课题2　土壤中分解尿素的细菌的分离与计数第二课时教案

生物·选修

1(人教版)

[来源:学科网]课题2

土壤中分解尿素的细菌的分离与计数

一、单项选择题

1．取少量酵母菌液放入血球计数板直接记数，测得的数目是(

) A．活细胞数

B．死细胞数

C．菌落数

D．细胞总数

解析：显微镜直接计数法的缺点就是不能区分活菌和死菌。

答案：D

2．在做分离分解尿素的细菌实验时，A同学从对应106培养基上筛选出大约150个菌落，而其他同学只筛选出大约50个菌落。A同学的结果产生原因可能有(

) ①由于土样不同

②由于培养基被污染

③由于操作失误

④没有设置对照

A．①②③

B．②③④

C．①③④

D．①②④

答案：A

3．关于土壤取样的叙述错误的是(

) A．土壤取样，应选取肥沃、湿润的土壤

B．先铲去表层土3 cm左右，再取样

C．取样用的小铁铲和信封在使用前不用灭菌

D．应在火焰旁称取土壤

答案：C

4．土壤取样时最好选择哪种环境中的土壤做实验(

) A．街道旁

B．花盆中

C．农田中

D．菜园里

解析：因为取样要在肥沃、湿润的土壤，农田土壤较硬且因喷洒农药，导致微生物种类少，而菜园有中落叶烂叶形成腐殖土，富含纤维素。

答案：D

5．下列能选择出分解尿素的细菌的培养基是(

) A．KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4·7H2O、葡萄糖、尿素、琼脂、水

B．KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4·7H2O、葡萄糖、琼脂、水

C．KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4·7H2O、尿素、琼脂、水

D．KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4·7H2O、牛肉膏、蛋白胨、琼脂、水

答案：A

6．下列关于统计菌落数目的方法的叙述，不正确的是(

) A．采用平板计数法获得的菌落数往往少于实际的活菌数

B．当样品的稀释度足够高时，一个活菌会形成一个菌落

C．为了保证结果准确，一般采用密度较大的平板进行计数

D．在某一浓度下涂布三个平板，若三个平板统计的菌落数差别不大，则应以它们的平均值作为统计结果

解析：当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个

菌落，因此统计的菌落数往往比活菌的实际数目低。一般选择菌落数在30～300的平板进行计数，密度过大会使计数结果偏小，影响结果的准确性。涂布3个平板，作为重复组，取其平均值作为统计结果能增强试验的说服力与准确性。

答案：C

7．将细菌放在固体培养基上培养，它会繁殖并形成菌落(如下图)。某实验小组想检验两种抗生素的杀菌作用，下列哪个实验方案最合适(

)

解析：本题的关键在于设计对照实验，要检验A、B两种抗生素的杀菌作用，则需要设计两个实验组，一个是菌液加抗生素A，另一组是菌液加抗生素B，为了更好观察实验效果，还需设置一个对照组，即只有菌液，不加抗生素。

答案：C

8．下列有关土壤中微生物的分离与计数的说法中，错误的是

(

)。

A．因为土壤中各类微生物的数量不同，所以，为获得不同类型的微生物要按不同的稀释倍数进行分离

B．测定土壤中细菌的总量和测定土壤中能分解尿素的细菌的数量，选用的稀释范围不同

C．如果得到了2个或2个以上菌落数目在30～300的平板，则说明稀释操作比较成功，并能够进行菌落的计数

D．牛肉膏蛋白胨培养基的菌落数目明显小于选择培养基的数目，说明选择培养基已筛选出一些细菌菌落

解析：样品的稀释度直接影响平板上生长的菌落的数目。实际操作中，通常选用一定稀释范围的样品液进行培养，以保证获得菌落在30～300之间适于计数的平板。测定土壤中细菌的数量，一般选用104、105和106倍的稀释液；测定放线菌的数量一般选用103、104和105倍的稀释液；测定真菌的数量一般选用102、103和104倍的稀释液。将菌液稀释相同的倍数，在牛肉膏蛋白胨培养基上生长的菌落数目应明显多于选择培养基上的数目，从而说明选择培养基的筛选作用。[来源:Z*xx*k.Com]

答案：D

9．“土壤中分解尿素的细菌的分离与计数”实验中以土壤中的细菌为研究对象，要达到的目的是(

) ①从土壤中分离出能够分解尿素的细菌

②从土壤中分离出能够分解氨的细菌

③统计每克土壤样品中究竟含有多少分解尿素的细菌

④统计所取土壤样品中究竟有多少分解尿素的细菌

A．①③

B．②④

C．①②

D．③④

解析：从土壤中分离出分解尿素的细菌并对其计数，统计的是每克土壤样品中含多少分解尿素的细菌，用公式“每克样品中菌株数＝(C/V)×M”进行推测。其中，C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(mL)、M代表稀释倍数。

