复习与测试课堂实录

专题二、微生物的培养与应用

【考纲要求】1.微生物的分离和培养。

2.某种微生物数量的测定。

3.培养基对微生物的选择作用。

4.利用微生物进行发酵来生产特定产物及微生物在其他方面的应用

【基础知识梳理】

（一）、培养基

1、培养基的种类：按物理性质分为固体培养基（琼脂：作凝固剂）和液体培养基，按化学成分分为合成培养基和天然培养基，按用途分为选择培养基和鉴别培养基。

2、培养基的成分一般都含有水、碳源、氮源、无机盐。

3、微生物在固体培养基表面生长，可以形成肉眼可见的菌落。

4、培养基还需满足微生物对PH、特殊营养物质以及氧气的要求。

（二）、无菌技术

1、获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌的入侵，实验操作应在酒精灯火焰附近进行。

2、常用消毒（无法灭菌，只能消毒）方法有：煮沸消毒、巴氏消毒、紫外线消毒和化学药物消毒。

3、常用灭菌方法有：①灼烧灭菌，金属用具，如接种环、接种针灭菌；②干热灭菌，能耐高温，需保持干燥的物品，如玻璃器皿、金属用具等。③高压蒸汽灭菌：如培养基的灭菌。

（三）、纯化技术

1、用固体培养基对大肠杆菌纯化培养，可分为两步：制备培养基和纯化大肠杆菌。

2、固体培养基的制备：计算→称量→溶化→灭菌→倒平板（在酒精灯火焰附近进行）

3、微生物常用的接种方法：平板划线法和稀释涂布平板法。

4、平板划线法是通过连续划线，将菌种逐步稀释分散到培养基表面，稀释涂布平板法是将菌液进行一系列的梯度稀释，分别涂布到培养基表面。当它们稀释到一定程度后，微生物将分散成单个细胞，从而在培养基上形成单个菌落。

5、微生物的计数方法：①活菌计数法（稀释涂布平板法）、②显微镜直接计数法（血细胞计数板）、③滤膜法（在培养基添加伊红美蓝，大肠杆菌菌落呈黑色）。

6、活菌计数法就是当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少个活菌。统计的菌落数往往比活菌的实际数目低。因为当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察的只是一个菌落。

7、显微镜直接计数也是测定微生物数量的常用方法，但它包括了死亡的微生物。

（四）、菌种的保藏

1、临时保藏：4℃的冰箱保藏。

2、长期保存：甘油管藏法（-20℃冷冻箱中保存）

（五）、教材实例（尿素分解菌和纤维素分解菌）

一）尿素分解菌

1、选择培养基：允许特定微生物生长，抑制或阻止其它微生物生长的培养基。（格式：以

#

#

为唯一碳（氮）源）

2、农作物不能直接吸收尿素，尿素只有被土壤中的细菌分解成氨后才能被植物利用。

3、土壤中的细菌之所以能分解尿素，是因为它们能合成脲酶。

4、分离分解尿素的细菌：培养基中以尿素为唯一氮源

5、鉴定分解尿素的细菌：酚红指示剂（在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂，如果PH升高，指示剂变红，可初步鉴定该菌能分解尿素）。

6、设置对照：①如何证明培养基是否受到污染：实验组的培养基中接种要培养的微生物，对照组中的培养基接种等量的蒸馏水（设置空白对照）。②如何证明某选择培养基是否有选择功能：实验组中的培养基用该选择培养基，对照组中培养基用普通培养基（牛肉膏蛋白胨培养基）。如果普通培养基的菌落数明显大于选择培养基中的数目，则说明该选择培养基有选择功能。

