附录3　常用培养基配方教学实录

微生物的分离和培养复习

考纲要求：微生物的分离和培养（B）

考查内容：培养基的制备、无菌技术、微生物接种技术、微生物的分离和计数等

【知识网络】

概念

分类

培养基

组成成分

消毒

微无菌技术

灭菌

生

物

微生物接种

的

分

离对于频繁使用的菌种，可以采用 的方法

菌种的保存

和对于需要长期保存的菌种，可以采用 的方法

培

直接计数法

养

微生物计数方式

间接计数法

微生物的土壤中分解尿素的细菌的分离与计数

分离和数实例

量测定

分解纤维素的微生物的分离

【知识突破】

1、

消毒与灭菌的比较

项目

消毒

条件

较为

的物理或化学方法

的理化因素

结果

仅杀死物体表面或内部的部分微生物

常用方法

煮沸消毒法

应用对象

日常用品

牛奶等不耐高温的液体

化学药剂消毒法

用

擦拭双手

接种工具

玻璃器皿、金属用具

培养基

灭菌

杀死物体内外所有

的微生物，包括

2、

纯化微生物的常用接种方法

比较项目

关键操作

注意事项

菌体获取

优点

缺点

平板划线法

在固体培养基表面连续划线

每次划线先后均需

接种环

在具有显著的菌落特征的区域菌落中挑取菌体

可以根据菌落的特点获得某种微生物的单细胞菌落

不能对微生物计数

1 稀释涂布平板法

一系列的梯度稀释、涂布平板法操作

稀释度要足够高

从适宜的稀释度的平板上的菌落中挑取菌体

既可以获得单细胞菌落，又能对微生物计数

需要涂布多个平板

3、

微生物的两种计数方法的比较

比较项目

原理

间接计数法

（稀释涂布平板法）

直接计数法

（显微计数法）

公式

缺点

结果

当样品的稀释度足够高时，培养基表面利用

，在显微镜下计算一生长的一个菌落，来源于样品稀释液中定容积的样品中微生物的数量

的

，通过统计平板上的

，就能推测出样品中大约含有多少活菌

当两个或多个菌体连在一起时，平板上观察到的只是

菌落

比实际值

不能区分细胞死活

比实际值

【典例精练】

1.下列叙述正确的是（

）

A.培养基是为微生物的生长繁殖提供营养的基质

B.培养基只有两类：液体培养基和固体培养基

C.固体培养基中加入少量水即可制成液体培养基

D.微生物在固体培养基上生长时，可以形成肉眼可见的单个细菌

2. 关于制备牛肉膏蛋白胨固体培养基，叙述错误的是（ ）

A. 操作顺序为计算、称量、熔化、倒平板、灭菌

B. 将称好的牛肉膏连同称量纸一同放入烧杯

C. 待培养基冷却至50℃左右时进行倒平板

D. 待平板冷却凝固约5～10min后将平板倒过来放置

3.用平板划线法或稀释涂布平板法都可以纯化大肠杆菌，二者的共同点有（ ）

①可以用相同的培养基 ②都要使用接种针进行接种

⑧都需要在火焰旁进行接种 ④都可以用来计数活菌．

A．①② B．③④ C．①③ D．②④

4.植物秸秆中的纤维素可被某些微生物分解，回答下列问题：

（1）在含纤维素的培养基中加入刚果红（CR）时，CR可与纤维素形成 色复合物。用含有CR的该种培养基培养纤维素分解菌时，培养基上会出现以该菌的菌落为中心的 。

（2）为从富含纤维素的土壤中分离获得纤维素分解菌的单菌落，某同学设计了甲、乙两种培养（成分见下表）：

酵母膏

培养基甲

+ 培养基乙

+ 无机盐

+ + 淀粉

+ + 纤维素粉

琼脂

+ - - + CR溶液

+ + 水

+ + 据表判断，培养基甲 （填“能”或“不能”）用于分离和鉴别纤维素分解菌，原因是 ；培养基乙 （填“能”或“不能”）用于分离和鉴别纤维素分解菌，原因是

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【课堂检测】

