课题3　血红蛋白的提取和分离教学内容分析

专题5 DNA和蛋白质技术

课题3 血红蛋白的提取和分离

一、选择题

1．蛋白质的提取和分离的步骤是(

) A．样品处理、凝胶色谱操作、SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳

B．样品处理、凝胶色谱操作、纯化

C．样品处理、粗分离、纯化、纯度鉴定

D．样品处理、纯化、粗分离、纯度鉴定

2．下列关于凝胶色谱法的原理及操作的说法，不正确的是(

) A．是利用凝胶把分子大小不同的物质分离开的一种方法

B．在洗脱过程中，大分子不能进入凝胶内部而最先流出，而小分子可以进入凝胶内部而流速缓慢，以致最后流出

C．凝胶内部有很微细的多孔网状结构，其孔隙大小与被分离的物质分子的大小无相应关系

D．一般情况下，凝胶对待分离的物质没有吸附作用，因此所有待分离的物质都应该被洗脱出来

4．蛋白质的各种特性的差异，可以作为分离不同种类的蛋白质的依据。下列可作为分离依据的是(

) A．分子的形状、大小和溶解度

B．所带电荷的性质和多少、吸附性质

C．对其他分子的亲和力

D．分子的变性温度

5．下列有关血红蛋白的提取与分离的实验操作的叙述，正确的是(

) A．采集血样后要低速短时间离心获得血细胞

B．洗涤三次后如上清液仍有黄色，可增加洗涤次数，否则血浆蛋白无法除净

C．将血红蛋白溶液进行透析，其目的是去除相对分子质量较大的杂质

D．整个过程不断用磷酸缓冲液处理，是为了维持血红蛋白的结构

6．脲酶能够将尿素分解为氨和CO2，其活性位点上含有两个镍离子，在大豆、刀豆种子中含量较高，土壤中的某些细菌也能够分泌脲酶。实验室从土壤中分离得到了能够分解尿素的细菌M，并分别研究了培养液中的Ni2、Mn2和尿素浓度对细菌M脲酶产量的影响(说明：研究某一项时其他条件相同且适宜)，结＋＋果如下表。下列说法正确的是(

) 离子浓度(%) 脲酶产量

μ/moL Ni2

＋0 0．02 0．031 0 0 ＋0．0005 0．056 0．21 0．2 1．15 0．001 0．067 0．28 0．4 1．60 0．005 0．28 0．31 0．6 1．73 0．01 0．36 0．37 0．8 1．45 0．05

0．08

0．085

1．0

0．28 Mn2

尿素浓度(%) 脲酶产量μ/moL

A．所有脲酶都在核糖体上合成且在内质网上加工使其与镍结合才具有活性

B．实验表明，培养液中Ni2和Mn2对脲酶的影响为低浓度促进，高浓度抑制

＋＋C．细菌M合成脲酶需要尿素诱导，尿素的最适诱导浓度在0．4%～0．8%之间

D．凝胶色谱法分离脲酶时，脲酶比其他小分子蛋白质在凝胶柱中移动更慢

7．已知某样品中存在甲、乙、丙、丁、戊5种蛋白质分子，分子大小、电荷的性质和数量情况如图所示，下列有关蛋白质分离的叙述，正确的是(

) 专题5 DNA和蛋白质技术 课题3 血红蛋白的提取和分离

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A．若将样品以2 000 r/min的速度离心10 min，分子戊在沉淀中，则丙也一定在沉淀中

B．若用凝胶色谱法分离样品中的蛋白质，则分子甲移动速度最快

C．将样品装入透析袋中透析12 h，若分子丙保留在袋内，则乙也一定保留在袋内

D．若用SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳分离样品中的蛋白质分子，则分子甲和分子丁形成的电泳带相距最远

