课题2　土壤中分解尿素的细菌的分离与计数教学目标设计

高三生物课堂活动单

微生物的分离与培养

执教者：章凌云 学科：生物

【学习目标】

1．概述微生物培养基的基本成分、用途、种类。

2．说出消毒和灭菌的区别。

3．学会制备牛肉膏蛋白胨固体培养基。

4．学会通过平板划线法和稀释涂布平板法纯化一种微生物。

【学习重点】

1．培养基的配制与无菌操作技术

2．平板划线法和稀释涂布平板法的操作

【活动方案】

活动一：学习配制培养基和无菌操作的方法

1．下表中有两种培养基的配方，思考并回答相关问题：

培养基A 蔗糖

200g NaNO3

3g MgSO4.7H2O

0.5g KH2PO4

1.0g KCl

0.5g 琼脂

13g H2O

1000ml 少量激素

（1）根据培养基的配方判断：适合培养大肠杆菌的是培养基

。适合进行植物组织培养的是

。

（2）培养基B配制的一般流程为：计算→称量→溶化→ → →

倒平板。

（3）培养霉菌时需要将培养基的PH调至 ，培养细菌时需要将PH调至 。

（4）培养基包含的营养要素一般包括 、 、 、 等四大类。

培养基A中的碳源是

，氮源是

，培养基B中的碳源是

，氮源是

。

（5）从培养基的物理状态看，上述培养基属于

培养基。

（6）配制培养基时，要根据不同的目的，考虑不同的营养需求。比如：分离能分解纤维素的细菌，要以

作为培养基中的唯一碳源；分离尿素分解菌是使用以

作为唯一氮源的培养基进行培养，从功能的角度看这两种培养基都属于

培养基。

我参与，我受益，大家受益！ 我活动，我快乐，大家快乐！ 1 培养基B

蛋白胨

5g 酵母膏

3g 甘油

20g NaCl

5g 琼脂

15g H2O

1000ml

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2．下面列出了无菌技术的主要方法及适用对象，请用正确的连线将它们连起来。

类型

对象

方法

①灼烧灭菌

Ⅰ.接种环（针）

a.消毒

②干热灭菌

Ⅱ.培养皿

③巴氏消毒

Ⅲ.操作者双手

b.灭菌

④紫外线

Ⅳ. 培养基

⑤化学药物

V.

葡萄酒

⑥高压蒸汽灭菌

VI. 外植体

3．写出消毒和灭菌的结果有什么区别？

活动二：掌握微生物的纯化培养和计数

1．下图甲、乙、丙是大肠杆菌分离和培养过程中部分操作和实验结果示意图，请据图回答有关问题：

（1）上图甲所示的是制备固体培养基时的实验操作步骤之一，它称为

，

（2）培养大肠杆菌时，在接种前需要检测培养基是否被污染。对于固体培养基应采用的检测方法是

。

（3）上图乙是平板划线法接种操作示意图，正确的操作顺序是A→B→

（用字母和箭头表示）；找出图乙中两处错误的操作

（用字母表示）

、

。

（4）某同学挑取了菌落在3块相同平板上划线，结果其

中一块平板的各划线区均未见菌生长，最可能的原

因是 。

（5）某小组欲通过实验来检测池塘水中大肠杆菌的含量，

已知大肠杆菌在伊红-美蓝培养基培养，大肠杆菌菌

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落呈深紫色。本操作用到的培养基从功能角度应该属于

培养基。在上图的系列稀释操作中（101、102、103表示稀释倍数），依次将1 mL液体移入下一个盛有

mL

的试管中。过程a所用的接种方法为

。通过一段时间的培养，观察统计培养皿表面深紫色菌落的数目，结果如上图所示，则池塘水样本中大肠杆菌的种群密度为

个/ mL。

该数值可能比实际值偏

。

（6）在培养基表面形成的单个菌落在生态学中属于一个

。

2．

尝试操作平板划线法和涂布平板法两种接种方法。

活动三：构建知识网络

1．完善以下结构网络

2．讨论：高中生物教材中还有哪些技术需要保证无菌？

【检测反馈】

1．下列关于溶化牛肉膏蛋白胨的说法不正确的是

A．将称好的牛肉膏连同称量纸一同放入烧杯加入少量的水加热

B．当牛肉膏溶化并与称量纸分离后，用玻棒取出称量纸

C．需要控制火力并不断搅拌以免发生焦糊

D．若需要配制100mL的培养基，则在溶解之前需要向烧杯中加入100mL的蒸馏水，等牛肉膏蛋白胨、琼脂彻底溶化后，就转移至锥形瓶中等待灭菌

2．做“微生物的分离与培养”实验时，下列叙述正确的是

A．高压灭菌加热结束时，打开放气阀使压力表指针回到零后，开启锅盖

B．倒平板时，应将打开的皿盖放到一边，以免培养基溅到皿盖上

C．为了防止污染，接种环经火焰灭菌后应趁热快速挑取菌落

D．用记号笔标记培养皿中菌落时，应标记在皿底上

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3．（多选）微生物接种方法很多，平板划线法是最常用的一种。右图是平板划线示意图， 划线的顺序为①②③④。下列操作方法错误的是 ．．A．划线操作时，将沾有菌种的接种环插入培养基中

B．平板划线后培养微生物时须放在光照培养箱中倒置培养，一周观察一次

C．不能将第④区域的划线与第①区域的划线相连

D．在②～④区域中划线前后都要对接种环进行灭菌

4．研究被石油污染过的土壤中细菌数量，并从中筛选出能分解石油的细菌。为了分离和纯化高效分解石油的细菌，科研人员利用被石油污染过的土壤进行如图A所示的实验。

（1）配制培养基的一般操作顺序是计算—称量—

—

—倒平板，配制好的培养基通常可以使用

法灭菌；与②相比，③中培养基成分的最大特点是

，从功能的角度看③④⑤的培养基属于 培养基。

（2）对步骤⑤某瓶中细菌计数的方法有两种：一种方法是 ，其菌落数可代表活菌数，统计的菌落数往往比活菌的实际数目

（填多或少），科研人员将1mL步骤⑤某瓶中样液稀释100倍，在3个平板上用该法分别接入0.1mL稀释液，经适当培养后，3个平板上的菌落数分别为39、38和37，据此可得出该瓶每升样液中的活菌数为 ；另一种方法需要借助一块特殊的载玻片，其名称为 。

（3）若经过④过程后获得的结果为图B所示，则接种方法是

。操作时，接种环通

过

法灭菌，在第二次及以后划线时，总是从上一次的末端开始划线．这样做的目的是

。

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为了研究富含纤维素的土壤中纤维素分解的菌数量，并从中筛选出纤维素分解菌。研究人员进行了如下图所示的实验。刚果红可以与纤维素形成红色复合物,但并不与纤维素降解产物纤维二糖和葡萄糖发生这种反应。

为了研究富含纤维素的土壤中纤维素分解的菌数量，并从中筛选出纤维素分解菌。研究人员进行了如下图所示的实验。刚果红可以与纤维素形成红色复合物,但并不与纤维素降解产物纤维二糖和葡萄糖发生这种反应。

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