课题2　土壤中分解尿素的细菌的分离与计数公开课教案

土壤中分解尿素的细菌的分离与计数

一、学习目标：

研究培养基对微生

物的选择作用，进行微生物数量的测定。

二、学习重点、难点：

重点：对土样的选取和选择培养基的配制。

难点：对分解尿素的细菌的计数。

三、学法指导：小组交流合作 一对一检查通关

四、自主学习

1．尿素只有被

分解成

之后，才能被植物吸收利用。

2．以土壤中能分解尿素的细菌为研究对象，要达到的两个主要目的是：

⑴

；⑵

。

3．PCR（ ）是一种在体外

将

。此项技术的自动化，要求使用耐高温的DNA聚合酶。

思考：怎样找耐高温的酶呢？

4．实验室中微生物的筛选应用的原理是：人为提供有利于

生长的条件（包括

等），同时抑

制或阻止其他微生物生长。

5．选择培养基是指

。

6．常用来统计样品中活菌数目的方法是

。即当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的

。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。为了保证结果准确，一般选择菌落数在

的平板进行计数。另外，

也是测定微生物数量的常用方法。

7．

比较教材中两位同学的操作方法，哪位同学的结果接近真实值？你认为这两位同学的实验需要改进呢？如需要，如何改进？

8．一般来说，统计的菌落数往往比活菌的实际数目

。这是因为

。因此，统计结果一般用

而不是活菌数来表示。

9．设置对照实验的主要目的是

，提高实验结果的可信度。

10．对照实验是

。

1 1．实验设计包括的内容有：

、

、

和

，具体的实验步骤以及时间安排等的综合考虑和安排。

12．不同种类的微生物，往往需要不同的培养

和培养

。在实验过程中，一般每隔24小时统计一次菌落数目，选取菌落数目稳定时的记录作为结果，这样可以

13．无菌操作应注意什么问题？

⑴

⑵

⑶

巩固练习：

1、图甲是从土壤中筛选产脲酶细菌的过程，图乙是脲酶基因转录的mRNA部分序列。

(1)图中选择培养基应以________为唯一氮源；鉴别培养基还需添加________作指示剂，产脲酶细菌在该培养基上生长一段时间后，其菌落周围的指示剂将变成________色。

(2)在5个细菌培养基平板上，均接种稀释倍数为105的土壤样品溶液0.1 mL，培养一段时间后，平板上长出的细菌菌落数分别为13、156、462、178和191。

该过程采取的接种方法是__________________，每克土壤样品中的细菌数量为________×108个；与血细胞计数板计数法相比，此计数方法测得的细菌数较________。

2、尿素是一种重要的农业氮肥，不能直接被农作物吸收，只有当土壤中的微生物将尿素分解后才能被植物吸收利用。因此，对土壤中分解尿素的微生物进行分离和鉴定具有重要意义。回答下列问题：

(1)对土壤中分解尿素的微生物的分离过程如下：

第一步：土壤取样。取土样用的工具和盛土样的信封等在使用前都需要__________(填“消毒”或“灭菌”)。

第二步：样品稀释。通常分离不同种类的微生物要采用不同的稀释度，原因是________________________________________________________________________。

第三步：微生物的培养与观察。将一定稀释度的样品接种在以尿素为唯一氮源的培养基上，并在适宜的条件下培养。分解尿素的微生物能在该培养基上生长繁殖，而______________________则不能生长繁殖。

(2)若对土壤悬液进行梯度稀释时，未经振荡而直接取上层悬液进行梯度稀释，用稀释倍数为104的样液涂布到平板上进行培养和计数，统计出的菌落数往往比正确操作统计出的菌落数________。

成分

培养基

(含量) KH2PO4

Na2HPO4

MgSO4·

7H2O 0.2 g 酚红

指示剂

0.01 g 尿素

蒸馏水

1.4 g 2.1 g 1.0 g 1 000 mL (3)若要对上述初步筛选出的分解尿素的微生物作进一步的鉴定，需在如表所示培养基配方中添加的物质是________、________。若分离得到的是尿素分解菌，则培养基中pH升高使酚红指示剂变为红色，pH升高的原因是____________________________________

。