8．以下关于猪血红蛋白提纯的描述，不正确的是(

) A．洗涤红细胞时，使用生理盐水可防止红细胞破裂

B．猪成熟红细胞中缺少细胞器和细胞核，提纯时杂蛋白较少

C．血红蛋白的颜色可用于凝胶色谱法分离过程的监测

D．在凝胶色谱法分离过程中，血红蛋白比分子量较小的杂蛋白移动慢

9．下列关于电泳的说法正确的是(

) A．电泳是指不带电的分子在电场的作用下发生迁移的过程

B．电泳的过程要在一定的pH下，所以一定要使用缓冲液

C．葡聚糖凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳是两种常用的电泳方法

D．聚丙烯酰胺凝胶电泳中，溶液中加入SDS，电泳的迁移率主要取决于分子所带电荷的多少和分子相对分子质量的大小

10．下列有关提取和分离血红蛋白的实验的叙述，错误的是(

) A．该实验的材料必须选用鸡血

B．通过透析可以去除样品中相对分子质量较小的杂质，此为样品的粗分离

C．凝胶色谱法是利用蛋白质的相对分子质量的大小分离蛋白质

D．电泳法是利用各种分子带电性质的差异及分子的大小和形状不同进行分离

二、非选择题

11.“蛋白质科学研究设施”成为

国内十大科技新闻之一。这是因为随着人类基因组计划的进展以及多种生物基因测序工作的完成，人类跨入了蛋白质时代。对蛋白质的研究和应用，首先需要获得高纯度的蛋白质。请回答下列问题：

(1)蛋白质的提取和分离一般分为四步：____________、________、_________和纯度鉴定。

(2)如果要从红细胞中分离出血红蛋白，实验前取新鲜血液要在采血容器中预先加入柠檬酸钠，这样做的目的是_____________________。

(3)血红蛋白的提取又可以细分为：红细胞的洗涤、________________、分离血红蛋白溶液和_______。其中分离血红蛋白溶液时需要用到__________（仪器）分出下层红色透明液体。

(4)装填凝胶色谱柱时，要注意色谱柱内不能有气泡存在，一旦发现有气泡必须重新装。这是因为_____ _________________________________________________。

(5)凝胶色谱法是根据________________________来分离蛋白质。

(6)洗涤红细胞时应使用生理盐水而不使用蒸馏水的原因是____________________。洗涤的目的是去除

洗涤次数过少，无法除去_______________；离心速度过高和时间过长会使__________________一同沉淀，达不到分离效果。洗涤干净的标志是______________________________。释放血红蛋白的过程中起作用的专题5 DNA和蛋白质技术 课题3 血红蛋白的提取和分离

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是_____________________。

(7)在洗脱过程中加入物质的量浓度为20mmol/L的磷酸缓冲液（PH为7.0）的目的是______________ _______________________________。

12．下图表示血红蛋白提取和分离的部分实验装置，请据图分析回答下列问题：

(1)用甲装置分离蛋白质的方法叫_________________，是根据___________________________分离蛋白质的有效方法。C是________________________，其作用是________________________________。

(2)用甲装置分离血红蛋白时，待____________________________________时，用试管收集流出液，每5

mL收集一管，连续收集6管，图中试管序号表示收集的先后。经检测发现，试管②和试管⑤中蛋白质含量最高，则试管⑤中的蛋白质相对分子质量比血红蛋白________(填“大”或“小”)。

(3)乙装置用于__________，目的是去除样品中______________的杂质，图中A是__________________。B是______________溶液。现有一定量的血红蛋白溶液，进行上述操作时若要尽快达到理想的实验效果，可以_________________________________(写出一种方法)。

(4)图丙表示电泳法分离蛋白质的结果，不同蛋白质得以分离是因为_____________________________ _______________________________________________。

13．凝胶色谱技术不但应用于科学实验研究，而且已经大规模地用于工业生产。下图甲为凝胶色谱柱分离蛋白质的示意图，图乙为往色谱柱中加样过程，图丙为几种被分离蛋白质相对分子质量大小与洗脱液的洗脱体积的关系，请据图分析回答下列问题：

(1)观察图乙，往色谱柱中加样的正确操作顺序是________________(用序号表示)。在进行④操作前，应该等样品______________________，且要________(填“打开”或“关闭”)下端开口。

(2)图甲a、b均为蛋白质分子，其中先从凝胶色谱柱中洗脱出来的是________，原因是____________ _____________________________________________________________________________。

