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土壤中分解尿素的细菌的分离与计数一、课前复习提问1.培养基?2.消毒和灭菌?3.牛肉膏蛋白胨固体培养基的制备方法? 4.倒平板步骤?5.微生物接种最常用的方法及其步骤?6.选择培养基和鉴别培养基?二、三、新课1.筛选菌株(1)自然界中目的菌株筛选的依据是根据它对的要求,到相应的环境中去寻找。(2)实

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课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数国家优质课一等奖

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关键词:课题2 土壤中分�…国家优质课一等奖

正文

土壤中分解尿素的细菌的分离与计数

一、课前复习提问

1.培养基?

2.消毒和灭菌?

3.牛肉膏蛋白胨固体培养基的制备方法? 4.倒平板步骤?

5.微生物接种最常用的方法及其步骤?

6.选择培养基和鉴别培养基?

二、

三、新课

1.筛选菌株

(1)自然界中目的菌株筛选的依据是根据它对

的要求,到相应的环境中去寻找。

(2)实验室中微生物筛选的原理:人为提供有利于

生长的条件(包括营养、温度、pH等),同时

或

其他微生物生长。

(3)选择培养基:在微生物学中,将允许

种类的微生物生长,同时

和

其他种类微生物生长的培养基,称作选择培养基。

2.统计菌落数目

(1)常用方法:

法。

(2)统计依据:当样品的

足够高时,培养基表面生长的一个菌落,来源于样品稀释液中的一个

。通过统计平板上的菌落数,就能推测出样品大约含有多少活菌。

板(3)平板选择菌落计数时一般选菌落数在

的平,计数公式为

。

统计菌落数目的方法

(1)显微镜直接计数法

①原理:利用特定细菌计数板或血细胞计数板,在显微镜下计算一定容积的样品中微生物数量。

②方法:用计数板计数。

③缺点:不能区分死菌与活菌。

(2)间接计数法(活菌计数法

①原理:当样品的稀释度足够高时,培养基表面生长的一个菌落,来源于样品稀释液中的一个活菌,通过统计平板上的菌落数,就能推测出样品中大约含有多少活菌。

②操作

a.设置重复组:同一稀释度下,至少涂布3个平板作为重复组,才能增强实验的说服力与准确性。分析结果时,需考虑重复组的结果是否一致,结果明显不一致,意味着操作有误,需要重新实验。

b.为了保证结果准确,一般选择菌落数在30~300的平板进行计数。

③计算公式:每克样品中的菌株数=C/V×M,其中C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数,V代表涂布平板时所用的稀释液的体积/mL,M代表稀释倍数。

3.设置对照

(1)对照实验:是指除了

以外,其他条件都相同的实验。

(2)主要目的:排除实验组中

对实验结果的影响,提高实验的可信度。例如为了确认培养基是否被杂菌污染,需以

培养基培养作为空白对照。

4.设置对照结果分析与评价

内容

现象

结论

对照的培养皿中无菌落生长

有无杂菌污

染的判断

培养物中菌落数偏高

未被杂菌污染

被杂菌污染

菌落形态多样,菌落培养物中混入其他杂数偏高

选择培养基

的筛选作用

样品的稀释

操作

重复组的结果

牛肉膏培养基上的菌落数目大于选择培养基上的数目

得到三个或三个以上菌落数目在30~300的平板

选择培养基具有筛选操作成功

若选取同一种土样,统计结果应接近

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