二）纤维素分解菌

1、土壤中的细菌能分解利用纤维素，是因为它们能产生纤维素酶。

2、纤维素酶是一种复合酶，至少包括三组分：C1酶、CX酶和葡萄糖苷酶。前两种酶使纤维素分解成纤维二糖，第三种酶将纤维二糖分解成葡萄糖。

3、分离分解纤维素的微生物：培养基中以纤维素为唯一碳源。

4、筛选纤维素分解菌的方法：刚果红染色法，其原理是刚果红可以与像纤维素这样的多糖物质形成红色复合物，但并不和水解后的纤维二糖和葡萄糖发生这种反应。当纤维素被纤维素酶分解后，刚果红—纤维素的复合物无法形成，培养基中会出现以纤维素分解菌为中心的透明圈。（产生了透明圈，说明纤维素被分解了，说明有纤维素分解菌）

【特别提醒】

1．归纳微生物分离与计数中的5个“两”

(1)两种无菌技术——消毒与灭菌。

(2)两类培养基——选择培养基、鉴别培养基。

(3)两类纯化菌种方法——平板划线法、稀释涂布平板法。

(4)两种对照组——培养基制备是否合格；培养基是否起到“筛选”作用。

(5)微生物两类计数方法——活菌计数法与显微镜直接计数法。

2．微生物培养和计数方法的易失分点：

(1)稀释涂布平板法：可分离也能计数(结果偏小)。

(2)平板划线法：只能纯化菌种，不能计数。

(3)显微计数法：不能区分菌体死活(结果偏大)。

【易错防范】

1．快速确认两类培养基

(1)鉴别培养基：加入的物质起“鉴别”作用(该物质可能与被鉴别菌种发生特殊颜色反应)，该物质加入后并未杀死其他微生物，其培养基中可生存多种微生物。

(2)选择培养基：加入的物质起“筛选”作用，该物质可抑制或杀死其他微生物，只有被选择的“目的菌种”才能生存下来。

2．平板划线法只适用于微生物的提纯，不适合进行计数，并且在最后一次划线的末端处的菌种最纯。

3．倒平板的温度一般在50 ℃左右适宜，温度过高会烫手，温度过低培养基又会凝固。

4．平板需倒置，这样既可使培养基表面的水分更好地挥发，又防止皿盖上的水珠落入培养基，造成培养基污染。

5.关注两种对照组与一种重复组

(1)将一未接种的选择培养基与接种的选择培养基一起培养——用于确认培养基灭菌是否彻底(制备是否合格)；

(2)将一接种的普通培养基与接种的选择培养基一起培养——用于确认选择培养基是否起到“筛选”作用；

(3)进行微生物计数时，每一稀释度下涂布三个平板，即设置重复组，是为

了求平均值，提高计数准确度。

本章检测

1．(2017·全国Ⅰ，37)某些土壤细菌可将尿素分解成CO2和NH3，供植物吸收和利用。回答下列问题：

(1)有些细菌能分解尿素，有些细菌则不能，原因是前者能产生________________。能分解尿素的细菌不能以尿素的分解产物CO2作为碳源，原因是________________________，但可用葡萄糖作为碳源，进入细菌体内的葡萄糖的主要作用是______________________(答出两点即可)。

(2)为了筛选可分解尿素的细菌，在配制培养基时，应选择____________________(填“尿素”“NH4NO3”或“尿素＋NH4NO3”)作为氮源，不选择其他两组的原因是________________。

(3)用来筛选分解尿素细菌的培养基含有KH2PO4和Na2HPO4，其作用有

__

___(答出两点即可)。

答案

(1)脲酶

分解尿素的细菌是异养生物，不能利用CO2来合成有机物

为细胞生命活动提供能量，为其他有机物的合成提供原料

(2)尿素

其他两组都含有NH4NO3，能分解尿素的细菌和不能分解尿素的细菌都能利用NH4NO3，不能起到筛选作用

(3)为细菌生长提供无机营养，作为缓冲剂保持细胞生长过程中pH稳定

解析

(1)只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，以尿素作为氮源。能分解尿素的细菌属于异养型生物，不能以尿素的分解产物CO2作为碳源。能分解尿素的细菌可以用葡萄糖作为碳源，进入细菌体内的葡萄糖的主要作用是：一方面可氧化分解为细胞生命活动提供能量，另一方面其代谢中间产物可为多种有机物的合成提供原料。

