课题2　土壤中分解尿素的细菌的分离与计数教学设计内容推荐

专题2课题2土壤中分解尿素尿素的细菌的分离与计数

一、教学目标

1、运用相关技术解决生产生活中有关微生物的计数

2、分析研究思路的形成过程，找出共性和差异性

3、形成无菌不在的概念，养成讲究卫生的习惯

二、重点、难点

重点：对土样的选取和选择培养基的配制

难点：对分解尿素的细菌的计数

三、教学过程

（一）引入：复习培养基的配制及接种技术，导入如何进行细菌的分离，获得所需要的目的微生物

（二）新课

1、研究思路

例1：尿素是一种重要的氮肥，农作物不能直接吸收利用，而是首先通过土壤中的细菌将尿素分解为氨和二氧化碳，这是因为细菌能合成脲酶。

例2：科学家能从热泉中把耐热细菌筛选出来是因为热泉的高温条件淘汰了绝大多数微生物，这样也适用于实验室中微生物的筛选。

启示：寻找目的菌种时要根据它对生存环境的要求，到相应的环境中去寻找。

（1）筛选菌株：a、人为提供有利于目的菌株生长的条件(包括营养、温度、pH等) b、同时抑制或阻止其他微生物生长。

c、土壤中分解尿素的细菌的分离与计数所需培养基：

KH2PO4

NaH2PO4

MgSO4`7H2O

葡萄糖

尿素

琼脂

1.4g

2.1g

0.2g

10.0g

1.0g

15.0g

[思考1]在该培养基配方中，为微生物的生长提供碳源的是什么？提供氮源的是什么？琼脂的作用是什么？

[思考2]该培养基对微生物________（具有/不具有）选择作用。如果有，其选择机制是只有能够以尿素作为氮源的微生物才能在该培养基上生长。

（2）统计菌落数目（稀释涂布平板法

）

统计菌落数目时，常用来统计样品中活菌数目的方法是___________。除此之外，显微镜直接计数也是测定微生物数量的常用方法。

a、培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中一个活菌。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。

b、一般选择菌落数在30~300的平板进行计数。

c、同一稀释度要涂布至少3个平板，作为重复组，增强实验的说服力与准确性。

d、统计方法：（平均菌落数÷涂布的稀释液体积）x 稀释倍数

[思考3]利用稀释涂布平板法成功统计菌落数目的关键是_________。（恰当的稀释度）

[思考4]第二位同学的结果接近真实值。你认为这两位同学的实验需要改进的操作是？

第一位同学需设置重复实验组；第二位同学统计的三个菌落数相差太大，说明操作有误，需重新实验。

[思考5]统计的菌落数比活菌的实际数目_______（低）。原因：当两个或多个细胞在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。因此，统计结果一般用_______（菌落数）来表示。

（3）设置对照（提高实验结果可信度）

设立2种对照组

a、判断培养基是否有杂菌：未接种的培养基（空白对照）

b、判断选择培养基是否具有筛选作用：完全培养基（营养成分齐全）接种后培养（牛肉膏蛋白胨培养基）

2、实验案例

实验设计：配制土壤溶液、系列稀释、涂布平板与培养、菌落计数

例：土壤中分解尿素的细菌的分离与计数

实验的具体操作步骤如下：

1.土壤取样、

2.梯度稀释

3.制备培养基（3种）

4.微生物的培养与观察

5.细菌的计数

关注菌落的形态、大小、边缘、突起、颜色、质地等等，都是区分细菌的重要手段。

进一步鉴定：指示剂（酚红）将变红

[思考6]测定饮水中大肠杆菌数量的方法是将一定体积的水用细菌过滤器过滤后，将滤膜放到伊红美蓝培养基上培养，大肠杆菌菌落呈现黑色，通过记述得出水样中大肠杆菌的数量。你认为在该实验中至少应取＿＿（三）个水样。

3、课堂总结