复习与测试优秀完整教案

专题2课题1 微生物的实验室培养

教学设计

【学习目标】

1.了解培养基的用途、种类及一般成分，

2.掌握培养基制作的一般的步骤，

3.掌握微生物分离中的划线法和涂布法。

4.学会一般的消毒、灭毒的方法，进行无菌技术的操作。

【学习重点】培养基的制备、微生物的培养的操作。 【学习难点】培养基的制备和微生物的分离。 【教材导读】

一、基础知识：阅读教材P14-16，分析回答下列问题。

（一）基础知识

1．培养基的配制原则是

目的要明确

、

营养要协调

和

PH要适宜

培养基的种类包括

固体培养基

和

液体培养基

。

琼脂是从红藻中提取的

多糖，在配制培养基中用作为凝固剂。

2．培养基的化学成分包括水、无机盐、碳源、氮源四类营养成分。此外，培养基还要满足微生物生长的pH、特殊营养物质和氧气等要求。

【思考1】牛肉膏和蛋白胨主要为微生物提供糖、维生素和有机氮等营养物质。

【思考2】培养乳酸杆菌时需要添加维生素；培养霉菌时需要将培养基pH调节为酸性；

培养细菌时需要将pH调节为中性或微碱性。

（二）无菌技术

1．获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌的入侵。

2．无菌技术包括：对实验操作空间、操作者的衣着和手进行清洁和消毒；将培养器皿、接种用具和培养基等器具进行灭菌；为避免周围微生物污染，实验操作应在酒精灯火焰附近旁进行；避免已灭菌处理的材料用具与周围物品相接触。

3．比较消毒和灭菌（填表）

比较项

理化因素的作用强度

消灭微生物的数量

芽孢和孢子能否被消灭

消毒

较为温和

部分生活状态的微生物

不能

灭菌

强烈

全部微生物

能

1

【思考3】无菌技术除了防止培养物被污染外，还具有的目的是防止感染实验操作者。

4.

消毒方法：生活经常用到的是煮沸消毒法；对一些不耐高温的液体则用巴氏消毒法；对接种室、接种箱或超净工作台首先喷洒石炭酸或煤酚皂等溶液，然后使用紫外线进行物理消毒；实验者的双手使用酒精进行消毒；饮水水源用氯气进行消毒；肌肉注射时所用的皮肤消毒剂有酒精、碘酒；皮肤擦伤后所用的消毒剂有结晶紫、红汞、H2O2等。

5．灭菌方法：接种环、接种针、试管口等用灼烧灭菌法；玻璃器皿、金属用具等用干热灭菌法，所用器械是干热灭菌箱；培养基、无菌水等用高压蒸汽灭菌法，所用器械是高压蒸汽灭菌锅。表面灭菌和空气灭菌等使用紫外线灭菌法，所用器械是紫外灯。

6．对接种环灭菌时要是用酒精灯的充分燃烧层火焰灼烧可能深入试管的部位。

7．利用干热灭菌箱对玻璃器皿灭菌时物品不能太挤，目的是避免妨碍热空气流通。

8．高压蒸汽灭菌法：物品装入高压蒸汽灭菌锅灭菌后，要首先打开排气阀，煮沸并排除锅内的冷空气，目的是有利于锅内温度升高；随后关闭排气阀继续加热，气压升至100kPa，温度为121℃，并维持15～30min；切断热源使温度自然降温，气压务必降至零时打开锅盖，其目的是防止容器中的液体暴沸。

二、实验操作：阅读教材P16-20，分析回答下列问题

（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基

1.制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的方法步骤是计算、称量、溶化、调pH、灭菌、倒平板

(二)纯化大肠杆菌

1、微生物接种的最常用方法是平板划线法和稀释涂布法，另外还有固体斜面接种等。

2.平板划线法：通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基表面。

3.稀释涂布平板法：将菌液进行一系列梯度稀释，并将不同稀释度菌液分别涂布到琼脂固体培养基上进行培养。当稀释倍数足够高时，即可获得单个细菌形成的标准菌落。

二、预习检测 1．有关微生物营养物质的叙述中，正确的是

A.是碳源的物质不可能同时是氮源

B.凡碳源都提供能量

C.除水以外的无机物只提供无机盐

D.无机氮源也能提供能量

2．下面对发酵工程中灭菌的理解不正确的是

A.防止杂菌污染

B.消灭杂菌

C.培养基和发酵设备都必须灭菌

D.灭菌必须在接种前

2

专题2课题1 微生物的实验室培养

教学设计

【合作与探究】

一、倒平板操作

在酒精灯火焰旁右手拿锥形瓶，左手拔出棉塞；使锥形瓶的瓶口迅速通过火焰，目的是消灭瓶口的杂菌，防止杂菌感染培养基；左手将培养皿打开一条缝隙，右手将培养基倒入培养皿后，立刻盖上皿盖。待平板冷却凝固后，将平板倒过来放置，目的是防止培养基冷却过程中形成的水滴落到培养基表面。