(2)为了筛选可分解尿素的细菌，在配制培养基时，应选择以尿素作为唯一氮源的选择培养基，而其他两组都含有含氮物质NH4NO3，能分解尿素的细菌和不能分解尿素的细菌都能利用NH4NO3，不能起到筛选作用。

(3)用来筛选分解尿素细菌的培养基含有KH2PO4和Na2HPO4，其作用：KH2PO4和Na2HPO4构成缓冲液，可维持培养基的pH相对稳定；KH2PO4和Na2HPO4能为微生物生长提供无机盐。

2．(2016·全国乙，39)空气中的微生物在重力等作用下，可以一定程度地沉降。某研究小组欲用平板收集教室空气中的微生物，以了解教室内不同高度空气中微生物的分布情况。实验步骤如下：

①配制培养基(成分：牛肉膏、蛋白胨、NaCl、X、H2O)；

②制作无菌平板；

③设置空白对照组和若干实验组，进行相关操作；

④将各组平板置于37 ℃恒温箱中培养一段时间，统计各组平板上菌落的平均数。

回答下列问题：

(1)该培养基中微生物所需的氮来源于________________________。若要完成步骤②，该培养基中的成分X通常是________。

(2)步骤③中，实验组的操作是______________________________________________。

(3)若在某次调查中，某一实验组平板上菌落平均数为36个/平板，而空白对照组的一个平板上出现了6个菌落，这种结果说明在此次调查中出现了________现象。若将30(即36－6)个/平板作为本组菌落数的平均值，该做法________(填“正确”或“不正确”)。

答案

(1)牛肉膏、蛋白胨

琼脂

(2)将各实验组平板分别放置在教室不同高度的位置上，开盖暴露一段时间

(3)污染

不正确

解析

(1)牛肉膏和蛋白胨都含有蛋白质的水解产物，都可以作为氮源；平板为固体培养基，故需要加入凝固剂琼脂。(2)实验探究的是教室内“不同高度空气”中微生物的分布，其中变量为不同高度，故需在不同高度下放置开盖平板。同时，为了保证单一变量，需要保证开盖放置时间一致。为了保证实验可靠性，需要设置多个平行组。(3)在完全正确的操作情况下，空白对照组中不应出现菌落。若出现菌落，表明操作过程中存在杂菌污染，属于实验失误，所有实验数据均不应采用。

3．(2016·全国丙，39)某同学用新鲜的泡菜滤液为实验材料分离纯化乳酸菌。分离纯化所用固体培养基中因含有碳酸钙而不透明，乳酸菌产生的乳酸能溶解培养基中的碳酸钙。回答下列问题：

(1)分离纯化乳酸菌时，首先需要用________对泡菜滤液进行梯度稀释，进行梯度稀释的理由是______________________________________。

(2)推测在分离纯化所用的培养基中加入碳酸钙的作用有________________和________________。分离纯化时应挑选出____________的菌落作为候选菌。

(3)乳酸菌在－20 ℃长期保存时，菌液中常需要加入一定量的________(填“蒸馏水”“甘油”或“碳酸钙”)。

答案

(1)无菌水

泡菜滤液中菌的浓度高，直接培养很难分离得到单菌落

(2)鉴别乳酸菌

中和产生的乳酸(或酸)

具有透明圈

(3)甘油

解析

(1)分离纯化乳酸菌时，首先需要用无菌水对泡菜滤液进行梯度稀释；进行梯度稀释的理由是在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的乳酸菌将被分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成单个的菌落。(2)在分离纯化所用的培养基中加入碳酸钙的作用有中和乳酸菌代谢过程中产生的乳酸和利于乳酸菌的鉴别和分离；分离纯化时应挑选出在平板上有透明圈

