课题2　土壤中分解尿素的细菌的分离与计数课时教学实录

三元整合导学模式生物学科导学稿（教师版）

编写人：谢荣坚

审稿人：高二备课组

编写时间：2018-3-7

一、课题：土壤中分解尿素的细菌的分离与计数

二、学习目标：

1．研究培养基对微生物的选择作用，进行微生物数量的测定。

2．能利用选择培养基分离细菌，运用相关技术解决生产生活中有关微生物的计数。

三、课时安排：1课时

四、学习过程

自主学习（通过阅读课本，独立完成）

土壤中分解尿素的细菌的分离与计数

1、尿素[CO(NH2)2]——重要的农业氮肥。只能被土壤中细菌分解为NH3才能被植物吸收利用。

细菌脲酶2、 CO(NH2)2 + H2O 一、研究思路 （一）筛选菌株

CO

+2NH

231、实验室中微生物的筛选原理

人为提供有利于

目的菌株 生长的条件(包括营养、温度、pH等)，同时抑制或阻止

其他微生物 生长。

2、筛选菌株的培养基

思考：

KH2PO4 1.4g NaHPO4 2.1g MgSO4 H2O 0.2g 葡萄糖 10.0g 尿素 1.0g (1)、该培养基的配方中，为微生物的生长提供碳源和氮源的分别是什么物质？ 碳源：葡萄糖、尿素 氮源： 尿素 (2)、此配方能否筛选出产生脲酶的细菌？为什么？

能。只有产生脲酶的细菌才能利用尿素

作为氮源琼脂 15.0g 而生存。

将上述物质溶解后，用蒸馏水定容到1000mL。

3、选择培养基

：允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基。

（二）、统计菌落数目：

1、活体计数法----稀释涂布平板法

（2）原理：1个菌落→1个活菌。

（3）统计原则

①、选 30∼300 个菌落的平板统计。

思考：

1、1个菌落

等于 1个活菌。

2、统计的菌落数 小于

实际活的细菌数。

验，一般至少要涂布3个平板。

4、重复实验结果中小于30菌落的不

（1）操作方法：稀释涂布平板

→

统计菌落数。

3、用稀释涂布平板法一定要重复实用。

②、每个稀释度取3个平板取其平均值。

1

（4）统计结果：统计的菌落数往往比活菌的实际数目 低 ，因此统计结果一般用

菌落数 表示。

每克样品中的菌株数= （C/V）*M 。

C:某一稀释度下平板上生长的平均菌落数； V:所用稀释液的体积； M:稀释倍数。

2、显微镜直接计数

（三）设置对照

1、设置对照的目的：排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度。

2、对照实验是指除了

被测试

的条件外，其他条件都

相同

的实验。满足该条件的称为

对照组，未满足该条件的称为

实验

组。

实验组：

配制土壤溶液

四、实验设计

（一）土壤取样

土壤是天然培养基 ---- 其微生物数量 最大

、种类

最多

。

（二）样品稀释

原则：确保平板上的菌落数在 30-300 之间。 （三）微生物的培养与观察 （四）鉴定 酚红 鉴别培养基：鉴定分解尿素的细菌。

五、实验的具体操作 （一）、无菌 操作

（二）、做好标记

1、实验时要对培养皿作好标记。注明培养基类型、培养时间、稀释度、培养物等。

2、装系列稀释菌的试管在试管架上最好由低到高放置。

六、结果分析与评价

1.通过对照实验，若培养物有杂菌污染，菌落数偏高；若培养物混入其他氮源，则菌落形态多样，菌落数偏高，难以选择出分解尿素的微生物。

2.提示：选择每个平板上长有30——300个菌落的稀释倍计算每克样品的菌数最合适。同一稀释倍数的三个重复的菌落数不能相差悬殊，如相差较大，表示实验不精确。

五、课后练习

1：土壤中的细菌能分解尿素，是因为它们能合成一种( B ) A．尿素酶 B．脲酶 C．蛋白酶 D．肽酶

2：在培养基中加入尿素(惟一氮源)，以分离出能分解尿素的细菌，这种加入尿素的2

系列稀释

涂布平板与培养

菌落计数

对照组：设置对照 ---- 同等条件下，培养空白培养基。

培养基在功能上属于( A ) A．选择培养基 B．固体培养基 C．液体培养基 D．半固体培养基 3：测定土壤中细菌数量一般选用10、10和10倍的稀释液进行平板培养，而测定真菌的数量一般选用10、10和10倍稀释，其原因是( C ) A．细菌个体小，真菌个体大 B．细菌易稀释，真菌不易稀释

C．细菌在土壤中数量比真菌多 D．随机的，没有原因

4：通常用来作为菌种鉴定的重要依据是( A ) A．菌落 B．细菌形态 C．细菌体积 D．细菌结构

5：下列能选择出分解尿素的细菌的培养基是( A ) A．KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4·7H2O、葡萄糖、尿素、琼脂、水

B．KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4·7H2O、葡萄糖、琼脂、水

C．KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4·7H2O、尿素、琼脂、水

D．KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4·7H2O、牛肉膏、蛋白胨、琼脂、水

6：在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂，培养能分解尿素的细菌后，指示剂的颜色是( B ) A．蓝色 B．红色 C．黑色 D．棕色

7：下列是关于检测土壤中细菌总数实验操作的叙述，其中错误的是( D ) A．用蒸馏水配制牛肉膏蛋白胨培养基，经高温、高压灭菌后倒平板

B．取10、10、10倍的土壤稀释液和无菌水各0.1 mL，分别涂布于各组平板上

C．将实验组和对照组平板倒置，37 ℃恒温培养24～48小时

D．确定对照组无菌后，选择菌落数在300以上的实验组平板进行计数

8：可以鉴定出分解尿素的细菌的方法是( B ) A．以尿素为惟一氮源的培养基中加入二苯胺试剂 B．以尿素为惟一氮源的培养基中加入酚红指示剂

C．以尿素为惟一氮源的培养基中加入苏丹Ⅲ试剂 D．以尿素为惟一氮源的培养基中加入双缩脲试剂

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