课题2　土壤中分解尿素的细菌的分离与计数ppt课件课堂实录

2.2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数

【学习目标】

1.简述尿素在生产实践中的作用及分解尿素的细菌的作用。

2.研究培养基对微生物的选择作用。

3.进行土壤中分解尿素细菌的分离与计数。

4.简述活菌计数技术的应用。

【重点难点】

1.教学重点：对土样的选取和选择培养基的配制

2.教学难点: 对分解尿素的细菌的计数

【课前预习案】

一

土壤中分解尿素的细菌的分离与计数

阅读教材P23 “实验设计”，能够整理归纳出实验设计包括的内容，

1实验流程

2实验设计

包括的内容有： 、 、 和 ，具体

的实验步骤以及时间安排等的综合考虑和安排。

实验设计原则：设计重复组（3个）3实验步骤

（1）土壤取样：土壤有 之称，土壤中微生物 ，在

表层，有更多的微生物生长，土壤中的微生物大约 是细菌，细菌

设计 。

适宜生活在 取样：从肥沃、湿润的土壤中，用无菌小铁铲铲去表层土取距地表约 的土壤层，迅速取土壤并装入____________密封

（2）样品稀释

稀释原因：样品稀释程度直接影响 ，

稀释标准：选用一定稀释范围的样品液进行培养，以保证获得菌落数在 ，适于计数的平板

稀释倍数：测定细菌：选用稀释 倍

，测定放线菌：选用稀释 倍 测定真菌：选用稀释 倍

（3）微生物的培养与观察

培养：不同种类的微生物，往往需要不同的培养 和培养 。

细菌： 放线菌： 真菌： 观察：在实验过程中，一般每隔 统计一次 数目，选取菌落数目 的记录作为结果，这样可以 。

菌落特征： （4）细菌的计数[来源:Z|xx|k.Com]

当菌落数目稳定时，选取菌落数在 的平板进行计数。在 下，至少对 个平板进行重复计数，然后求出 ，并根据平板所对应的稀释度计算出样品中细菌

【预习自测】判断正误

1选择培养基筛选出的微生物只有一种（ ）

2筛选分解尿的数目。素的细菌的培养基上不需要添加尿素（ ）

3只要培养基中有尿素就可以筛选出分解尿素的细菌（ ）

4 稀释涂布平板法既可用于统计活菌数也可用于统计样品中死菌数（ ）

5统计菌落数目也可以用平板划线法（ ）

【教学过程】

一

选择培养基

阅读教材P22的第一、二段内容以及小字部分，完成下面内容的归纳总结

1分解尿素的细菌的培养基配方（分析P22左侧培养基配方）

（1）该培养基中含有微生物生长所需的 等营养，

从物理性质划分该培养基属于 ，从功能划分该培养基属于 [来源:学科网ZXXK]

（2）在该培养基的配方中，为微生物的生长提供碳源和氮源的分别 和 。[来源:学科网]

（3）想一想这种培养基对微生物是否具有选择作用?如果具有，又是如何进

行选择的?

2选择培养基的制作

（1）在培养基全部成分具备的前提下加入其他物质在培养基中加入 可筛选金黄色葡萄球菌在培养基中加入 可筛选出 而抑制细菌放线菌生长

（2）通过改变培养基的营养成分达到分离微生物培养基中缺乏氮源可分离 培养基中缺乏有机碳源可分离 （3）利用培养基中特定化学成分分离特定微生物培养基中石油是唯一碳源可分离 培养基中尿素是唯一氮源可分离

（4）通过某些特殊环境分离微生物在高盐环境中可分离 在高温环境中可分离

二 统计菌落数目

阅读教材P22“统计菌落数目”内容以及小字部分，完成下面内容的归纳总结

1尝试解释为什么统计菌落数目可以用稀释涂布平板法而不能用平板划线法？

2比较显微镜直接计数与稀释涂布平板法计数

项目

原理

主要用具

计数依据

优点

缺点

显微镜直接计数法

利用特定细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下计算一定容积的样品中微生物的数量

血细胞计数板

计数方便，操作简单

、活菌都计数在内

稀释涂布平板法

当样品的 时，培养基表面生长的 ，来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的 ，就能推测出样品中大约含有多少活菌。

固体 培养基

计数的是 操作较复杂，有一定误差

而不是活菌数来表示。

3一般来说，统计的菌落数往往比活菌的实际数目 。这是因为 。因此，统计结果一般用

4统计菌落数目（如何推测出每克样品中的菌株数）

（1）分析教材中哪位同学的结果更接近真实值，是否改进如果需要如何改进？

（2）推测出每克样品中的菌株数（并分析分别代表的含义）

显微镜直接计数法：每毫升原液含菌数=400x1000x每小格平均菌体数x稀释倍数

稀释涂布平板法：

三 设置对照

1设置对照的主要目的是排除实验组中 对实的 。

验结果的影响，提高实验结果2分析A同学的结果出现的可能原因？如何设置对照排出影响因素？ 【知识应用与拓展】

1．选择培养基

选择培养基的含义是：在培养基中加入某种化学物质，以抑制不需要的微生物的生长，促进需要的微生物的生长。目的是从众多微生物中分离所需要的微生物。在培养基中加入某种化学物质可以做到这一点，如加入青霉素可以分离出酵母菌和霉菌。加入高浓度的食盐可得到金黄色葡萄球菌。这里的加入是在培养的培养成分的基础上加入的。培养基中的营养成分的改变也可达到分离微生物的目的。如培养基中缺乏氮源时，可以分离固氮微生物，因为非固氮微生物不能在此培养基上生存。当培养基的某种营养成分为特定化学成分时，也具有分离效果。如石油是唯一碳源时，可以抑制不能利用石油的微生物的生长，使能够利用石油的微生物生存，达到分离能消除石油污染的微生物的目的。改变微生物的培养条件，

也可以达到分离微生物的目的，如将培养基放在高温环境中培养只能得到耐高温的微生物。

2．如何从平板上的菌落数推测出每克样品中的菌落数？

统计某一稀释度下平板上的菌落数，最好能统计3个平板，计算出平板菌落数的平均值，然后按课本旁栏的公式进行计算。[来源:学.科.网Z.X.X.K]

3．为什么分离不同的微生物要采用不同的稀释度？测定土壤中细菌的总量和测定土壤中能分解尿素的细菌的数量，选用的稀释范围相同吗？

这是因为土壤中各类微生物的数量（单位：株/Kg）是不同的，例如在干旱土壤中的上层样本中：好氧及兼性厌氧型细菌数约为2185万，放线菌数约为477万，霉菌数约为23.1万。因此，为获得不同类型的微生物，就需要按不同的稀释度进行分离，同时还应当有针对性地提供选择培养的条件。

【课堂小结】