的菌落作为候选菌。(3)乳酸菌在－20 ℃长期保存时应使用甘油管藏的方法，故菌液中常需要加入一定量的甘油。

4．(2014·新课标Ⅱ，39)为了调查某河流的水质状况，某研究小组测定了该河流水样中的细菌含量，并进行了细菌分离等工作。回答下列问题：

(1)该小组采用稀释涂布平板法检测水样中的细菌含量。在涂布接种前，随机取若干灭菌后的空白平板先行培养了一段时间，这样做的目的是___________；然后，将1 mL水样稀释100倍，在3个平板上用涂布法分别接入0.1 mL稀释液；经适当培养后，3个平板上的菌落数分别为39、38和37。据此可得出每升水样中的活菌数为______________。

(2)该小组采用平板划线法分离水样中的细菌。操作时，接种环通过________灭菌，在第二次及以后的划线时，总是从上一次划线的末端开始划线。这样做的目的是____________________________________________。

(3)示意图A和B中，________表示的是用稀释涂布平板法接种培养后得到的结果。

(4)该小组将得到的菌株接种到液体培养基中并混匀，一部分进行静置培养，另一部分进行振荡培养。结果发现：振荡培养的细菌比静置培养的细菌生长速度快。分析其原因是：振荡培养能提高培养液中__________的含量，同时可使菌体与培养液充分接触，提高____________的利用率。

答案

(1)检测培养基平板灭菌是否合格

3.8×107

(2)灼烧

将聚集的菌体逐步稀释以便获得单个菌落

(3)B

(4)溶解氧

营养物质

解析

(1)为了检测培养基平板灭菌是否合格，可在涂布接种前，随机取灭菌后的空白平板先行培养一段时间。0.1 mL稀释液中平均有(39＋38＋37)/3＝38个活菌，则每毫升稀释液中活菌的数目为38/0.1＝380，则稀释前每毫升水样中活菌数目为380×100＝3.8×104，则每升水样中活菌数目为3.8×104×1 000＝3.8×107。(2)接种环、接种针等金属用具可直接在酒精灯火焰的充分燃烧层灼烧，以达到迅速彻底灭菌的目的。在第二次及以后的划线时，总是从上一次划线的末端开始划线，其目的是将聚集的菌体逐步稀释以便获得单个菌落。(3)比较图A和图B可以看出：A培养基中细菌的分布呈线性，是用平板划线法接种培养后得到的结果；B培养基中细菌均匀分布，是用稀释涂布平板法接种培养后得到的结果。(4)振荡培养可以提高培养液中溶解氧的含量，还可以使菌体与培养液充分接触，提高了营养物质的利用率，因此振荡培养的细菌比静置培养的细菌生长速度快。

5．多氯联苯是一种对人体有很大危害的有机物质，呈油状液体，污染土壤后，很难清除。研究发现部分酵母菌具有分解多氯联苯的作用，为消除这种污染，科研人员计划从受污染的土壤中筛选出高效分解多氯联苯的菌株。

(1)筛选分解多氯联苯的菌株时，应将土壤样品________，接种到以____________为唯一碳源的培养基上，从功能上讲，该培养基属于________________。

(2)对初步提取到的菌株要进行____________，一般操作方法有两种，如图是____________法。

(3)若要测定培养液酵母菌的菌体数，可在显微镜下直接计数。若用____________________法统计菌落数，在涂布接种前，随机取若干灭菌后的空白平板进行培养一段时间，这样做的目的是__________________________。

(4)将1 mL酵母菌溶液稀释100倍，在3个平板上用涂布法分别接入0.1 mL稀释液经适当培养后，3个平板上的菌落数分别为56、57、58，据此可得出每升溶液中酵母菌活菌数为____________。

答案

(1)稀释(溶解)

多氯联苯

选择培养基

(2)纯化

平板划线

(3)稀释涂布平板(或涂布平板)

检验培养基平板灭菌是否成功

(倒平板是否感染杂菌或是否彻底灭菌)

