课题2　土壤中分解尿素的细菌的分离与计数教案2

专题二

微生物的培养与应用

课题一

微生物的实验室培养

一、培养基

1．培养基按物理性质可分为 培养基和 培养基。常用凝固剂是 。

2．营养构成：各种培养基一般都含有 、 、 和 ，此外还要满足微生物生长对 、 以及 的要求。 3．培养乳酸杆菌时需在培养基中添加 、培养霉菌时需将培养基PH调至 、培养细菌时需将PH调至 、培养厌氧微生物则需提供 条件。

二、无菌技术： (一)获得纯净培养物的关键是 。

(二)消毒和灭菌

1．消毒常用的方法有 、 、 及 消毒法。

2．灭菌常用的方法有： 法，可对 进行灭菌；

法，可对 进行灭菌；

法，可对 进行灭菌。

三、实验操作----大肠杆菌的纯化培养：

本实验所用的培养基是 ，本实验可分成 和

两个阶段进行。

（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基

1．制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的操作步骤是：

、 、 、 、 。

称量操作中，动作要迅速，原因是 。

溶化操作中需要不断用玻璃棒搅拌的目的是 。

2．倒平板：待培养基冷却至 ℃左右时在酒精灯火焰附近操作进行。

平板冷凝后要倒置的目的是 。

（二）纯化大肠杆菌

1．微生物接种：最常用的是 法和 法。另外还有穿刺接种和斜面接种等。当稀释度足够高时，即可获得单个细菌形成的 。

2.为了保持菌种的纯净，需要进行菌种的保藏。频繁使用的菌种，采用

的方法。这种方法保存的时间 ，菌种易 。需要长期保存的菌种，采用 法。即甘油灭菌后与菌液充分混匀，放在-20℃的冷冻箱中保存。

课题二

土壤中分解尿素的细菌的分离与计数

1．筛选菌株

(1)实验室中微生物筛选的原理：人为提供有利于 生长的条件(包括营养、温度、pH等)，同时 或 其他微生物生长。 (2)选择培养基：在微生物学中，将允许 种类的微生物生长，同时 或 其他种类微生物生长的培养基，称作选择培养基。

（3）培养基中 作为唯一的氮源，可选择出能分解尿素的细菌。鉴定细菌能够分解尿素，可在以 作为唯一氮源的培养基中加入 ，细菌合成的脲酶将尿素分解为氨，使培养基 ，pH ，指示剂变 。

2．统计菌落数目

（1）测定微生物数量的常用方法有 和 。

（2）稀释涂布平板法统计样品中活菌的数目的原理：当样品的 足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个 。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。为了保证结果准确，一般选择菌落数在 的平板进行计数。由于两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落，所以统计的菌落数往往比活菌的实际数目 ，因此统计结果一般用 来表示。

3．设置对照

设置对照的主要目的是排除实验组中 对实验结果的影响，提高实验结果的 。例如，为了排除培养基是否被杂菌污染了，需以 的培养基作为空白对照；为了证明选择培养基具有一定的筛选作用，需用 培养基接种相同的稀释液进行对照，且在 培养基上生长的菌落数目较多。

课题三

分解纤维素的微生物的分离

1．纤维素酶是一种 酶，它至少包括三种组分，即 ， ， 。前两种酶使纤维素分解为 ，第三种酶将纤维二糖分解为 。

2.纤维素分解菌的筛选方法是 。该方法的原理是：刚果红可以与纤维素形成 ，当纤维素被 分解后，红色复合物无法形成，出现以

为中心的 ，我们可以通过 来筛选纤维素分解菌。培养基中以 作为唯一的碳源。分解纤维素的微生物的分离实验完成后为确定得到的是纤维素分解菌，还需要进行 实验。

3．分解纤维素的微生物的分离的试验流程

土壤取样

梯度稀释

纯化培养

微生物培养

（1）采集土样时，要选择 的环境。

（2）实验流程中“选择培养”的培养基类型是 ，该培养的目的是 ，确保从样品中分离到所需要的微生物。