课题2　土壤中分解尿素的细菌的分离与计数优秀教学设计说课稿

选修1专题2 课题2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数

一、教学目标

1.知识目标： 了解有关选择培养基的基础知识。

2.能力目标：

a.用涂布平板计数法进行微生物数量测定。

b.设计对照实验。

3.情感目标: 形成无菌不在的概念，养成讲究卫生的习惯

二、教学重点 对土样的选取和选择培养基的配制。

三、教学难点 对分解尿素的细菌的计数。

四

教学过程

（一）

课程导入：

复习回顾:1.研究和应用微生物的前提是什么？

2.实验室培养微生物关键是什么？

3.分离、纯化大肠杆菌的方法及原理？

导入本节目标。

第一课时

（二）新课探究: 从实例分析导入土壤中的细菌为什么可以分解尿素？（这类细菌可以产生脲酶）,怎么从土壤中分离出这些细菌？应选择什么培养基？

阅读课本P21，感悟科学家寻找耐高温的DNA聚合酶给你的启示。你如何将土壤中分解尿素的细菌分离出来？

一、研究思路

（一）筛选菌株

.原理：人为提供有利于目的菌株生长的条件（包括营养、温度、pH等），同时抑制或阻止其他微生物的生长。

2.尿素分解菌分离的原理：

利用以尿素为唯一氮源的培养基进行筛选。

思考：分离土壤中分解尿素的细菌时，你将如何配置培养基(

) ①加尿素

②不加尿素

③加琼脂

④不加琼脂

⑤加葡萄糖

⑥不加葡萄糖

⑦加硝酸盐

⑧不加硝酸盐 A．①③⑤⑦

B．②④⑥⑧

C．①③⑤⑧

D．①④⑥⑦

〖学生活动〗下表为分离分解尿素的细菌的培养基配方，请分析、回答下列问题。

化学组成

KHPO 1.4g

24 提供的营养

无机盐

NaHPO 2.1g

24无机盐

MgSO﹒7HO 0.2g

42无机盐

葡萄糖 10.0g

尿素 1.0g

琼脂 15.0g

蒸馏水定容到1000mL

碳源

氮源、碳源

不提供营养，凝固剂

水

此培养基能否筛选出产生脲酶的细菌？为什么？

能。只有产生脲酶的细菌才能利用尿素作为氮源而生存

3.选择培养基：

允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基。

〖举一反三〗分离下列微生物，你将如何配制培养基

（1）将土壤中的固氮菌分离出来

（2）将土壤中自养微生物分离出来

（3）筛选出抗青霉素的微生物

（4）筛选出耐高浓度食盐的微生物

思考: 1.含有尿素的选择培养基只能分离出一种分解尿素的细菌吗？

不一定，只要能利用尿素的微生物都可以分离出来。如芽孢杆菌、小球菌、假单胞杆菌、克氏杆菌、棒状杆菌、梭状芽孢杆菌，某些真菌和放线菌也能分解尿素。

2.如何鉴定分离得到的就是能分解尿素的细菌？

在以尿素作为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂,接种培养该细菌，若指示剂变红，说明该种菌分解了尿素。（见：教材P26课题延伸）

（二）统计菌落数目

1.微生物计数都有哪些常用方法？

①显微镜直接计数

：利用血细胞计数板，在显微镜下计算一定容积样品中微生物的数量。

缺点：不能区分死菌与活菌；不适于对运动细菌的计数；

需要相对高的细菌浓度；个体小的细菌在显微镜下难以观察. ②活菌计数法：稀释涂布平板法

为什么不用平板划线法？因为平板划线法无法较准确计数，一般只用于菌种的分离

a、原理：在稀释度足够高时，微生物在固体培养基上所形成的一个菌落是由一个单细胞繁殖而成的，即一个菌落代表原先的一个单细胞。

b、计算:每克样品中的菌落数＝(C÷V)×M

C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(ml)，M代表稀释倍数。

〖活学活用〗某同学在稀释倍数为106

的培养基中测得平板上菌落数的平均数为234，那么每克样品中的菌落数是（涂布平板时所用稀释液的体积为0.1ml）

A. 2.34×108

B. 2.34×109

C. 234

D. 23.4

2.实例分析：两位同学的结果是否准确？导致不准确的原因可能是什么？由此，你得出的结论是什么？

同学

甲

乙

平板1

230

21

平板2

212

平板3

平均数

230

评价

没有设置重复组，因此结果不具说服力。

1个平板的计数结果与另

2个相差太远,说明操作过程中可能出现了错误

256

163

结论

①设计实验时，一定要涂布至少3个平板，作为重复组，才能增强实验的说服力与准确性。

②在分析实验结果时，一定要考虑所设置的重复组的结果是否一致（30-300个），结果不一致，意味着操作有误，需要重新实验。不能简单地将3个平板的计数值用来求平均值。③统计的菌落往往比活菌的实际数目低。

(因为当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落) 练习题：用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数，在对应稀释倍数为106的培养基中，得到以下几种统计结果，正确的是(

) A．涂布了一个平板，统计的菌落数是230 B．涂布了两个平板，统计的菌落数是215和260，取平均值238 C．涂布了三个平板，统计的菌落数是21、212和256，取平均值163 D．涂布了三个平板，统计的菌落数是210、240和250，取平均值233 〖延伸思考〗

对同一细菌培养液样品分别用显微镜直接计数法和稀释涂布平板法测定其菌体数量，你认为两种方法所测数据有何差异？

①稀释涂布平板法统计出的菌落数偏小

②显微镜计数法不能区分活菌死菌。

方法规律:用稀释涂布平板法计数微生物的方法

(1)稀释涂布平板操作要求：按照平行重复和对照的原则，每一稀释度的菌液涂布3个或3个以上的平板。

(2)计数的时机：当各平板上菌落数目稳定时进行计数。

(3)可用于计数的平板：选择菌落数在30～300的平板(相同稀释度的平板均符合该特点)进行计数，然后取平均值。

(4)计算：每克样品中的菌落数＝(C÷V)×M

C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，

V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(ml)，

M代表稀释倍数。

（三）设置对照

1.此实验（微生物的分离与计数）过程中是否需要设置对照？设置对照的主要目的是什么？

需要，目的是排除实验组中非测试因素（培养基是否被污染，培养基中是否混有其他氮源，接种、培养过程中是否严格无菌操作等）对实验结果的影响，提高实验结果的可信度。

2.请你帮一帮A同学，他该怎么办？

方案一：用其他同学的培养基培养A同学的土样

结果预测：如果结果与A同学一致，则证明A无误；如果结果不同，则证明A同学存在操作失误或培养基的配制有问题。

方案二：将A同学配制的培养基在不加土样的情况下进行培养，作为空白对照，以证明培养基是否受到污染。

3.受A同学的启发，你在实验时该如何设置对照？

培养空白培养基，证明培养基是否受到污染。

小结本节课内容.