(4)5.7×107个

解析

(1)筛选分解多氯联苯的菌株时，应将土壤样品稀释，接种到以多氯联苯为唯一碳源的培养基上；只有能分解多氯联苯的菌株才能在这样的培养基中生存，因此从功能上讲，该培养基属于选择培养基。(2)对初步提取到的菌株要进行分离纯化，一般操作方法有两种，即平板划线法和稀释涂布平板法，图示是利用平板划线法进行微生物接种，把聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。(3)若要测定培养液酵母菌的菌体数，可在显微镜下用血细胞计数板直接计数。若用稀释涂布平板法统计菌落数，在涂布接种前，随机取若干灭菌后的空白平板进行培养一段时间，这样做的目的是检测培养基平板灭菌是否合格。(4)由题意知，1 mL水样中的菌落数是(56＋57＋58)÷3÷0.1×100＝5.7×104个，每升水样中的活菌数为5.7×104×103＝5.7×107个。

6．(2017·西宁二模)如图是从土壤中筛选分解尿素细菌的过程，请回答下列问题：

(1)图中选择培养基应以____________为唯一氮源；鉴别培养基还需添加____________作指示剂，分解尿素细菌在该培养基上生长一段时间后，其菌落周围的指示剂将变成________色。

(2)土壤中的细菌将尿素分解为____________之后，才能被植物利用，土壤中的细菌之所以能将尿素分解，是因为细菌能合成____________。

(3)制备实验所需的培养基时，在各成分都溶化后和分装前，要进行的是____________

和灭菌，对培养基进行灭菌的常用方法是____________________。倒平板时要待平板冷凝后，将平板倒置，其主要原因是____________________________________________。

(4)在5个细菌培养基平板上，均接种稀释倍数为105的土壤样品溶液0.1 mL，培养一段时间后，平板上长出的细菌菌落数分别为191、16、326、173和182。该过程采取的接种方法是__________________，每克土壤样品中的细菌数量为________×108个；与血细胞计数板相比，此计数方法测得的细菌数目较________(填“多”或“少”)。

答案

(1)尿素

酚红

红

(2)氨

脲酶

(3)调整pH

高压蒸汽灭菌

防止培养皿盖上的冷凝水落入培养基造成污染

(4)稀释涂布平板法

1.82

少

解析

(1)能合成脲酶的细菌才能分解尿素。配制以尿素为唯一氮源的培养基，能够生长的细菌就是能分解尿素的细菌。分解尿素的细菌合成的脲酶将尿素分解成氨，氨会使培养基的碱性增强。在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂培养细菌，若指示剂变红，可确定该种细菌能够分解尿素。(2)分解尿素的细菌合成的脲酶将尿素分解成氨。(3)制备实验所需的培养基时，在各成分都溶化后和分装前，要进行的是调整pH和灭菌，培养基用高压蒸汽灭菌法进行灭菌。倒平板时防止培养皿盖上的冷凝水落入培养基造成污染，因此要待平板冷凝后，将平板倒置。(4)用于计数细菌菌落数的常用方法是稀释涂布平板法，统计的菌落数应介于30～300之间，故选择细菌菌落数为191、173和182的平板计数。每克该土壤样品中的菌落数对应的应该是每毫升菌液中的细菌数目，所以每克该土壤样品中的菌落数为191＋173＋1823×105＝1.82×108个。由于两个或多个细菌连接在一起时，往往统计的是一10100个菌落，所以用此计数方法测得的细菌数较少。

7．(2017·遵义期中)农作物秸秆在特定微生物产生的纤维素酶的催化下，秸秆中的纤维素可被分解为葡萄糖并进一步利用。图甲为纤维单胞菌(能产生纤维素酶)的获取过程，图乙为利用秸秆制备生物燃料的过程，请回答：

(1)图甲从土壤中分离获取纤维单胞菌的方法为________法。所利用的培养基中需要加入________作为唯一的碳源，目的是只允许能产生________的纤维单胞菌生长，而其他微生

