（1）取土样的用具（小铁铲和盛土样的信封）在使用前都需要

。

（2）应在

旁称取土样

g，并在火焰附近将土样倒入盛有 mL无菌水的

中，塞好 。

（3）在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在

旁操作。

2.做好标记：

本实验使用的平板和试管比较多，为避免混淆，实验时要作好标记。注明

、 、 等。

3.对于耗时较长的生物实验，要事先

，以便提高工作效率。

四、结果分析与评价

1.对分离的菌种作进一步的鉴定，还需要借助

的方法。

2.尿素是一种重要的 ，农作物不能 吸收利用，而是首先通过土壤中的细菌合成的 将尿素分解成了

。氨会使培养基的碱性

，PH

。因此，我们可以通过检测培养基

变化来判断该化学反应是否发生。

3.在以

为唯一氮源的培养基中加入

指示剂。培养某种细菌后，如果PH升高，指示剂将变

，说明该细菌能够

。

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天津开发区第一中学2018-2019学年度第2学期高二年级生物学科目标教学案 勤学深思 德智兼修 编号8 【巩固及发展性作业】

1.完成课后练习。

【课后作业】

1.可以鉴定出分解尿素的细菌的方法是(

)。

A.以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂

B.以尿素为唯一氮源的培养基中加二苯胺试剂

C.以尿素为唯一氮源的培养基中加入苏丹Ⅲ试剂

D.以尿素为唯一氮源的培养基中加入双缩脲试剂

2.关于微生物的培养,下列叙述错误的是(

)。

A.细菌一般在30~37 ℃的温度下培养1~2 d B.放线菌一般在25~28 ℃的温度下培养5~7 d C.霉菌一般在25~28 ℃的温度下培养3~4 d D.不同种类的微生物,一般需要相同的培养温度和培养时间

3.在培养基中加入尿素(唯一氮源),以分离出能分解尿素的细菌,这种加入尿素的培养基在功能上属于(

)。

A.选择培养基

B.固体培养基 C.液体培养基

D.半固体培养基

4.需要在火焰旁操作的有(

)。

①土壤取样

②称取土壤

③稀释土壤溶液

④涂布平板

⑤微生物的培养

A.①②③④⑤

B.②③④⑤ C.③④⑤

D.②③④

5.以下关于分解尿素的细菌的说法,正确的是(

)。

A.能分解尿素的原因是能合成分泌蛋白酶

B.以尿素作为唯一的碳源

C.环境中含有大量的尿素诱导该细菌产生了分解尿素的特性

D.以尿素为唯一氮源且添加了酸碱缓冲剂的培养基培养该菌后不会使酚红指示剂变红

6.稀释涂布平板法分离分解尿素的细菌时使用的涂布器应保存在体积分数为70%的酒精中,取出后又要放在酒精灯火焰上引燃,这两步分别属于什么技术?(

) A.灭菌、灭菌

B.消毒、消毒 C.灭菌、消毒

D.消毒、灭菌

7.通常用来作为菌种鉴定的重要依据是(

)。

A.菌落

B.细菌形态 C.细菌体积

D.细菌结构

8.下列关于微生物分离和培养的叙述,错误的是(

)。

A.微生物培养前,需对培养基进行消毒

B.测定土壤样品中的细菌数目,常用菌落计数法

C.分离土壤中不同的微生物,要采用不同的稀释度

D.分离能分解尿素的细菌,要以尿素作为培养基中唯一氮源

9.实验测定链霉素对3种细菌的抗生素效应,用3种细菌在事先准备好的琼脂平板上画3条等长的平行线(3条线均与图中的链霉素带接触),将平板置于37 ℃条件下恒温培养3天,结果如下图所示。从实验结果分析,以下叙述不正确的是

A.链霉素能阻止结核菌的生长

B.链霉素对结核菌比对霍乱菌更有效

C.链霉素对结核菌比对伤寒菌更有效

D.链霉素可以用于治疗伤寒病人

10.下列有关土壤中微生物的分离与计数的说法,错误的是(

)。

A.因为土壤中各类微生物的数量不同,所以,为获得不同类型的微生物要按不同的教学札记：

........................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................... 稀释倍数进行分离

教学札记：

B.测定土壤中细菌的总量和测定土壤中能分解尿素的细菌的数量,选用的稀释范围不同

C.如果得到了3个或3个以上菌落数目在30~300的平板,则说明稀释操作比较成功,并能够进行菌落的计数

D.牛肉膏蛋白胨培养基的菌落数目明显小于选择培养基的数目,说明选择培养基已筛选出一些细菌菌落

二、非选择题

11.马丁培养基是实验室常用的培养基之一。下表为马丁培养基的化学成分,据此回答下列问题。

成分

含量

成分

含量

KH2PO4·3H2O 0.1 g 1 g 葡萄糖

MgSO4·7H2O 0.05 g 0.5 g 蛋白胨

0.33 mL 琼脂

1.5~2 g 0.1%孟加拉红溶液

2 mL H2O 100 mL 2%去氧胆酸钠溶液

链霉素溶液(1×104

μ/mL)

0.33 mL —

(1)该培养基中加入了链霉素,能抑制细菌和放线菌,但真菌可以在上面生长,因此培养基是一种

培养基。

(2)葡萄糖能给微生物生长提供

和

。

(3)蛋白胨能给微生物生长提供

和

。

(4)培养基中KH2PO4·3H2O可给微生物提供含

的无机盐。

(5)琼脂的作用是作为

。

12.苯酚是工业生产排放的有毒污染物质，自然界中存在着降解苯酚的微生物。某工厂产生的废水中含有苯酚，为了降解废水中的苯酚，研究人员从土壤中筛选获得了只能降解利用苯酚的细菌菌株，筛选的主要步骤如图所示，①为土壤样品。请回答下列问题：

（1）②中培养目的菌株的选择培养基中应加入 作为碳源，

②中不同浓度碳源的培养基 （A．影响；B．不影响）细菌的数量，如果要测定②中活细菌数量，常采用 法。

（2）④为对照，微生物在④中不生长，在⑤中生长，④与⑤培养基的主要区别在于 ；使用 法可以在⑥上获得单菌落。

（3）采用固体平板培养细菌时为什么进行倒置培养？

（4）如何比较不同菌株降解苯酚能力的大小（苯酚显酸性）？

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