(3)自己制作凝胶色谱柱时，在色谱柱底部d位置相当于多孔板的结构可由_________________替代。

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(4)若图丙被分离的蛋白质混合液中含有肌红蛋白(相对分子质量为16 900)、血清蛋白(相对分子质量为68 500)、牛乳球蛋白(相对分子质量为35 000)、牛胰岛素(相对分子质量为5 700)，则图乙中A、B、C、D代表的物质依次是________________________________________________________________________。

14．血红蛋白是人和其他脊椎动物红细胞的主要组成成分，负责血液中O2和CO2的运输。图甲是血红蛋白的提取和分离流程，图乙为本实验中用SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定血浆某白蛋白的结果。请据图回答问题：

(1)将实验流程补充完整。①__________________________，②__________________________。

(2)凝胶色谱法的基本原理是根据______________________________分离蛋白质。

(3)洗涤红细胞的目的是去除________，洗涤干净的标志是____________________________。

(4)分离血红蛋白时，由上到下第________层是血红蛋白溶液。

(5)如果红色区带____________，说明色谱柱制作成功。

(6)相对分子质量测定：化学物质SDS能使蛋白质发生完全变性，解聚成单条肽链。在聚丙烯酰胺凝胶中加入一定量的SDS，电泳迁移率完全取决于肽链的分子大小。根据电泳结果，某同学得出“提取的血浆某白蛋白有两条肽链”的结论，这种说法可靠吗？________。理由是____________________________ __________________________________________________。

15．凝胶色谱技术由于设备简单，操作方便，不需要有机溶剂，对高分子物质有很高的分离效果，目前已被广泛应用于多个领域。电泳技术是在外电场作用下，利用分子携带的净电荷不同，把待测分子的混合物放在一定的介质(如琼脂糖凝胶)中进行分离和分析的实验技术，利用它可分离氨基酸、多肽、蛋白质、核苷酸、核酸等物质。如图是电泳装置和电泳结果，请据图分析回答下列问题：

(1)通过凝胶色谱法可将从红细胞中分离出的血红蛋白样品进一步_______。若选用SephadexG—100，则“G”表示________________________________________________。若凝胶色谱操作最后观察到的红色区带歪曲、散乱、变宽，这与______________有关。

(2)实验最后经过_______________________进行纯度鉴定。在电泳过程中，带电分子会向着与其所带电荷________的电极移动。

(3)图3是把含有21个氨基酸的多肽进行水解，得到的氨基酸混合物进行电泳的结果，由图可推知该多肽由________种氨基酸构成。

(4)电泳过程中分子的迁移速率除与本身所带净电荷的多少有关外，你认为影响电泳过程中分子迁移速率的因素还包括_____________________________________________________________(至少列出2种)。专题5 DNA和蛋白质技术 课题3 血红蛋白的提取和分离

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参考答案

1．蛋白质的提取和分离的步骤是(

) A．样品处理、凝胶色谱操作、SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳

B．样品处理、凝胶色谱操作、纯化

C．样品处理、粗分离、纯化、纯度鉴定

D．样品处理、纯化、粗分离、纯度鉴定

解析：选C。蛋白质的提取和分离一般分为样品处理、粗分离、纯化、纯度鉴定四步。SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳为实验操作过程中使用的技术。

2．下列关于凝胶色谱法的原理及操作的说法，不正确的是(

) A．是利用凝胶把分子大小不同的物质分离开的一种方法

B．在洗脱过程中，大分子不能进入凝胶内部而最先流出，而小分子可以进入凝胶内部而流速缓慢，以致最后流出

C．凝胶内部有很微细的多孔网状结构，其孔隙大小与被分离的物质分子的大小无相应关系

D．一般情况下，凝胶对待分离的物质没有吸附作用，因此所有待分离的物质都应该被洗脱出来

解析：选C。凝胶色谱法是根据相对分子质量大小分离蛋白质的有效方法。凝胶是由多糖类化合物构成的，其内部有很微细的多孔网状结构，小分子蛋白质可以进入凝胶内部，路程较长，移动速度慢，而相对分子质量较大的蛋白质无法进入凝胶内部，路程较短，移动速度快，因此在洗脱过程中最先流出。一般来说，凝胶对待分离的物质没有吸附作用，不会使待分离物质停止运动，最终所有要分离的物质都应该被洗脱出来。选用不同种凝胶，其网状结构不同，孔隙大小不同，可分离的分子大小不同，二者是相关的，故C项不正确。

