课题2　土壤中分解尿素的细菌的分离与计数优质课教案内容

2.2 《

土壤中分解尿素的细菌的分离与计数》

教学设计

邓建琼

[教学目标] 1．巩固培养基的制备和接种技术。

2、利用选择培养基分离细菌，运用相关技术解决生产生活中有关微生物的计数

3．形成无菌不在的概念，养成讲究卫生的习惯

[教学重点] 利用选择培养基分离细菌，运用相关技术解决生产生活中有关微生物的计数

[教学难点]

利用选择培养基分离细菌，运用相关技术解决生产生活中有关微生物的计数

[教材与学情分析]

学生在上一个课题学习了培养基的概念、种类、制备过程以及接种技术。本课题牵涉到的培养基的制备和接种相当于是复习巩固。细菌的分离和计数是新知识。

[教学过程] 一、复习巩固，引入新课

上节课我们学习了培养基的配置以及接种技术。下面我们一起来复习一下：

1、培养基的基本成分有哪些？

2、培养基的种类有哪些？据物理性质分？据营养成分分？据功能来分？

3、接种的方法有哪些？

4、菌种的保存方法有哪些？

今天我们来学习如何进行细菌的分离，获得所需要的目的微生物。

二、进行新课

1．课程背景

尿素是一种重要的氮肥，农作物不能（能，不能）直接吸收利用，而是首先通过土壤中的细菌将尿素分解为

氨和CO2

，这是因为细菌能合成

脲酶

。常见的分解尿素的微生物有芽孢杆菌、小球菌、假单胞杆菌、克氏杆菌、棒状杆菌、梭状芽孢杆菌等，某些真菌和放线菌也能分解尿素。

2、本课题目的

①从土壤中分离出能够分解尿素的细菌

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②统计每克土壤样品中究竟含有多少这样的细菌

3、实验思路

1）筛选菌株

菌种筛选的原理是人为提供有利于目的菌株生长的条件（包括营养、温度、PH等），同时抑制或阻止其他微生物生长

。所以，自然界中寻找目的菌种时要根据它对生存环境的要求，到相应的环境中去寻找。实验室中就要通过配制选择培养基、控制培养条件等选择目的微生物。

〖思考1〗在该培养基配方中，为微生物的生长提供碳源的是

葡萄糖

，提供氮源的的是

尿素

，琼脂的作用是

凝固剂

。

〖思考2〗该培养基对微生物

具有

（具有，不具有）选择作用。如果具有，其选择机制是

只有能够以尿素作为氮源的微生物才能在该培养基上生长

。

2）统计菌落数目

在统计菌落数目时方法：

稀释涂布平板法、显微镜直接计数、滤膜法

显微镜直接计数法：

缺点：不能区分死菌与活菌；

不适于对运动细菌的计数；

需要相对高的细菌浓度；

个体小的细菌在显微镜下难以观察；

稀释涂布平板法：（也叫活菌计数法）

原理：采用稀释涂布平板法统计菌落数目时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中一个活菌

。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。为了保证结果准确，一般选择菌落数在

30～300 的平板进行计数。

〖思考3〗从平板上的菌落数推测出每克样品中的菌落数的计算方法是

（平均菌落数÷涂布的稀释液体积）×稀释倍数

。

〖思考4〗利用稀释涂布平板法成功统计菌落数目的关键是恰当的稀释度

。

活菌计数法操作注意事项

①为了保证结果准确，一般选择菌落数在30——300的平板上进行计数。

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②为使结果接近真实值可将同一稀释度加到三个或三个以上的平皿中，经涂布，培养计算出菌落平均数。

③统计的菌落往往比活菌的实际数目低。

④涂布平板法所选择的稀释度很重要，一般以三个稀释度中的第二个稀释度所出现的平均菌落数在50个左右为最好。

〖思考5〗第二位同学的结果接近真实值。你认为这两位同学的实验需要改进的操作是第一位同学需设置重复实验组；第二位同学统计的三个菌落数相差太大，说明操作有误，需重新实验。

滤膜法：适用含菌量少，且统计的是液体中的含菌量

3）设置对照

设置对照的主要目的是排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度。

对照实验是指除了

被测试

的条件外，其他条件都相同的实验。满足该条件的称为对照组，未满足该条件的称为实验组。

〖思考6〗请设计本实验的对照实验组：

方案1：其他同学用A同学的土样进行实验。

方案2：A同学以不接种的培养基作为空白对照。

4．实验的设计

实验设计的内容包括实验方案、材料用具、实施步骤和时间安排等。

实验的具体操作：

1）.土壤取样

◆取土样用的小铁铲和盛土样的的信封在使用前都要灭菌。

2）制备培养基：

制备以尿素为唯一氮源的选择培养基。

3）三]样品的稀释

◆应在火焰旁称取土壤10g。

◆在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在火焰旁进行

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分离不同的微生物采用不同的稀释度

原因：不同微生物在土壤中含量不同

目的：保证获得菌落数在30～300之间、适于计数的平板

4）取样涂布

◆实验时要对培养皿作好标记。注明培养基类型、培养时间、稀释度、培养物等。

◆如果得到了2个或2个以上菌落数目在30——300的平板，则说明稀释操作比较成功，并能够进行菌落的计数，如果同一稀释倍数的三个重复的菌落数相差较大，表明试验不精确，需要重新实验。

5）微生物的培养与观察

培养不同微生物往往需要不同培养温度。

细菌：30～37℃培养1～2d 放线菌：25～28℃培养5～7d

霉菌：25～28℃的温度下培养3～4d。

在菌落计数时，每隔24h统计一次菌落数目。

选取菌落数目稳定时的记录作为结果，以防止因培养时间不足而导致遗漏菌落的数目。

6）结果分析与评价

通过对照实验，若培养物有杂菌污染，菌落数偏高；若培养物混入其他氮源，则菌落形态多样，菌落数偏高，难以选择出分解尿素的微生物。

提示：选择每个平板上长有30—300个菌落的稀释倍计算每克样品的菌数最合适。同一稀释倍数的三个重复的菌落数不能相差悬殊，如相差较大，表示实验不精确。

5、操作提示

注意无菌操作

，实验中要做好标记

，注意规划时间

6.课外延伸

在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂。培养某种细菌后，如果PH升高，指示剂将变红，说明该细菌能够分解尿素。

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〖思考9〗在研究未知微生物时务必规范操作，以防被致病微生物感染，实验后一定要洗手。

〖思考10〗测定饮水中大肠杆菌数量的方法是将一定体积的水用细菌过滤器过滤后，将滤膜放到

伊红美蓝

培养基上培养，大肠杆菌菌落呈现

黑

色，通过记述得出水样中大肠杆菌的数量。你认为在该实验中至少应取三个水样。

三、课堂总结、点评

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