物均不能生长。

(2)为防止杂菌污染，培养基需通过________法进行灭菌，接种环通过________法进行灭菌。

(3)图乙中微生物X是________，该过程需在________(填“有氧”或“无氧”)条件下才能产生乙醇。

(4)利用纤维素酶制取生物燃料的生态学意义为___________________________。

解析

(1)从土壤中分离获取某种特定微生物，可采用稀释涂布平板法或平板划线法，图甲中为平板划线法。培养液中以纤维素作为唯一碳源时，只有能利用该物质的微生物才能生长繁殖，因此该培养基起到选择培养目的菌的作用。(2)对培养基的灭菌利用的是高压蒸汽灭菌法，对接种环采用火焰灼烧法进行灭菌。(3)根据图乙中的结果，可推测微生物X是酵母菌，它在无氧条件下可以产生乙醇。(4)利用纤维素酶制取生物燃料可以变废为宝，提高了能量利用率，减轻环境污染。

答案

(1)平板划线

纤维素

纤维素酶

(2)高压蒸汽灭菌

灼烧

(3)酵母菌

无氧

(4)提高能量利用率，减轻环境污染

8．(2017·江西九校联考)相关资料表明，有机化工原料氯苯不易降解，会污染环境，某科研机构欲从土壤中分离高效降解氯苯的微生物，并对其相关耐药性进行探究，回答下列问题：

(1)为了获得能降解氯苯的微生物，可在被氯苯污染的土壤中取样，并应选用以________为唯一碳源的培养液进行选择培养。制备培养基时常用的灭菌方法是________。

(2)将获得的3种待选微生物甲、乙、丙分别接种在1 L含20 mg氯苯的相同培养液中培养(其他营养物质充裕、条件适宜)，观测从实验开始到微生物停止生长所用的时间，甲、乙、丙分别为48小时、24小时、72小时，则应选择微生物________作为菌种进行后续培养。

(3)若要测定培养液中选定菌种的菌体数，既可以在显微镜下用________直接计数，也可选用________法统计活菌数目，一般前者得到的结果________(填“>”“<”或“＝”)后者。

(4)科研人员利用上述筛选的微生物进行了其对青霉素、四环素耐药性的相关实验，实验步骤如下：

步骤1：分别取________________________加入三组无菌培养皿中，再加入经灭菌并冷却到50 ℃左右的培养基，立即混匀，静置凝固成平板。

步骤2：向三组培养基中分别接种待检测的菌种。

步骤3：将接种后的三组培养基和一个________都置于适宜温度等条件下培养若干天，观察比较培养基中菌落生长情况。

答案

(1)氯苯

高压蒸汽灭菌法

(2)乙

(3)血球计数板或血细胞计数板

稀释涂布平板

> (4)步骤1：等量的青霉素、四环素和无菌水

步骤3：未接种的培养基(或空白培养基) 9．(2017·银川二模)如图为微生物的实验室培养和纯化醋酸菌的部分操作步骤，请回答下列问题：

(1)①是制备培养基时________的操作，该操作需待培养基冷却至________左右时，在________附近进行。

(2)该实验中纯化醋酸菌的接种方法是________，在完成步骤④的操作中，为什么在每次划线之前都要灼烧接种环？_________________ (3)纯化的醋酸菌菌种将频繁用于果醋生产，则可以采用临时保藏的方法保存菌种，但这种方法保存的时间不长，原因是________________________。对于需要长期保存的菌种可采用________的方法。

(4)将醋酸菌加入果汁中，醋酸菌将果汁中的糖分解成醋酸；当缺少糖原时，醋酸菌将乙醇变成________，再变为醋酸。

答案

(1)倒平板

50 ℃

酒精灯火焰

(2)平板划线法

使得每一次划线时接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端(为了杀死上次划线结束后接种环上残留的菌种)

