课题3　血红蛋白的提取和分离教案推荐

高二生物教学案

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课题

血红蛋白的提取和分离 预 习 完 成

学习目标：

本课题通过尝试对血液中血红蛋白的提取和分离，使学生能够体验从复杂体系中提取生物大分子的基本过程和方法，并了解色谱法、电泳法等分离生物大分子的基本原理，为今后学习运用这些技术打下基础。

学习重点和难点：

学习重点：凝胶色谱法的原理和方法。

学习难点：样品的预处理

预习内容

一．凝胶色谱法

(1)概念：凝胶色谱法也称作____________，是根据____________分离蛋白质的有效方法。

(2)原理：大多数凝胶是由____________构成的小球体，内部有许多贯穿的通道，当不同的蛋白质通过凝胶时，____________的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程____________，移动速度____________；而____________的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只能在____________移动，路程____________。相对分子质量不同的蛋白质因此得以分离。

二．缓冲溶液

(1)作用：在一定范围内，缓冲溶液能抵制____________对溶液____________的影响，维持pH基本不变。

(2)配制：通常由____________种缓冲剂溶解于水中配制而成，调节缓冲剂的____________就可以制得____________缓冲液。

三．电泳

(1)概念：带电粒子在____________的作用下发生____________的过程。

(2)原理：许多重要的生物大分子，如____________、____________等都具有____________的基团，在一定pH下，这些基团会带上____________或____________。在电场的作用下，这些带电分子会向着____________移动。电泳利用了分离样品中各种分子____________以及分子本身的____________、____________不同，使带电分子产生不同的____________，从而实现样品中各种分子的分离。

四．蛋白质提取分离一般分为____________、____________、____________、____________。

五．实验操作

I．样品处理

血红蛋白由____________肽链组成，包括两个____________和两个____________。每条肽链环绕一个____________基团，此基团可携带____________或____________。血红蛋白因含有血红素而呈现____________。

(1)红细胞的洗涤

①目的：去除

。

②方法：____________离心，如500 r·min1离心2 min，然后用胶头吸管吸出上层透明的____________，将下层____________的红细胞液体倒入____________，再加入____________的生理盐水，缓慢搅拌____________，低速短时间离心，如此重复洗涤____________，直至上清液中没有____________，表明红细胞已洗涤干净。

(2)血红蛋白的释放：将洗涤好的红细胞倒入烧杯中，加____________到原血液的体积，再加40％的____________，置于____________上充分搅拌10 min。

(3)分离血红蛋白溶液：将搅拌好的混合液离心后可观察到试管中溶液分为4层。

第1层：____________的甲苯层

第2层：____________的沉淀层——____________薄层固体

第3层：____________的水溶液——____________透明

第4层：其他杂质的____________色沉淀物

将液体用____________过滤，除去____________，于____________中静置片刻后，分出下层的____________液体。

(4)透析

①过程：取1 mL的_________溶液装入________中，将其放入盛有300 mL的20 mL·L1的____________中(pH = ____________)，透析12 h。

②原理：透析袋能使

自由进出，而将

保留在袋内。

③目的：可以除去

，或用于

巩固练习

1．用凝胶色谱法分离蛋白质时，分子量大的蛋白质 （ ）

A．路程较长，移动速度较慢

B．路程较长，移动速度较快

C．路程较短，移动速度较慢

D．路程较短，移动速度较快

2．利用凝胶色谱法什么样的蛋白质先洗脱出来

（ ）

A．相对分子质量大的

B．溶解度高的

C．相对分子质量小的

D．所带电荷多的

3．亚铁血红素基因可携带

（ ）

A．一分子CO

B．一分子NO

C．一分子O2或CO2

D．一分子NO2

4．将经处理破裂后的红细胞混合液以2000 r／min的速度离心10 min后，离心管中的溶液分为四层，从上到下的顺序依次是

（ ）

A．血红蛋白、甲苯层、脂类物质层、沉淀层

B．甲苯层、沉淀层、血红蛋白、脂类物质层

C．脂类物质层、血红蛋白、甲苯层、沉淀层

D．甲苯层、脂类物质层、血红蛋白、沉淀层

5．凝胶色谱法分离蛋白质的依据是

（ ）

A．对其他分子的亲和力

B．溶解度

C．所带电荷多少

D．相对分子质量的大小

6．凝胶色谱法中所用的凝胶的化学本质大多是

（ ）

A．糖类化合物

B．脂质

C．蛋白质

D．核酸

7．洗涤红细胞时，分离所用方法为

（ ）

A．低速成长时问离心

B．低速短时间离心

C．高速长时间离心

D．高速短时间离心

8．缓冲液的作用是：在一定范围内，抵制外界的影响来维持（

）基本不变。

（

）

A．温度

B．pH

C．渗透压

D．氧气浓度

9．电泳是指带电粒子在电场的作用下向着与其所带电荷（ ）的电极移动。

（

）

A．相同

B．相反

C．相对

D．相向

10．血液由血浆和各种血细胞组成，其中（ ）的含量最多。

（

）

A．白细胞

B．血小板

C．红细胞

D．淋巴细胞

11．为防止血液凝固，在采血容器中要预先加入抗凝血剂（ ）。

（

）

A. NaCl

B.甲苯

C.蒸馏水

D.柠檬酸