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第二节:土壤中分解尿素的细菌的分离与计数(教案) 一.菌种的筛选与选择培养基1.菌种的筛选:(1)自然界中目的菌株的筛选:①依据:②实例:(2)实验室中目的菌株的筛选:①原理:②方法:2.选择培养基:(1)概念:(2)选择培养基的制备原理:(3)选择培养基的制备方法:(4)选择培养基的用途:(5)实

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课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数国家获奖教案

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课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数国家获奖教案

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第二节:土壤中分解尿素的细菌的分离与计数(教案) 一.菌种的筛选与选择培养基

1.菌种的筛选:

(1)自然界中目的菌株的筛选:

①依据:

②实例:

(2)实验室中目的菌株的筛选:

①原理:

②方法:

2.选择培养基:

(1)概念:

(2)选择培养基的制备原理:

(3)选择培养基的制备方法:

(4)选择培养基的用途:

(5)实例:

(6)常见的选择培养基

①加入青霉素可以分离出酵母菌和霉菌。

②加入高浓度的食盐可得到金黄色葡萄球菌。

③无氮源培养基可以分离固氮微生物。

④石油是唯一碳源的培养基,可以分离能消除石油污染的微生物的目的。

⑤将培养基放在高温环境中培养,分离耐高温的微生物。

思考1:能在选择培养基上生长的肯定是所筛选的目的菌吗?

二.土壤中分解尿素的细菌的分离

1.实验流程

(1)土壤取样:

①土壤取样原因:

②要求:

③取样部位:

(2)制备培养基:

(3)样品的稀释与涂布平板:

①取样稀释:

②取样涂布:如教材图2-7:

备注:

★图中1、2、3平板是选择培养基,4平板为牛肉膏蛋白胨培养基,以判断选择培养基是否具有筛选作用;要有两个空白对照,即不涂布稀释后菌液的选择培养基和牛肉膏蛋白胨培养基,以验证培养基中是否含有杂菌。

★由于初次实验,对于稀释的范围没有把握,因此选择了一个较为宽泛的范围103~107倍的稀释液。

★实验时要对所用的平板、试管作好标记。如培养皿要注明培养基类型、培养时间、稀释度、培养物等。

(4)微生物的培养与观察:

①培养:

②计数:当菌落数目稳定时,选取菌落数在30~300的平板进行计数。在同一稀释度下,至少对3个平板进行计数,然后求出平均值,并根据平板所对应的稀释度计算出样品中细菌的数目。

③观察:

2.结果分析

(1)是否有杂菌污染:

(2)选择培养基是否有筛选作用:

(3)样品的稀释操作:

(4)重复组的结果:

3.分解尿素的细菌的进一步鉴定

(1)鉴定原理:细菌合成的脲酶将尿素分解成氨,氨会使培养基碱性增强,PH升高。

(2)鉴定方法:以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂,培养某种细菌,若指示剂变红,则PH升高,说明该种细菌能分解尿素。

三.微生物数量的测定方法

1.稀释涂布平板法(或活菌计数法或间接计数法) 原理:当样品的稀释度足够高时,培养基表面生长的一个菌落,来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数,就能推测出样品中大约含有多少活菌。

备注:用稀释涂布平板法计数微生物时注意事项

①稀释涂布平板操作要求:按照平行重复的原则每一稀释度的菌液涂布3个或3个以上的平板。

②计数的时机:当各平板上菌落数目稳定时进行计数。

③间接技术法统计的菌落数往往比实际数目低,原因有:

★当两个或多个细菌连在一起繁殖时,平板上观察到的只是一个菌落。

★统计结果只是活细菌产生的菌落数,而不包括死细菌的数目。

④为使结果接近真实值,一般选择菌落数在30~300的平板进行计数,要设置重复组,取其平均值。

2.显微镜直接计数法

用血细胞计数板计数

3.滤膜法

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