课题3　分解纤维素的微生物的分离优秀教案

微生物的实验室培养

1．下列有关倒平板操作的叙述错误的是(

) A．将灭过菌的培养皿放在火焰旁的桌面上

B．打开的锥形瓶瓶口应迅速通过火焰

C．将培养皿打开，培养皿盖倒放在桌子上

D．待平板冷却凝固后需要倒过来放置

C 2．为了保持菌种的纯净，需要进行菌种的保藏，下列有关叙述错误的是(

) A．对于频繁使用的菌种，可以采用临时保藏的方法

B．临时保藏的菌种一般是接种到试管的斜面培养基上

C．临时保藏的菌种容易被污染或产生变异

D．对于需要长期保存的菌种，可以采用低温－4 ℃保藏的方法

D 3．平板划线法和稀释涂布平板法是常用的两种接种方法。下列相关叙述错误的是(

) A．平板划线法要求连续多划几次，且除了第一次划线外，每一次划线的起点都是上一次划线的末端

B．除了第一次划线需要将接种环灼烧灭菌外，以后的划线可以不用灭菌即可划线

C．如果菌液本来浓度不高，则可以适当降低稀释倍数

D．充分稀释和连续划线的目的都是为了使形成的菌落是由单一的细菌繁殖而成

B 4．关于微生物的营养，下列说法正确的是(

) A．同一种物质不可能既作碳源又作氮源

B．凡是碳源都能提供能量

C．除水以外的无机物仅提供无机盐

D．无机氮源也能提供能量

D 5．微生物培养过程中，要十分重视无菌操作，现代生物学实验中的许多方面也要进行无菌操作，防止杂菌污染。请分析下列操作，其中错误的是(

) ①煮沸消毒可以杀死微生物细胞和一部分芽孢

②接种操作要在酒精灯火焰附近进行

③家庭制作葡萄酒时要将容器和葡萄进行灭菌

④培养基要进行高压蒸汽灭菌

⑤加入培养基中的指示剂或染色剂不需要灭菌

A．①②

C．②⑤

D 6．下列有关培养基的叙述，正确的是(

) A．培养基是为微生物的生长繁殖提供营养的基质

B．培养基都只含有水、碳源、氮源和无机盐

C．固体培养基中加入少量水即可制成液体培养基

D．微生物在固体培养基上生长时，可以形成肉眼可见的单个细菌

A

B．②④

D．③⑤

7．培养基、培养皿、接种针、实验操作者的双手、空气、牛奶所采用的灭菌或消毒方法依次是(

) ①化学消毒

②灼烧灭菌

③干热灭菌

④紫外线消毒

⑤高压蒸汽灭菌

⑥巴氏消毒法

A．⑤③②①④⑥

C．⑥②③④①⑤

A 8．下列有关微生物培养与应用的叙述，正确的是(

) A．培养基中同一种物质不可能既为碳源又为氮源

B．微生物培养前，需对培养基进行干热灭菌

C．接种前需对培养皿、接种环、实验操作者的双手等进行严格的灭菌处理

D．微生物培养过程需要适宜的温度

D 9．下列关于制备牛肉膏蛋白胨培养基的叙述，错误的是(

) A．培养基应先调pH再进行灭菌

B．培养基应先灭菌再分装到培养皿中

C．熔化琼脂时要不断用玻璃棒搅拌

D．使用高压蒸汽灭菌锅时直接将灭菌锅密闭加热

D 10．下列有关平板划线操作的叙述，正确的是(

) A．使用已灭菌的接种环、培养皿，操作过程中不再灭菌

B．打开含菌种的试管后需要将试管口通过火焰，沾取菌种后需要马上塞上棉塞

C．将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内，划三至五条平行线即可完成划线操作

D．最后将平板倒置，放入恒温箱中培养

D 11．下列关于制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的理解，错误的是(

) A．将牛肉膏连同称量纸一起放在烧杯中加热溶化是因为牛肉膏比较黏稠

B．在称量牛肉膏和蛋白胨时动作要迅速，称后要及时盖上瓶盖

C．因为灭菌的目的相同，故对培养基和培养皿的灭菌方法也相同

D．在加热熔化琼脂过程中要不断搅拌以防止琼脂糊底而导致烧杯破裂

C 12.接种微生物的方法很多，平板划线法是最常用的一种。如图是平板划线示意图，划线的顺序为①②③④。操作方法中错误的是(

) A．划线操作时，将沾有菌种的接种环插入培养基

B．平板划线后培养微生物时要倒置培养

C．不能将第④区域的划线与第①区域的划线相连

D．在②～④区域中划线前后都要对接种环进行灭菌

A 13．下表是某微生物培养基的成分，请根据下表回答问题：

粉状硫

(NH4)2SO4

K2HPO4

MgSO4

FeSO4

CaCl2

H2O

B．①②③④⑤⑥

D．③④②①⑥⑤

10 g 0.4 g 4.0 g 9.25 g 0.5 g 0.5 g 100 mL (1)表中营养成分共有________类，该培养基可培养的微生物类型是________。