3．有资料显示，在非洲，镰刀型细胞贫血症基因的携带者更能适应当地的环境。有人认为这种人的血红蛋白可能与正常人或镰刀型细胞贫血症病人的有一定差异。为证实这种猜想，需对携带者的血红蛋白进行检测，而检测前需要分离得到这种血红蛋白。试想分离提纯镰刀型细胞贫血症携带者(Aa)的血红蛋白时，用不到的药品或仪器是(

) A．琼脂糖

C．离心机

B．磷酸缓冲液

D．二苯胺

解析：选D。二苯胺是鉴定、检测DNA的化学试剂，与分离提纯血红蛋白无关，所以不需要该药品，故选D。

4．蛋白质的各种特性的差异，可以作为分离不同种类的蛋白质的依据。下列可作为分离依据的是(

) A．分子的形状、大小和溶解度

B．所带电荷的性质和多少、吸附性质

C．对其他分子的亲和力

D．分子的变性温度

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解析：选D。利用蛋白质的各种特性，可以采用不同的方法对蛋白质进行分离和提取。如蛋白质分子的形状和大小、在不同溶剂中的溶解度、所带电荷的性质和多少、吸附性质，以及对其他分子的亲和力等，都可作为分离依据。

5．下列有关血红蛋白的提取与分离的实验操作的叙述，正确的是(

) A．采集血样后要低速短时间离心获得血细胞

B．洗涤三次后如上清液仍有黄色，可增加洗涤次数，否则血浆蛋白无法除净

C．将血红蛋白溶液进行透析，其目的是去除相对分子质量较大的杂质

D．整个过程不断用磷酸缓冲液处理，是为了维持血红蛋白的结构

解析：选C。将血红蛋白溶液进行透析，其目的是去除相对分子质量较小的杂质，C项不正确。

6．脲酶能够将尿素分解为氨和CO2，其活性位点上含有两个镍离子，在大豆、刀豆种子中含量较高，土壤中的某些细菌也能够分泌脲酶。实验室从土壤中分离得到了能够分解尿素的细菌M，并分别研究了培养液中的Ni2、Mn2和尿素浓度对细菌M脲酶产量的影响(说明：研究某一项时其他条件相同且适宜)，结＋＋果如下表。下列说法正确的是(

) 离子浓度(%) 脲酶产量

μ/moL Ni2

＋0 0．02 0．031 0 0 0．0005 0．056 0．21 0．2 1．15 0．001 0．067 0．28 0．4 1．60 0．005 0．28 0．31 0．6 1．73 0．01 0．36 0．37 0．8 1．45 0．05

0．08

0．085

1．0

0．28 Mn2

＋尿素浓度(%) 脲酶产量μ/moL

A．所有脲酶都在核糖体上合成且在内质网上加工使其与镍结合才具有活性

B．实验表明，培养液中Ni2和Mn2对脲酶的影响为低浓度促进，高浓度抑制

＋＋C．细菌M合成脲酶需要尿素诱导，尿素的最适诱导浓度在0．4%～0．8%之间

D．凝胶色谱法分离脲酶时，脲酶比其他小分子蛋白质在凝胶柱中移动更慢

解析：选C。根据题意可知，细菌也能分泌脲酶，但细菌细胞内除核糖体外没有内质网等其他细胞器，故细菌分泌脲酶的过程与内质网无关，A错误；分析表中数据可知，培养液中尿素浓度在≤0．8%时，培养液中Ni2和Mn2对脲酶的影响为低浓度促进，高浓度抑制，但培养液中尿素浓度大于0．8%而小于1．0%＋＋时，没有此规律，B错误；表中数据表明，培养液中尿素的浓度在0．4%～0．8%之间时，脲酶的产量相对较高，说明细菌M合成脲酶需要尿素诱导，尿素的最适诱导浓度在0．4%～0．8%之间，C正确；凝胶色谱法分离蛋白质时，相对分子质量较小的小分子蛋白质在凝胶柱中移动更慢，D错误。