【思考1】

⑴培养基灭菌后，需要冷却到50左右，才能用来倒平板。你用什么方法来估计培养基的

温度？

⑵为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？

⑶平板冷凝后，为什么要将平板倒置？

⑷在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能

用来培养微生物吗？为什么？

不能。空气中的杂菌会在这些粘附的培养基繁殖，并污染培养皿内的培养基。

二、平板划线的操作

1、将接种环在酒精灯火焰上灼烧直至烧红；

2、在酒精灯火焰旁冷却接种环，并打开大肠杆菌的菌种试管的棉塞；

3、将菌种试管口通过火焰达到消灭试管口杂菌的目的；

4、将冷却的接种环伸入到菌液中取出一环菌种；

5、将菌种试管口再次通过火焰后塞上棉塞；

6、将皿盖打开一条缝隙，把接种环伸入平板内划3～5条平行线，盖上皿盖，不要划破培养基；灼烧接种环，冷却后从第一区划线末端开始向第二区域内划线。重复上述过程，完成三、四、五区域内划线。

注意：不要将第五区的划线与第一区划线相连；将平板倒置放在培养箱中培养。

【思考2】划线前都要灼烧接种环的目的是消灭接种环上杂菌和残留菌种；

取菌种和划线前都要求接种环冷却后进行，其目的是防止高温杀死菌种；

3

最后灼烧接种环的目的是防止细菌污染环境和操作者。

【思考6】每次划线后都从上次划线末端开始，目的是逐步使细菌分散开来

三、系列稀释操作：

取盛有9mL水的无菌试管6支，编号。用灼烧冷却的移液管吸取1mL菌液注入编号为101试管中，并吹打3次，使之混匀。从101倍液中吸取1mL菌液注入到编号为102试管内吹打均匀，获得102倍液。依此类推。

四、涂布平板操作：

将接种工具涂布器浸泡在盛有体积分数为70％酒精的烧杯中。将滴管灼烧冷却后，吸取不超过0.1mL菌液滴加到培养基表面。将粘有少量酒精的涂布器在火焰上引燃，燃尽后冷却8～10s。用涂布器将菌液涂布均匀。将接种培养基和一个未接种培养基放到37℃培养箱中培养12h和24h后观察并记录。

三、结果分析与评价：阅读教材P20，讨论并回答下列问题。

1．培养未接种培养基的作用是对照，若有菌落形成，说明培养基灭菌不彻底。

2．在肉汤培养基上，大肠杆菌菌落呈白色色，为圆形，光滑有光泽，边缘整齐。

3．培养12h和24h后的菌落大小不同，菌落分布位置相同（相同、不同）。

4．常用菌种利用临时保藏法保存，用固体斜面培养基培养后保存在4℃冰箱中。长期保存菌种的方法是甘油管藏法，将菌种与无菌甘油体积等量混合后保存在冷冻箱中。

四、构建知识网络

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专题2课题1 微生物的实验室培养

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班级 姓名

座号 成绩

1、下列有关培养基的叙述正确的是？

A、培养基是为微生物的生长繁殖提供营养的基质

B、培养基只有两类：液体培养基和固体培养基

C、固体培养基中加入少量水即可制成液体培养基

D、微生物在固体培养基上生长时，可以形成肉眼可见的单个细菌

2、不同培养基的具体配方不同，但一般都含有？

A、碳源、磷酸盐和维生素

B、氮

源和维生素

C、水、碳源、氮源和无机盐

D、碳元素、氧元素、氢元素、氮元素

3、制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的步骤是? A、计算、称量、倒平板、溶化、灭菌

B、计算、称量、溶化、倒平板、灭菌

C、计算、称量、溶化、灭菌、倒平板

D、计算、称量、灭菌、溶化、倒平板

4、有关倒平板的操作错误的是? A、将灭过菌的培养皿放在火焰旁的桌面上

B、使打开的锥形瓶瓶口迅速通过火焰

C、将培养皿打开，培养皿盖倒放在桌子上

D、等待平板冷却凝固后需要倒过来放置

5、有关平板划线操作正确的是？ A、使用

已灭菌的接种环、培养皿，操作过程中不再灭菌

B、打开含菌种的试管需通过火焰灭菌，取出菌种后需马上塞上棉塞

C、将沾有菌种的接种环迅速伸人平板内，划三至五条平行线即可

D、最后将平板倒置，放人培养箱中培养

6、高温灭菌的原理是

A、每种微生物生长的最适宜温度是一定的 B、微生物对于高温环境不适应

C、高温破坏了细胞内的蛋白质、核酸，影响其生命活动

5

D、

高温降低了环境中的氧气浓度

7、能排除培养基是否有杂菌污染的方法是

A、将未接种的培养基放在实验桌培养 B、将未接种的培养基放在窗台培养

C、将未接种的培养基放在恒温箱中培养 D、将已接种的培养基放在恒温箱中培养

8、灭菌的标准是

A、杀死所有的病原微生物 B、杀死所有的微生物

C、杀死所有微生物的细胞、芽胞、孢子 D、抑制病原菌生长

9、用稀释涂布平板法来统计样品中活菌的数目，其结果与实际值比

A、比实际值要高 B、

比实际值要低 C、和实际值一样 D、

比实际值可能高也可能低

10将接种后的培养基和未接种的培养基同时放入37度的恒温箱中的目的是

A、对比观察培养基有没有被微生物利用 B、

对比分析培养基上是否生有杂菌

B、没必要放入未接种的培养基 D、

为了下次接种时再用

11、请选出下列正确的操作步骤（ ）

①土壤取样 ②称取10g土壤取出加入盛有90ml无菌水的锥形瓶中

③吸取0.1ml进行平板涂布④ 依次稀释至101、102、103、104、105、106、107稀释度

A、① ② ③ ④ B、① ③ ② ④

C、① ② ④ ③ D、① ④ ② ③

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