1.做“微生物的分离与培养”实验时,下列叙述正确的是（ ）

A.高压灭菌加热结束时,打开放气阀使压力表指针回到零后,开启锅盖

B.倒平板时,应将打开的皿盖放到一边,以免培养基溅到皿盖上

C.为了防止污染,接种环经火焰灭菌后应趁热快速挑取菌落

D.用记号笔标记培养皿中菌落时,应标记在皿底上

2.某研究小组从有机废水中分离微生物用于废水处理．下列叙述正确的是（ ）

A、培养基分装到培养皿后进行灭菌

B、接种后培养皿须放在光照培养箱中培养

C、培养过程中每隔一周观察一次

D、转换划线角度后需灼烧接种环后再划线

3.下图表示培养和纯化X细菌的部分操作步骤，下列有关叙述正确的是( )

A. 步骤①操作时，倒好平板后应立即将其倒置，防止水蒸气落在培养基上造成污染

B. 步骤②接种环和试管口应先在火焰上灼烧，接种环冷却后再放入试管中蘸取菌液

C. 步骤③沿多个方向划线，使接种物逐渐稀释，培养后可根据出现的单个菌落计数

D. 步骤④是将培养皿放在恒温培养箱中培养，一段时间后所得到的都是X细菌的菌落

4.下列关于微生物接种时平板划线操作的叙述中，正确的是（ ）

A.使用已灭菌的接种环、培养皿，操作过程中不再灭菌

B.打开含菌种的试管需要通过火焰灭菌，取出菌种后需直接塞好棉塞

C.将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内，划三至五条平行线即可

D.最后应将平板倒置，放入培养箱中培养

5.下列是关于“检测土壤中细菌总数”实验操作的叙述，其中错误的是（

）

A．用蒸馏水配制牛肉膏蛋白胨培养基，经高温、高压灭菌后倒平板

B．取104、105、106倍的土壤稀释液和无菌水各0.1ml，分别涂布于各组平板上

C．将实验组和对照组平板倒置，37℃恒温培养24-48小时

D．确定对照组无菌后，选择菌落数在300以上的实验组平板进行计数

6.有些细菌可以分解原油，从而消除由原油泄漏造成的土壤污染，某同学欲从受原油污染的土壤中筛选出能高效降解原油的菌株。回答问题：

（1）在筛选过程中，应将土壤样品稀释液接种于以______为唯一碳源的固体培养基上，从功能上讲，该培养基属于______培养基。

（2）纯化菌种时，为了得到单菌落，常采用的接种方法有两种，即___________和___________。

（3）为了筛选出高效菌株，可比较单菌落周围分解圈的大小，分解圈大说明该菌株的降解能力_______。

（4）通常情况下，在微生物培养过程中，实验室常采用的灭菌方法有灼烧灭菌、________和________。无菌技术要求实验操作应在酒精灯__________附近进行，以避免周围环境中微生物的污染。

7.人工瘤胃模仿了牛羊等反刍动物的胃，可用来发酵处理秸秆，提高秸秆的营养价值。为了增强发酵效果，研究人员从牛胃中筛选纤维素酶高产菌株，并对其降解纤维素能力进行了研3

究。请回答下列问题: (1)在样品稀释和涂布平板步骤中,下列选项不需要的是 (填序号)。

①酒精灯 ②培养皿 ③显微镜 ④无菌水

(2)在涂布平板时,滴加到培养基表面的菌悬液量不宜过多的原因是 (3)向试管内分装含琼脂的培养基时,若试管口粘附有培养基,需要用酒精棉球擦净的原因

是 。

(4)刚果红可以与纤维素形成红色复合物,但并不与纤维素降解产物纤维二糖和葡萄糖发生这种反应。

研究人员在刚果红培养基平板上，筛到了几株有透明降解圈的菌落(见右图)。

图中降解圈大小与纤维素酶的 有关。

图中降解纤维素能力最强的菌株是 (填图中序号)。

(5)研究人员用筛选到的纤维素酶高产菌株 J1 和 J4,在不同温度和 pH 条件下进行发测得发酵液中酶活性的结果见下图，推测菌株 更适合用于人工瘤胃发酵，理是

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