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专题5 血红蛋白的提取和分离一、凝胶色谱法1、凝胶色谱法也称做，是根据分离蛋白质的有效方法。2、当相对分子质量不同的蛋白质分子通过凝胶时，相对分子质量的蛋白质先分离出来，原因是
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课题3 血红蛋白的提取和分离教学设计内容推荐
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关键词：课题3 血红蛋白�…教学设计内容推荐
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专题5 血红蛋白的提取和分离
一、凝胶色谱法
1、凝胶色谱法也称做
，是根据
分离蛋白质的有效方法。
2、当相对分子质量不同的蛋白质分子通过凝胶时，相对分子质量
的蛋白质先分离出来，原因是
。
二、缓冲溶液
1、缓冲溶液的作用是
。
2、调节缓冲剂的_____________可以制得在不同pH范围内使用的缓冲液。
三、电泳
1、原理
电泳利用了待分离样品中各分子
以及
、
的不同，使带电分子产生不同的
，从而实现样品中各种分子的分离。
2、方法
两种常用的电泳方法是
和
，在测定蛋白质分子量时通常使用
。为了消除______________对迁移率的影响，可以在凝胶中加入SDS。SDS能使蛋白质发生________________，使蛋白质复合体在SDS的作用下会解聚成
，SDS能与各种蛋白质形成____________________，SDS所带负电荷的量大大超过了蛋白质分子原有的电荷量，使电泳速率完全取决于
。
四、实验操作
蛋白质的提取和分离一般分为四步：
、
、
和
。
（一）样品处理
1、红细胞的洗涤
洗涤红细胞的目的是
。分离红细胞时采用
速
时间离心（500r/min、离心2min），然后吸出上层透明的黄色
，将____层暗红色的红细胞倒入烧杯，再加入五倍体积的
，如此重复洗涤三次，直至上清液中没有黄色，表明红细胞已洗涤干净。
2、血红蛋白的释放
在
和
作用下，红细胞破裂释放出血红蛋白。
3、分离血红蛋白溶液
将搅拌好的混合液离心（2000r/ min、离心10 min）后，试管中的溶液分为4层。第一层为无色透明的
，第2层为白色薄层固体，是
，第3层是红色透明液体，这是
，第4层是
。将试管中的液体用滤纸过滤，除去
，于分液漏斗中静置片刻后，分出______层的红色透明液体。
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（二）粗分离：
将血红蛋白溶液装入透析袋中，放入
中，透析12h。透析的原理是
。透析的目的是__________________________________________________________。
（三）纯化：
法
洗脱时，待
时，用试管收集。
（四）纯度鉴定：
五、操作提示
1、红细胞的洗涤
洗涤次数过少，无法除去
；离心速度过高和时间过长会使
，达不到分离的效果。
2、凝胶色谱柱的装填
在色谱柱中装填凝胶的时候要尽量
，以
。如果凝胶装填的不够紧密，
，在装填凝胶柱时，不得有气泡存在。气泡会
。在凝胶色谱操作过程中，不能发生洗脱液流干，露出
的现象。
4、蛋白质的分离
在蛋白质分离过程中，如果
，说明色谱柱制作成功。
六、血红蛋白的结构
血红蛋白由_____条肽链组成，包括_________________________________。每条肽链环绕一个____________基团，次基团可携带一分子_______或一分子_____。血红蛋白因含有_______而呈现______色。
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