复习与测试名师教学视频（文字实录）

《微生物的实验室培养》教学设计

教学目标

1、知识与技能

了解有关培养基的基础知识；掌握培养基的制备、高压蒸汽灭菌和平板划线法等基本操作技术

2、过程与方法

分析实验思路的确定和形成的原因，分析实验流程，观看实验教学视频，操作演示实验

3、情感、态度与价值观

形成勇于实践、严谨求实的科学态度和科学精神

教学重难点

【课题重难点】无菌技术的操作

教学工具

多媒体、发酵产品、实验有关用具

教学过程

一、引入新课

展示学生做的一杯果酒、一杯果醋、一块腐乳、一坛泡菜，让学生思考这些食品分别主要是由何种微生物发酵而产生的。通过上述情境的展示和讨论，学生可以对微生物有一个初步的感性认识，激发起学生学习本专题的兴趣，使学生认识到在微生物培养中保持培养过程纯净的重要性。在传统发酵技术的应用中，都利用了微生物的发酵作用，其中的微生物来自于制作过程中的自然感染。而在工业化生产中，为了提高发酵的质量，需要获得优良菌种，并保持发酵菌种的纯度。这就要涉及到微生物的培养、分离、鉴别等基本技术。

二、教学过程

第一课时

（一）．基础知识

1 培养基的种类包括固体培养基和液体培养基等。

〖思考1〗琼脂是从红藻中提取的多糖，在配制培养基中用作为凝固剂。

【补充】培养基的类型及其应用：

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2 培养基的化学成分包括水、无机盐、碳源、氮源四类营养成分。

〖思考2〗从细胞的化学元素组成来看，培养基中为什么都含有这些营养成分？

C、H、O、N、P、S是构成细胞原生质的基本元素，约占原生质总量的97％以上。

【补充】碳源：如CO2、糖类、脂肪酸等有机物，构成微生物的结构物质和分泌物，并提供能量。

氮源：如N2、氨盐、硝酸盐、牛肉膏、蛋白胨等，主要用来合成蛋白质、核酸及含氮代谢物等。含有C、H、O、N的化合物既可以作为碳源，又可以作为氮源，如氨基酸等。

3 培养基除满足微生物生长的 pH 、特殊营养物质和氧气等要求。

【补充】生长因子：某些微生物正常生长代谢过程中必须从培养基中吸收的微量有机小分子，如某些氨基酸、碱基、维生素等。

〖思考3〗牛肉膏和蛋白胨主要为微生物提供糖、维生素和有机氮等营养物质。

〖思考4〗培养乳酸杆菌时需要添加维生素，培养霉菌时需要将培养基pH调节为酸性，培养细菌时需要将pH调节为中性或微碱性。

活动2：阅读“无菌技术”，讨论回答下列问题：

4 获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌的入侵。

5 无菌技术包括：

（1）对实验操作空间、操作者的衣着和手进行清洁和消毒；

（2）将培养器皿、接种用具和培养基等器具进行灭菌；

（3）为避免周围微生物污染，实验操作应在酒精灯火焰附近旁进行；

（4）避免已灭菌处理的材料用具与周围物品相接触。

6 比较消毒和灭菌（填表）

〖思考5〗无菌技术除了防止培养物被污染外，还具有的目的是防止感染实验操作者。

7 消毒方法：

（1）日常生活经常用到的是煮沸消毒法；

（2）对一些不耐高温的液体，则使用巴氏消毒法（作简要介绍）；

（3）对接种室、接种箱或超净工作台首先喷洒石炭酸或煤酚皂等溶液以增强消毒效果，然后使用紫外线进行物理消毒。

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（4）实验操作者的双手使用酒精

进行消毒；

（5）饮水水源用氯气进行消毒。

8灭菌方法：

（1）接种环、接种针、试管口等使用灼烧灭菌法；（2）玻璃器皿、金属用具等使用干热灭菌法，所用器械是干热灭菌箱；

（3）培养基、无菌水等使用高压蒸汽灭菌法，所用器械是高压蒸汽灭菌锅。

（4）表面灭菌和空气灭菌等使用紫外线灭菌法，所用器械是紫外灯。

〖思考6〗对接种环灭菌时要用酒精灯的充分燃烧层火焰灼烧可能伸入试管或培养皿的部位。

〖思考7〗利用干热灭菌箱对玻璃器皿灭菌时物品不能摆得太挤，目的是避免妨碍热空气流通。

〖思考8〗物品装入高压蒸汽灭菌锅灭菌后，要首先打开排气阀，煮沸并排除锅内冷空气，其目的是有利于锅内温度升高；随后关闭排气阀继续加热，气压升至 100k Pa，温度为 121℃，并维持 15～30 min；最后切断热源，使温度自然降温，气压务必降至零时打开锅盖，其目的是防止容器中的液体暴沸 。

【补充】培养基的配制原则：

①目的要明确：根据培养的微生物种类、培养的目的等确定培养基的类型和配制量。

②营养要协调：培养基中各种营养物质的浓度和比例要适宜。例如：碳氮比4∶1时，谷氨酸棒状杆菌大量繁殖而产生谷氨酸少；碳氮比为3∶1时，菌体繁殖受抑制而谷氨酸合成量大增。

③pH要适宜：细菌培养基pH中性或偏碱性，霉菌培养基呈酸性。

第二课时

（二）．实验操作

1 计算：根据配方比例，计算100mL培养基各成分用量。

2 称量：准确称取各成分。称取牛肉膏和蛋白胨时动作要迅速，目的是防止牛肉膏吸收空气中水分。

3 溶化：①加水加热熔化牛肉膏；②加入蛋白胨和氯化钠继续加热；③加入琼脂；④用蒸馏水定容到100mL。整个过程不断用玻棒搅拌，目的是防止琼脂糊底3

而导致烧杯破裂。

4 调pH：用1mol/LNaOH溶液调节pH至偏碱性。

5 灭菌：将配制好的培养基转移到锥形瓶中，加塞包扎后用高压蒸汽灭菌锅灭菌；所用培养皿用报纸包扎后用干热灭菌箱灭菌。

6 倒平板：待培养基冷却至50℃左右时在酒精灯火焰附近操作进行。

其过程是：①在火焰旁右手拿锥形瓶，左手拔出棉塞；

②右手拿锥形瓶，使锥形瓶的瓶口迅速通过火焰；

③左手将培养皿打开一条缝隙，右手将培养基倒入培养皿，立刻盖上皿盖。

④待平板冷却凝固后，将平板倒过来放置。

〖思考1〗锥形瓶的瓶口通过火焰的目的是消灭瓶口的杂菌，防止杂菌感染培养基。

（播放视频：微生物的实验室培养，同时结合演示实验）

（三）.练习巩固：见导学案

（四）.课后小结

本节课可以通过生产实例入手，引导学生认识在微生物的培养过程中，保持培养物纯净的重要性。在实验中充分利用各种教学资源，发挥学生的主动性，让学生通过练习相应操作，从中体会微生物的培养及纯净培养过程中“无菌”操作的重要性。要让学生熟悉实验原理再进行操作实验，利用培养结果指导学生回顾实验中的成败并相互讨论总结，深入理解知识。当然由于微生物的微观性和危害性，一定要教育学生培养良好的卫生习惯。

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