答案：A

10．在做土壤中分解尿素的细菌的分离与计数实验时，甲组实验用氮源只含尿素的培养基，乙组实验用氮源除含尿素外还含硝酸盐的培养基，其他成分都相同，在相同条件下操作、培养与观察，则乙组实验属于(

) A．空白对照

B．自身对照

C．相互对照

D．条件对照

[来源:Z§xx§k.Com]

解析：本实验甲组为实验组，乙组为对照组，给实验组某种处理，给对照组另一条件的处理，为条件对照。

答案：D [来源:学科网]

二、双项选择题

11．需要在火焰旁操作的有(

) A．土壤取样

B．稀释土壤溶液

C．涂布平板

D．微生物的培养

答案：BC

12．下列关于微生物分离和培养的有关叙述，正确的是(

) A．微生物培养前，需对培养基进行消毒

B．测定土壤样品中的细菌数目，常用菌落计数法

C．分离土壤中不同的微生物，要采用相同的稀释度

D．分离能分解尿素的细菌，要以尿素作为培养基中唯一的氮源

解析：微生物培养前，需对培养基进行灭菌，而不是消毒；测定土壤样品中的细菌数目，常用菌落计数法而一般不用活菌计数法；分离土壤中不同的微生物，要采用不同的稀释度以便能从中选择出菌落数在30～300间的平板进行计数；分离能分解尿素的细菌，要以尿素作为培养基中唯一的氮源。

答案：BD

三、非选择题

13．某小组同学为了调查湖水中细菌的污染情况而进行了实验。实验包括制备培养基、灭菌、接种及培养、菌落观察计数。请回答与此实验相关的问题。

(1)培养基中含有的蛋白胨、淀粉分别为细菌培养提供了________和________。除此之外，培养基还必须含有的基本成分是________和________。

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答案：氮源(碳源不作要求)

碳源

无机盐

水

(2)对培养基进行灭菌，应该采用的方法是__________________________________________________________。

答案：高压蒸汽灭菌

(3)为了尽快观察到细菌培养的实验结果，应将接种了湖水样品的平板置于____________中培养，培养的温度设定在37℃。要使该实验所得结果可靠，还应该同时在另一平板上接种________作为对照进行实验。

答案：恒温培养箱

无菌水

(4)培养20小时后，观察到平板上有形态和颜色不同的菌落，这说明湖水样品中有________种细菌。一般说来，菌落总数越多，湖水遭受细菌污染的程度越____________。

答案：多

高

(5)如果提高培养基中NaCl的浓度，可以用于筛选耐________________细菌，这种培养基被称为________________。

答案：盐(或NaCl)

选择培养基

14．下面是某同学做自生固氮菌分离实验的方案和观察结果：(注：自生固氮菌能以空气中的氮气为氮源)

表1

培养基的基本配方

组分

NaNO3

含量

2 g

实验目的：略

实验材料和用具：略

实验方法和步骤：

(1)接种。

①接种前，准备好盛有上述配方的培养基，放入培养皿中并灭菌，供实验用。

②取10 g土壤，放在无菌研钵中，注入5 mL蒸馏水，并用无菌玻璃棒搅拌均匀，备用。

③将接种环放在酒精灯的火焰上灭菌。将培养皿盖轻轻放在桌面上，手拿培养皿，将接种环放在培养基边缘处冷却。然后，用接种环沾取少许泥浆，轻轻地点接在培养基的表面上，共点接15～20处。

④接种后，轻轻地盖上培养皿盖，将培养皿放在实验桌上。

(2)培养。

将接种的培养皿放入恒温箱内，在28～30 ℃的温度下培养3～4 d。

(3)观察。

3～4 d后，取出培养皿，仔细观察培养基上稀泥浆周围出现的黏KH2PO4

1 g KCl 0.5 g MgSO4

FeSO4

蔗糖

琼脂

0.5 g 0.01 g 30 g 15 g 蒸馏水

1 000 mL

液。黏液最初为无色透明，之后为乳白色，最后变为褐色。这表明含有自生固氮菌。

(4)镜检：略

该实验方案和观察结果中有几处明显错误，请指出错误并改正。(至少三处) (1)错误：_________________________________________________________，

应改为：_________________________________________________________。

(2)错误：_________________________________________________________，

应改为：__________________________________________________________。

(3)错误：__________________________________________________________ 应改为：_________________________________________________________。

解析：该实验在操作过程中，有如下需注意的地方：(1)本实验为自主固氮菌的分离实验，所以培养液中不应当再含有N元素；(2)在本实验操作中，应当严格做好无菌操作，所以应当使用无菌水，培养皿盖也不能放在桌面上；(3)实验步骤中没有标注实验内容，接种人的姓名和接种日期。

答案：(1)培养基中含有NaNO3

不含氮的钠盐

(2)接种②中使用蒸馏水

无菌水

(3)接种③中将培养皿盖放在桌面上

略微打开培养皿盖

(4)接种④中未填写实验内容、接种人的姓名和接种日期

并在顶盖上写明实验内容、接种人的姓名和接种日期(在接种步骤④后面加上)(任选三点填写)