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附录4　常用的消毒灭菌操作方法教案1｜教案在线预览

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关键词：附录4　常用的消�…教案1

正文

常用的消毒灭菌操作方法教学设计

（一）引入新课：在微生物的实验室培养中要获得纯净培养物离不开无菌技术，消毒和灭菌就属于无菌操作技术，今天咱们就来学习常用的消毒灭菌操作方法。

（二）进行新课

1、无菌技术

（1）概念：泛指在培养微生物的操作中，所有防止杂菌污染的方法。获得纯净培养物的关键（目的）:防止外来杂菌的入侵。

（2）无菌技术包括的四个方面（措施）：

对实验操作空间、操作者的衣着和手进行清洁和消毒；

将培养器皿、接种用具和培养基等器具进行灭菌；

为避免周围微生物污染，实验操作应在酒精灯火焰附近旁进行；

④避免已灭菌处理的材料用具与周围物品相接触。

消毒：

（1）概念：使用较为温和的物理或化学方法杀死物体表面或内部的

部分微生物（不包括芽孢和孢子）。

（2）常用方法：

煮沸消毒法：

a.条件：100℃煮沸5-6min b.适用范围：用于一般物品的消毒。

巴氏消毒法：

条件：70-75℃下煮30min或

80℃下煮15min b.

适用范围：对一些不耐高温的液体，如牛奶的消毒。

化学药剂消毒

酒精、氯气、石碳酸、煤酚皂溶液等，如酒精擦拭双手、

氯气消毒水源等。

④紫外线消毒

a.条件：紫外线照射30 min b.适用范围：只适用于表面灭菌和空气灭菌，例如接种室、接种箱或超净工作台。

3.灭菌

（1）概念：使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子。

（2）常用方法：

灼烧灭菌

条件：在酒精灯火焰的充分燃烧层灼烧。

适用范围：用于金属用具（接种环、接种针）、接种过程中试管口和瓶口的灭菌；

干热灭菌

所用设备是干热灭菌箱

操作方法及注意事项：

装入待灭菌的物品

↓

将待灭菌的物品，如塞上棉塞的试管、锥形瓶、培养皿、吸管等玻璃仪器，用牛皮纸或干净的报纸包裹严密后，放入干热灭菌箱。注意，物品不要摆得太挤，以免妨碍热空气流通。同时，灭菌物品也不要与干热灭菌箱内壁的铁板接触，以防

包装纸烤焦起火。

↓

关好干热灭菌箱的箱门，旋动恒温调节器，设定温度为160~170℃。当温度升到150℃左右时，保持此温度3～4h。由于干热灭菌温度较高，操作时要注意防止烫伤。

↓

关掉电源，自动降温

↓

开箱取物

等温度降到70℃以下后，打开箱门，取出灭菌物品。注意温度未降到70℃以前，切勿打开箱门，以免玻璃器皿炸裂。

高压蒸汽灭菌

121℃，100kPa，15-30分钟。用于培养基、无菌水等的灭菌

，所用设备是高压蒸汽灭菌锅。

操作方法及注意事项：

首先将内层灭菌桶取出，再向外层锅内加入适量的水，使水面与三角搁架平齐。

↓

放回灭菌桶，并装入待灭菌物品。注意不要装得太挤，以免妨碍蒸汽流通而影响灭菌效果。锥形瓶与试管口不要与桶壁接触，以免冷凝水淋湿包裹瓶口的纸而透入棉塞。

↓

加盖，并将盖上的排气软管插入内层灭菌桶的排气槽内。拧紧固定盖子的螺栓，注意要同时旋紧相对的两个螺栓，使螺栓松紧一致，不漏气。

↓

加热灭菌锅，打开排气阀，使水沸腾，排除锅内的冷空气。等冷空气完全排尽后关上排气阀，让锅内的温度随蒸汽压力增加而逐步上升。当锅内压力升到所需压力时，控制热源，按照灭菌所要求的时间，维持压力。

↓

到灭菌时间后，切断热源，让灭菌锅内温度自然下降，当压力表的压力降到零时，打开排气阀，旋松螺栓，打开盖子，取出灭菌物品。如果提前打开排气阀，锅内压力突然下降，灭菌容器内的液体会冲出容器，造成污染。

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资料摘要

附录4　常用的消毒灭菌操作方法教案1