7．已知某样品中存在甲、乙、丙、丁、戊5种蛋白质分子，分子大小、电荷的性质和数量情况如图所示，下列有关蛋白质分离的叙述，正确的是(

)

A．若将样品以2 000 r/min的速度离心10 min，分子戊在沉淀中，则丙也一定在沉淀中

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B．若用凝胶色谱法分离样品中的蛋白质，则分子甲移动速度最快

C．将样品装入透析袋中透析12 h，若分子丙保留在袋内，则乙也一定保留在袋内

D．若用SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳分离样品中的蛋白质分子，则分子甲和分子丁形成的电泳带相距最远

解析：选A。分子丙的相对分子质量大于戊，所以，在离心时戊存在于沉淀中，丙也一定在沉淀中，A项正确。用凝胶色谱法分离蛋白质时，甲相对分子质量最小，容易进入凝胶内部，则移动速度最慢，B项错误。分子丙的相对分子质量大于乙，则丙保留在袋内，乙可能在袋外也可能在袋内，C项错误。SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳的迁移速度完全取决于分子的大小，因此，分子甲与丙形成的电泳带相距最远，D项错误。

8．以下关于猪血红蛋白提纯的描述，不正确的是(

) A．洗涤红细胞时，使用生理盐水可防止红细胞破裂

B．猪成熟红细胞中缺少细胞器和细胞核，提纯时杂蛋白较少

C．血红蛋白的颜色可用于凝胶色谱法分离过程的监测

D．在凝胶色谱法分离过程中，血红蛋白比分子量较小的杂蛋白移动慢

解析：选D。凝胶色谱法分离蛋白质过程中，分子量较小的蛋白质易进入凝胶内部，移动速度比较慢，故血红蛋白比分子量较小的杂蛋白移动快，D错误。

9．下列关于电泳的说法正确的是(

) A．电泳是指不带电的分子在电场的作用下发生迁移的过程

B．电泳的过程要在一定的pH下，所以一定要使用缓冲液

C．葡聚糖凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳是两种常用的电泳方法

D．聚丙烯酰胺凝胶电泳中，溶液中加入SDS，电泳的迁移率主要取决于分子所带电荷的多少和分子相对分子质量的大小

解析：选B。电泳的过程实质上是带电粒子在电场的作用下发生迁移的过程，A项错误；最常用的电泳方法是琼脂糖凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳，C项错误；聚丙烯酰胺凝胶电泳的过程中，为了消除电荷对迁移率的影响，可在凝胶中加入SDS，SDS可以与各种蛋白质形成蛋白质—SDS复合物，SDS所带负电荷的量远远超过蛋白质分子原有的电荷量，因而掩盖了不同种蛋白质之间的电荷差别，使电泳迁移率完全取决于分子的大小，D项错误；电泳过程要在一定的pH条件下进行，所以要在溶液中加入缓冲液，以维持溶液pH的稳定，B项正确。

10．下列有关提取和分离血红蛋白的实验的叙述，错误的是(

) A．该实验的材料必须选用鸡血

B．通过透析可以去除样品中相对分子质量较小的杂质，此为样品的粗分离

C．凝胶色谱法是利用蛋白质的相对分子质量的大小分离蛋白质

D．电泳法是利用各种分子带电性质的差异及分子的大小和形状不同进行分离

解析：选A。该实验的材料不能选用鸡血，而应选用哺乳动物的血液，因为后者所含的成熟的红细胞没有细胞核和各种细胞器，有利于得到较纯净的血红蛋白；透析袋可允许小分子自由进出，而大分子则保专题5 DNA和蛋白质技术 课题3 血红蛋白的提取和分离

