课题2　土壤中分解尿素的细菌的分离与计数教学设计一等奖

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课后巩固作业

基

础

组

1.在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基称做( ) A.鉴别培养基

B.加富培养基

C.选择培养基

D.基础培养基

2.某混合样品中微生物R含量极少，要得到大量的R，比较理想的方法是采用

( ) A.天然培养基

B.稀释涂布平板法

C.利用适合R生长但同时抑制或阻止其他种类微生物生长的选择培养基

D.用显微镜直接观察、寻找，再培养

3.下列能选择出分解尿素的细菌的培养基是( ) A.KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4·7H2O、葡萄糖、尿素、琼脂、水

B.KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4·7H2O、葡萄糖、琼脂、水

C.KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4·7H2O、尿素、琼脂、水

D.KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4·7H2O、牛肉膏、蛋白胨、琼脂、水

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4.用稀释涂布平板法来统计样品中活菌的数目，其结果与实际值相比( ) A.比实际值高

B.比实际值低

C.和实际值一致

D.比实际值可能高也可能低

5.某同学在稀释倍数为106的培养基上测得平板上的菌落数的平均值为215，那么每毫升样品中菌落数是(涂布平板时所用稀释液的体积为0.1 mL)( ) A.2.15×108 B.2.15×109

C.215 D.21.5 6.在寻找目的菌株时，要根据它对生存环境的要求，到相应的环境中去寻找。下列不属于厌氧细菌生存环境的是( ) A.土壤深层

B.人或动物体内

C.真空 D.池塘淤泥

7.(2011·绍兴高二检测)“土壤中分解尿素的细菌的分离与计数”实验中以土壤中的细菌为研究对象，要达到的目的是( ) ①从土壤中分离出能够分解尿素的细菌

②从土壤中分离出能够分解氨的细菌

③统计每克土壤样品中究竟含有多少分解尿素的细菌

④统计所取土壤样品中究竟有多少分解尿素的细菌

A.①③ B.②④ C.①② D.③④

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8.(2011·宁波高二检测)下列关于测定土壤中微生物数量的叙述，正确的是

( ) A.一般选用103～107倍的稀释液分别涂布

B.测定放线菌的数量，一般选用103、104和105倍稀释

C.测定真菌的数量，一般选用103、104和105倍稀释

D.当第一次测量某种细菌的数量，可以将101～107倍的稀释液分别涂布到平板上培养

9.可以鉴定出分解尿素的细菌的方法是( ) A.以尿素为惟一氮源的培养基中加入二苯胺试剂

B.以尿素为惟一氮源的培养基中加入酚红指示剂

C.以尿素为惟一氮源的培养基中加入苏丹Ⅲ试剂

D.以尿素为惟一氮源的培养基中加入双缩脲试剂

10.某同学在做微生物实验时，不小心把圆褐固氮菌和酵母菌混在一起。该同学设计下面的实验，分离得到纯度较高的圆褐固氮菌和酵母菌。

(1)实验原理：圆褐固氮菌是自生固氮菌，能在无氮培养条件下生长繁殖而酵母菌则不能；青霉素不影响酵母菌等真菌的生长繁殖，而会抑制圆褐固氮菌的生长繁殖。

(2)材料用具：(略) (3)实验步骤

①制备两种培养基，将两种培养基各自分成两份，依次标号A、a和B、b。

②__________________________，并在25 ℃条件下培养________天。

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③分别从A、B培养基的菌落中挑取生长良好的菌并分别接种到a、b培养基中，适宜条件下培养3～4天。

(4)请回答：

①本实验中，配制的分离用的培养基成分特点：A、a是______________培养基，B、b是___________培养基，根据上述原理配制的培养基属于______________培养基。

②根据所需目的配制上述培养基时除营养要协调外还应注意________________ __________________________________________________________________。

③实验步骤中第③步的目的是__________________________________________ ___________________________________________________________________。

④圆褐固氮菌与酵母菌在结构上的主要差异为___________________________ ___________________________________________________________________。

⑤青霉素抑制圆褐固氮菌等细菌的生长繁殖，其作用机理是破坏或抑制其细胞壁的形成。请据此推测不影响酵母菌等真菌生长繁殖的原因是_______________ __________________________________________________________________。 提

升

组

11.某一种细菌要从环境中获取现成的亮氨酸(20种氨基酸中的一种)才能生长，此菌株对链霉素敏感。实验者用诱变剂处理此菌株，想筛选出下表中细菌菌株类型。根据实验者的目的，选用的培养基类型是( )