(2)若除去成分(NH4)2SO4，加入(CH2O)，该培养基可用于培养________________。

(3)不论何种培养基，在各种成分都溶化后分装前，都要进行的是______________。

(4)该表中各成分用量确定的原则是________________________________________________________________________ ____________________。

(5)若该培养基用于菌种鉴定，应该增加的成分是________。

答案：(1)3

自养型

(2)固氮微生物

(3)调节pH

(4)所培养微生物对各营养成分的需要量

(5)琼脂(凝固剂) 14．(2018·长沙模拟)苹果干腐病是一种由茶蔍子葡萄座腔菌引起的疾病。病菌通常由枝条伤口入侵引起感染，在伤口处形成溃疡。某中学的科研小组计划分离出该真菌，并进行药物防治实验，为苹果干腐病的防治提供合理的建议。经过查阅资料，确定了分离时所用的PDA培养基配方，如表所示：

物质

含量

马铃薯

200 g 葡萄糖

20 g 自来水

1 000 mL 氯霉素

0.3 g 该真菌在上述PDA培养基上生长时有特定的形态特征：辐射状白色匍匐菌丝，绒毛状。

(1)要获得菌落，则上表中还应添加的成分是________。氯霉素的作用是______________________。培养基的制备步骤包括计算、称量、溶化、________、倒平板。待平板冷却凝固后，将平板________，以防止冷凝水污染培养基。

(2)用剪刀从染病枝条溃疡处剪取1×1 cm2的患病组织，并用质量分数为0.1%的氯化汞进行消毒，置于培养基中心，在合适条件下进行培养，共培养五组。待菌落形态特征稳定后，用________法将该致病菌分别转移至含有等量0.5%苦水碱剂、40%福美砷、清水的上述PDA培养基中进行抗药性实验，并每隔24 h记录一次最后划线区域的菌落数目：

①选取______________的记录作为结果，这样可以防止因培养时间不足而导致菌落数目遗漏。

②记录结果如下：

小组

菌落数目(个) 0.5%苦水碱剂

2 40%福美砷

8 清水

17 从结果分析可知，______________能很好地抑制该真菌的生长，适合防治苹果干腐病。

答案：(1)琼脂(或凝固剂)

抑制细菌等杂菌的生长

灭菌

倒置

(2)平板划线

①菌落数目稳定

②0.5%苦水碱剂

15．多环芳烃菲在染料、杀虫剂等生产过程中被广泛使用，是土壤、河水中常见的污染物之一。如图表示科研人员从被石油污染的土壤中分离获得能降解多环芳烃菲的菌株Q的主要步骤。请回答：

(1)步骤①→③的培养过程中，需将锥形瓶放在摇床上振荡，一方面使菌株与培养液充分接触，提高营养物质的利用率；另一方面能__________________________________。

(2)步骤④用平板划线法纯化菌株Q过程中，在做第二次以及其后的划线操作时，总是从上一次划线的末端开

始划线，原因是________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________。

采用固体平板培养细菌时要倒置培养的目的是__________________________________________。

(3)接种环通过灼烧灭菌，完成步骤④中划线操作，共需灼烧接种环________次。

(4)为了获得分解多环芳烃菲能力更强的菌株，研究人员又对菌种Q进行了诱变处理，得到突变株K。为了进一步鉴定菌株K并比较两种菌株降解多环芳烃菲的能力，设计了下列实验，请补全实验步骤：

①取9只锥形瓶均分成三组，编号A、B、C；

②向A、B、C三组锥形瓶中加入______________________________________________ ________________________________________________________________________的培养液；

③向A、B、C三组培养液中分别加入__________________________________________ ________________________________________________________________________；

④28 ℃恒温培养3 d后，测定______________________________________。

答案：(1)增加培养液中的溶氧量(或增加培养液中的含氧量)

(2)能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终得到由单个细菌繁殖而来的菌落

防止冷凝后形成的水珠滴落在培养基上污染培养基

(3)6

(4)②等量的以多环芳烃菲为唯一碳源

③等量的无菌水、菌株Q菌液和突变株K菌液

④锥形瓶中多环芳烃菲的降解率