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留在袋内，因此通过透析可以去除样品中相对分子质量较小的杂质，此为样品的粗分离；凝胶色谱法是利用蛋白质的相对分子质量的大小分离蛋白质；电泳法是利用各种分子带电性质的差异及分子的大小和形状不同进行分离。

一、非选择题

11.“蛋白质科学研究设施”成为

国内十大科技新闻之一。这是因为随着人类基因组计划的进展以及多种生物基因测序工作的完成，人类跨入了蛋白质时代。对蛋白质的研究和应用，首先需要获得高纯度的蛋白质。请回答下列问题：

(1)蛋白质的提取和分离一般分为四步：____________、________、_________和纯度鉴定。

(2)如果要从红细胞中分离出血红蛋白，实验前取新鲜血液要在采血容器中预先加入柠檬酸钠，这样做的目的是_____________________。

(3)血红蛋白的提取又可以细分为：红细胞的洗涤、________________、分离血红蛋白溶液和_______。其中分离血红蛋白溶液时需要用到__________（仪器）分出下层红色透明液体。

(4)装填凝胶色谱柱时，要注意色谱柱内不能有气泡存在，一旦发现有气泡必须重新装。这是因为_____ _________________________________________________。

(5)凝胶色谱法是根据________________________来分离蛋白质。

(6)洗涤红细胞时应使用生理盐水而不使用蒸馏水的原因是____________________。洗涤的目的是去除

洗涤次数过少，无法除去_______________；离心速度过高和时间过长会使__________________一同沉淀，达不到分离效果。洗涤干净的标志是______________________________。释放血红蛋白的过程中起作用的是_____________________。

(7)在洗脱过程中加入物质的量浓度为20mmol/L的磷酸缓冲液（PH为7.0）的目的是______________ _______________________________。

答案：（1）样品处理

粗分离

纯化

（2）防止血液凝固

（3）血红蛋白的释放

透析

分液漏斗

（4）气泡会搅乱洗脱液中蛋白质的洗脱次序，降低分离效果

（5）

相对分子质量的大小

（6）防止红细胞吸水破裂

杂蛋白（血浆蛋白）

白细胞和淋巴细胞

离心后的上清液没有黄色

蒸馏水和甲苯

（7）准确模拟生物体内的生理环境，保持体外的PH和体内的一致

12．下图表示血红蛋白提取和分离的部分实验装置，请据图分析回答下列问题：

(1)用甲装置分离蛋白质的方法叫_________________，是根据___________________________分离蛋白专题5 DNA和蛋白质技术 课题3 血红蛋白的提取和分离

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质的有效方法。C是________________________，其作用是________________________________。

(2)用甲装置分离血红蛋白时，待____________________________________时，用试管收集流出液，每5

mL收集一管，连续收集6管，图中试管序号表示收集的先后。经检测发现，试管②和试管⑤中蛋白质含量最高，则试管⑤中的蛋白质相对分子质量比血红蛋白________(填“大”或“小”)。

(3)乙装置用于__________，目的是去除样品中______________的杂质，图中A是__________________。B是______________溶液。现有一定量的血红蛋白溶液，进行上述操作时若要尽快达到理想的实验效果，可以_________________________________(写出一种方法)。

(4)图丙表示电泳法分离蛋白质的结果，不同蛋白质得以分离是因为_____________________________ _______________________________________________。

答案：(1)凝胶色谱法

相对分子质量的大小

磷酸缓冲液

洗脱血红蛋白

(2)红色的蛋白质接近色谱柱底端

小

(3)透析(粗分离)

相对分子质量较小

磷酸缓冲液

血红蛋白

增加缓冲液的量(或及时更换缓冲液)

(4)不同蛋白质所带电荷性质、分子大小和形状不同，导致电泳时迁移速度不同

13．凝胶色谱技术不但应用于科学实验研究，而且已经大规模地用于工业生产。下图甲为凝胶色谱柱分离蛋白质的示意图，图乙为往色谱柱中加样过程，图丙为几种被分离蛋白质相对分子质量大小与洗脱液的洗脱体积的关系，请据图分析回答下列问题：