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注：L——亮氨酸

S——链霉素

“+”

——加入

“-”——不加入

如：L-：不加亮氨酸

S+：加入链霉素

12.(2011·温州高二检测)有关“土壤中分解尿素的细菌的分离与计数”实验叙述错误的是( ) A.因为土壤中各类微生物的数量不同，所以，为获得不同类型的微生物，要按不同的稀释倍数进行分离

B.测定土壤中细菌的总量和测定土壤中能分解尿素的细菌的数量，选用的稀释范围不同

C.只有得到了3个或3个以上菌落数目在30～300的平板，才说明稀释操作比较成功，并能够进行菌落的计数

D.牛肉膏蛋白胨培养基的菌落数明显大于选择培养基的数目，说明选择培养基已筛选出一些细菌菌落

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13.关于微生物营养物质的叙述中，正确的是 (多选)( ) A.是碳源的物质也有可能同时是氮源

B.凡碳源都能提供能量 C.除水以外的无机物只提供无机盐

D.无机氮源也能提供能量 14.为了研究微生物的抗药性突变是自发产生的还是在环境因素的作用下产生的，1952年，Lederberg夫妇利用大肠杆菌设计了一个影印培养法实验。影印培养法的实验原理是：把长有数百个菌落的细菌母种培养皿倒置于包有一层灭菌丝绒布的木质圆柱体(直径略小于培养皿平板)上，使其均匀地沾满来自母培养皿平板上的菌落，然后通过这一“印章”把母板上的菌落“忠实”地接种到不同的其他培养基上。下图就是利用影印培养技术证明大肠杆菌产生抗链霉素突变的实验。具体方法是：

①首先把大量对链霉素敏感的大肠杆菌涂布在不含链霉素的培养皿平板1的表面，待其长出密集的小菌落后，用影印法接种到不含链霉素的培养皿平板2上，- 6 -

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随即再影印到含有链霉素的培养皿平板3上。经培养后，在平板3上出现了个别抗链霉素的菌落。

②对培养皿平板2和3进行比较，在平板2上找到与平板3上那几个抗性菌落相对应的“孪生兄弟”。

③把平板2上与平板3上菌落相对应的一个部位上的菌落挑至不含链霉素的培养液4中，经培养后，再涂布在平板5上。

④重复以上各步骤，最后在试管12中获得了较纯的抗性菌落。根据以上材料回答下列问题：

(1)大肠杆菌的同化作用类型为_______________，与酵母菌相比，大肠杆菌细胞在结构上的主要特点是_____________________________________________。

(2)3号、7号、11号培养基中加入链霉素的作用是______________________，

3号培养皿中的菌落比1号、2号中的菌落少很多，这说明了________________ ___________________________________________________________________。

(3)该实验最关键的设计思路是_________________________________________ ___________________________________________________________________。

(4)你认为该实验得到的结论是_________________________________________ __________________________________________________________________。

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答案解析

1.【解析】选C。鉴别培养基是在培养基中加入某种特殊化学物质，使微生物的代谢产物与特殊化学物质发生特定化学反应，产生明显特征变化；加富培养基一般用来培养营养要求比较苛刻的异养型微生物；基础培养基是含有一般微生物生长繁殖所需的基本营养物质的培养基，如牛肉膏蛋白胨培养基；选择培养基是在培养基中加入特殊营养物质或化学物质，抑制不需要的微生物的生长，促进所需要的微生物的生长。

2.【解析】选C。在培养过程中选择适合所需微生物生长繁殖而抑制其他微生物生长繁殖的培养基，使微生物R在该培养基上成为优势菌种而大量繁殖。

3.【解析】选A。要想分离尿素分解菌，应把尿素作为培养基中惟一氮源，而B项中无氮源，C项中无碳源，D项中牛肉膏、蛋白胨都可作为氮源。

4.【解析】选B。培养基上的一个菌落也可能由相连的两个或多个菌体繁殖而来，因此统计的活菌数要少于菌体实际值。

5.【解析】选B。稀释倍数为106，0.1 mL稀释液的菌落数的平均值为215，则每毫升样品中菌落数就为215/0.1×106=2.15×109。

6.【解析】选C。厌氧型微生物的生长繁殖不仅需要厌氧环境，同时还需要各种生存所必需的营养物质，如碳源、氮源、水、无机盐等，这些条件A、B、D选项均能满足，只有C项中的真空只能提供无氧环境，却不能提供其他营养物质。

