复习与测试特级教师教学实录

微生物的培养与应用一轮复习学案（二）

【知识梳理】

(一)土壤中分解尿素的细菌的分离与计数

项目

实验原理

数量统计

实验流程

详细内容

（1）能合成___________的细菌才能分解尿素；

（2）在以_________为唯一氮源的培养基上能够生长的细菌就是能分解尿素的细菌

（1）___________法（显微镜下，用特定细菌计数板或血细胞计数板）

（2）间接计数法，又称___________:

______________________________________________________________

(二)分解纤维素的微生物的分离

1.纤维素酶

（1）组成:是一种________酶

（2）作用（请在箭头上标出相应的酶）

纤维素

_____________

_____________

（3）纤维素分解菌的筛选

①原理

纤维素分解菌

刚果红

_____________

红色消失，出现____________ 纤维素

②实验流程

土壤取样：在富含_________的环境中取样，如：_______________

选择培养:用_________________________培养基培养,以增加纤维素分解菌浓度；

___________：制备系列稀释液

涂布平板：将样品涂布到_______________________________的培养基上

挑选：挑选___________________的菌落

（三）对照实验与重复实验

1.实验过程中需要设置对照，目的是：__________________________________ __________________________________________________ 2.制作平板时，每个浓度需设置至少三个重复组，目的是:____________________

【命题视角】

视角1

选择培养基成分及微生物的分离原理分析

例1

选择培养基是根据某一种或某一类微生物的特殊营养要求或对一些物理、化学抗性而设计的培养基.利用这种培养基可以将所需要的微生物从混杂的微生物中分离出来.为选择酵母菌和硝化细菌,应选用的培养基分别为( )

A. 伊红美蓝培养基、含青霉素培养基

B. 含青霉素培养基、含氨的无机培养基

C. 含氨的无机培养基、含青霉素培养基

D. 含青霉素培养基、伊红美蓝培养基

例2

某实验小组欲从豆油污染的土壤中筛选出能高效降解脂肪的菌株。请回答：

(1)在筛选过程中，应将土壤样品稀释液接种于以___ 为唯一碳源的固体培养基上，从功能上讲，该培养基属于____ 培养基。

(2)为避免培养皿污染，需将培养皿呈 状态放置。为避免培养液中菌体浓度过高，需将培养液进行 处理。为了排除 ____________，需设置接种等量无菌水的培养基作为空白对照。

(3)为了筛选出菌株，可将适量的 _____试剂滴加在平板中的菌落周围，洗去浮色后，如果菌落周围的现象是______ ，则说明此种菌能够分泌脂肪酶。

(4)纯化菌种时，为了得到单菌落，可采用 ____法接种于新的培养基平板上。

(5)试验操作应在酒精灯火焰附近进行的原因是__________________ 。

视角2

土壤中分解尿素的细菌的分离与计数

例3

下表是某同学列出的分离并计数土壤中微生物培养基的配方，据此回答下列问题：

KH2PO4

Na2HPO4

MgSO4·7H2O 葡萄糖

尿素

琼脂

1．4g 2．1g 0．2g 10．0g 1．0g 15．0g （1）制备培养基时，将上述物质溶解并用蒸馏水定容至1000mL后，还要进行 ______ 和 _____ 。

（2）从功能上看，该培养基属于 ___ 培养基，细菌能利用培养基中的氮源是由于能合成 _______ 。

（3）用稀释涂布平板法统计样本菌落数时， （需要/不需要）设置对照组（即不接种进行培养），原因是 。

（4）某同学在3个培养基上分别涂布稀释倍数为106的土壤样液0．1mL，培养一段时间后，其菌落数分别为180、220、320个，则每毫升原土壤样液中上述微生物的数量为 ，此方法测定的活菌数比实际活菌数少的原因为 ________________ 。

【归纳提升】计数的注意事项与对照的设置

视角3

分解纤维素的微生物的分离

例4

为获得果胶酶高产菌株，科研人员进行了下列分离、筛选、鉴定工作．

K 2 HPO 4

0.1g MgSO 4

0.5g NaNO 3

3g FeSO 4

0.01g

2g 琼脂

15g

定容至1ml

（1）为分离果胶酶产生菌，科研人员配制了下表所示成分的培养基，该表空白处的两

种成分是____________________________________。制备的培养基常用______________ 法进行灭菌。

（2）科研人员将采集的果园土壤放入无菌水中，震荡混匀，制成悬液．为获得较均匀分布的单菌落，还需要将悬液进行________________________，用____________ 法接种于固体培养基上．接种后的平板呈_________ 状态放入培养箱。

（3）选择单菌落数目适宜的培养基，加入一定浓度的刚果红溶液（果胶与刚果红结合后显红色），一段时间后洗去培养基表面的刚果红溶液，观察并比较菌落和 _____

直径的比值，筛选果胶酶高产菌株． （4）将获得的菌株进行液体培养后，从培养液的____________ （填“上清液”或“沉淀物”）

获得粗提的果胶酶．将一定量的粗提果胶酶与适量果胶溶液混合，一定时间后测定吸光值来测定酶活性．进行吸光值测定时，需将 __________________与等量果胶溶液混合，作为实验的对照.