(1)观察图乙，往色谱柱中加样的正确操作顺序是________________(用序号表示)。在进行④操作前，应该等样品______________________，且要________(填“打开”或“关闭”)下端开口。

(2)图甲a、b均为蛋白质分子，其中先从凝胶色谱柱中洗脱出来的是________，原因是____________ _____________________________________________________________________________。

(3)自己制作凝胶色谱柱时，在色谱柱底部d位置相当于多孔板的结构可由_________________替代。

(4)若图丙被分离的蛋白质混合液中含有肌红蛋白(相对分子质量为16 900)、血清蛋白(相对分子质量为68 500)、牛乳球蛋白(相对分子质量为35 000)、牛胰岛素(相对分子质量为5 700)，则图乙中A、B、C、D代表的物质依次是________________________________________________________________________。

答案：(1)②③④①

完全进入凝胶层

关闭 (2)a

a相对分子质量较大，无法进入凝胶内部的通道，只能在凝胶外部移动，路程较短，移动速度较快

(3)尼龙网和100目的尼龙纱

(4)牛胰岛素、肌红蛋白、牛乳球蛋白、血清蛋白

14．血红蛋白是人和其他脊椎动物红细胞的主要组成成分，负责血液中O2和CO2的运输。图甲是血红蛋白的提取和分离流程，图乙为本实验中用SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定血浆某白蛋白的结果。请据图回专题5 DNA和蛋白质技术 课题3 血红蛋白的提取和分离

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答问题：

(1)将实验流程补充完整。①__________________________，②__________________________。

(2)凝胶色谱法的基本原理是根据______________________________分离蛋白质。

(3)洗涤红细胞的目的是去除________，洗涤干净的标志是____________________________。

(4)分离血红蛋白时，由上到下第________层是血红蛋白溶液。

(5)如果红色区带____________，说明色谱柱制作成功。

(6)相对分子质量测定：化学物质SDS能使蛋白质发生完全变性，解聚成单条肽链。在聚丙烯酰胺凝胶中加入一定量的SDS，电泳迁移率完全取决于肽链的分子大小。根据电泳结果，某同学得出“提取的血浆某白蛋白有两条肽链”的结论，这种说法可靠吗？________。理由是____________________________ __________________________________________________。

答案：(1)①血红蛋白的释放

②凝胶色谱柱的装填

(2)相对分子质量的大小

(3)杂蛋白(或血浆蛋白)

离心后的上清液不再呈现黄色

(4)三

(5)均匀一致地移动

(6)不可靠

只能得出提取的血浆某白蛋白含有两种大小不同的肽链，不一定是两条

15．凝胶色谱技术由于设备简单，操作方便，不需要有机溶剂，对高分子物质有很高的分离效果，目前已被广泛应用于多个领域。电泳技术是在外电场作用下，利用分子携带的净电荷不同，把待测分子的混合物放在一定的介质(如琼脂糖凝胶)中进行分离和分析的实验技术，利用它可分离氨基酸、多肽、蛋白质、核苷酸、核酸等物质。如图是电泳装置和电泳结果，请据图分析回答下列问题：

(1)通过凝胶色谱法可将从红细胞中分离出的血红蛋白样品进一步_______。若选用SephadexG—100，则“G”表示________________________________________________。若凝胶色谱操作最后观察到的红色区带歪曲、散乱、变宽，这与______________有关。

(2)实验最后经过_______________________进行纯度鉴定。在电泳过程中，带电分子会向着与其所带电荷________的电极移动。

(3)图3是把含有21个氨基酸的多肽进行水解，得到的氨基酸混合物进行电泳的结果，由图可推知该多肽由________种氨基酸构成。

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(4)电泳过程中分子的迁移速率除与本身所带净电荷的多少有关外，你认为影响电泳过程中分子迁移速率的因素还包括_____________________________________________________________(至少列出2种)。

答案：(1)纯化

凝胶的交联程度、膨胀程度和分离范围

色谱柱装填

(2)SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳

相反

(3)6

(4)待测分子的大小、待测分子的形状、电泳的电压、凝胶的种类、凝胶的密度等(以上各项任选两项即可)

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