(3)菌种容易被污染或产生变异

甘油管藏

(4)乙醛

10．(2017·河北石家庄检测)为了分离和纯化高效分解石油的细菌，科研人员利用被石油污染过的土壤进行如图A所示的实验。

(1)步骤③与步骤②中培养基成分相比，最大的区别是________。

(2)同学甲进行步骤④的操作，其中一个平板经培养后的菌落分布如图B所示，该同学的接种方法是________，出现图B结果可能的操作失误是________。

(3)同学乙也按照同学甲的接种方法进行了步骤④的操作：将1 mL样品稀释100倍，在

3个平板上分别接入0.1 mL稀释液；经适当培养后，3个平板上的菌落数分别为56、58和57。据此可得出每升样品中的活菌数为________个。

(4)步骤⑤需要振荡培养，原因是_______________________________。

(5)步骤⑤后取样测定石油含量的目的是_______________________________________。

解析

(1)步骤③与步骤②中培养基成分相比，最大的区别是石油是唯一碳源。

(2)同学甲进行步骤④的操作，其中一个平板经培养后的菌落分布如图B所示。该同学的接种方法是稀释涂布平板法，出现图B结果可能的操作失误是涂布不均匀。

(3)同学乙也按照同学甲的接种方法进行了步骤④的操作：将1 mL样品稀释100倍，在3个平板上分别接入0.1 mL稀释液；经适当培养后，3个平板上的菌落数分别为56、58和57。据此可得出每升样品中的活菌数为(56＋58＋57)÷3÷0.1 × 1 000×100＝5.7× 107个。

(4)步骤⑤需要振荡培养，原因是提高培养液中(溶解)氧的含量，通过振荡可使菌体与培养液充分接触，提高营养物质的利用率。

(5)步骤⑤后取样测定石油含量的目的是筛选出分解石油能力最强的细菌。

答案

(1)石油是唯一碳源

(2)稀释涂布平板法

涂布不均匀

(3)5.7×107

(4)提高培养液中(溶解)氧的含量，通过振荡可使菌体与培养液充分接触，提高营养物质的利用率

(5)筛选出分解石油能力最强的细菌

11．(2017·吉林大学附中模拟)目前，市场上常有未经消毒的生牛奶出售。为了检测生牛奶中细菌的含量变化，生物兴趣小组进行了下图所示操作。用无菌吸管从锥形瓶中吸取1 mL生牛奶稀释液至盛有9 mL无菌水的试管中，混合均匀，如此再重复2次。请回答下列有关问题：

(1)超市所售鲜奶常采用巴氏消毒法消毒，使用这种方法对生鲜牛奶进行消毒的好处是________________；而从市场上所购买的生牛奶，人们一般是买回家后采用________的方法进行消毒。

(2)为了对牛奶中细菌进行计数，常采用________法。使用该方法时，可取最终的牛奶稀释液0.1 mL滴在培养基上，然后选择下列工具中的________继续进行实验操作。

(3)若用上述方法培养设置3个培养皿，菌落数分别为35个、33个、34个，则可以推测生牛奶中每毫升含细菌数为________个。运用这种方法统计的结果往往较实际值________(填“偏大”或“偏小”)，原因是________________________________。

(4)消毒后的牛奶中绝大部分细菌被杀死，若继续用该方法检测消毒后的牛奶中细菌的数量，则在操作步骤上应做什么改动？_____________________。

答案

(1)牛奶的营养成分不被破坏

煮沸

(2)稀释涂布平板

B

(3)3.4×106

偏小

个别菌落可能是由2个或多个细菌形成

(4)稀释次数减少

12．(2017·四川乐山二调)请回答关于“分解纤维素的微生物的分离”的实验的一些问题：

(1)采集土样时，应选择________的环境，因为纤维素分解菌大多分布在这些环境的土壤中。

(2)为确保能够从样品中分离得到目的菌，可通过选择培养增加纤维素分解菌的浓度。选择培养基应以________作为唯一的碳源。为什么选择培养能够“浓缩”目的菌？

_________________________________________________________________。

(3)分离得到分解纤维素的微生物，常用的方法是________，判断是否是目的菌菌落的依据是________________________________________________________，

设置空白对照的目的是______________________________________________。

答案

(1)富含纤维素(或纤维素丰富)

(2)纤维素

因为目的菌能够以纤维素为碳源，大量繁殖，而其他细菌则不能以纤维素为碳源，无法正常生活

(3)刚果红染色法

菌落周围是否出现透明圈

判断培养基制作是否合格(或判断培养基是否有杂菌污染)