7.【解析】选A。从土壤中分离出分解尿素的细菌并对其计数，统计的是每克土壤样品中含多少分解尿素的细菌，用公式“每克样品中菌株数=(C／V)×M”进行推测。其中，C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(mL)、M代表稀释倍数。

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8.【解析】选B。由于土壤中各类微生物的数量不同，在进行分离与计数时，就需要按照不同的稀释度分别进行涂布。测定细菌一般选用104、105、106倍稀释，测定真菌一般选用102、103、104倍稀释，而首次做实验时，可将范围放宽点，可以将103～107倍的稀释液分别涂布到平板上培养。

9.【解析】选B。尿素分解细菌的特点是可以产生脲酶，能把尿素分解为氨，而氨溶解于水后使溶液呈碱性，所以可以用酚红遇碱性变为红色的颜色反应来检测分解尿素细菌的存在。

10.【解析】本题综合考查微生物培养、分离以及有关的实验设计问题，圆褐固氮菌是自生固氮菌，在无氮源的培养基上可以生长，但是可以被青霉素杀灭；酵母菌是单细胞真菌，在无氮源培养基上不能生长，但是青霉素不能杀灭酵母菌，所以使用无氮源的培养基和加入青霉素的培养基都可以把它们分离出来。因为圆褐固氮菌是细菌，所以没有真正的细胞核，其细胞壁成分是肽聚糖；酵母菌是真核细胞，有真正的细胞核，细胞壁的成分也和细菌不同，主要是壳多糖，还有少量蛋白质和脂类。

答案：(3)②分别在A、B培养基上接种等量的混合的微生物 3～4 (4)①无氮 含青霉素的 选择

②pH要适宜

③分离得到纯度较高的圆褐固氮菌和酵母菌

④圆褐固氮菌无成形的细胞核

⑤细菌细胞壁和真菌细胞壁的化学组成不同

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独具【方法技巧】选择培养基的选择方法

(1)在培养基中加入某种化学物质。例如，加入青霉素可以分离出酵母菌和霉菌；加入高浓度的食盐可以得到金黄色葡萄球菌。

(2)改变培养基中的营养成分。例如缺乏氮源时可以分离出固氮微生物；石油作为惟一碳源时，可以分离出消除石油污染的微生物。

(3)改变微生物的培养条件。例如，将培养基放在高温环境下培养，可以得到耐高温的微生物。

11.【解析】选B。本题考查微生物的选择培养的有关知识。不需要亮氨酸的菌株能够在不含亮氨酸的培养基上正常生长，而其他微生物则不能；抗链霉素的菌株在含有链霉素的培养基上能够正常生长，而其他微生物则不能。因此，要筛选不需要亮氨酸的抗链霉素的菌株需在不含亮氨酸且含有链霉素的培养基上培养。

12.【解析】选C。土壤中各类微生物的数量不同，含量最多的是细菌，其次是放线菌，最少的是真菌，所以为获得不同类型的微生物要按不同稀释倍数进行分离；在同一稀释度下只要得到2个或2个以上的菌落数目在30～300的平板，就说明稀释操作比较成功，并能够进行菌落的计数；验证选择培养基是否具有选择作用，需设立牛肉膏蛋白胨培养基，若后者的菌落数明显大于前者，则说明前者具有选择作用。

13.【解析】选A、D。不同的微生物，所需营养物质有较大差别，要针对微生物的具体情况分析。有的碳源只能是碳源，如二氧化碳；有的碳源可同时是氮源，如NH4HCO3；有的碳源同时是能源，如葡萄糖；有的碳源同时是氮源，也是能源，如蛋白胨。对于C选项，除水以外的无机物种类繁多，功能也多样，如二氧化- 10 -

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碳，可作为自养型微生物的碳源；NaHCO3，可作为自养型微生物的碳源和无机盐；而NaCl只能提供无机盐。对于D选项，无机氮源提供能量的情况还是存在的，如NH3可为硝化细菌提供能量和氮源。

14.【解析】本题主要考查学生对微生物培养的基本技术的迁移应用能力，同时考查学生的探究能力、获取信息的能力等。本题的关键是影印接种法使来源相同的微生物生长在不同培养基的相对应的位置上。

答案：(1)异养型 没有成形的细胞核

(2)选择菌种中的抗药性菌落 生物的突变率很低

(3)通过影印接种的方法，在没有链霉素的培养基中获得了抗链霉素的菌落

(4)微生物的抗药性突变是自发产生的，而不是在环境因素的作用下产生的

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