课题2　土壤中分解尿素的细菌的分离与计数教案3

土壤中分解尿素的细菌的分离与计数

桑植县贺龙中学

金传利

一、研究思路

1、筛选菌株

(1)实验室中微生物筛选的原理：人为提供有利于 生长的条件(包括营养、温度、pH等)，同时 或 其他微生物生长。 (2)选择培养基：在微生物学中，将允许 种类的微生物生长，同时 或 其他种类微生物生长的培养基，称作选择培养基。

（3）尿素可以为农作物提供 肥，但是只有被 分解成 之后，才能被植物吸收利用。

（4）以土壤中能分解尿素的细菌为研究对象，要达到的两个主要目的是：

① ；② 。

（5）PCR（ ）是一种在体外将 。此项技术的自动化，但是在合成的过程中需要在93℃的条件下，所以要求使用耐高温的 2、统计菌落数目

（1）测定微生物数量的常用方法有 和 。

（2）稀释涂布平板法统计样品中活菌的数目的原理

当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活细菌。为了保证结果准确，一般设置 个平板，选择菌落数在 的平板进行计数，并取 。统计的菌落数往往比活菌的实际数目低，因此，统计结果一般用菌落数而不是活菌数来表示。

3、设置对照

设置对照的主要目的是排除实验组中 对实验结果的影响，提高实验结果的 。

二、实验设计

实验设计包括 ，所需 、 、用具和药品，具体的 以及时间安排等的综合考虑和安排。关于土壤中某细菌的分离与计数实验操作步骤如下：

1． 取样：从肥沃、湿润的土壤中取样。应先 3 cm左右，再取样，将样品装入事先准备好的 中。

2．制备 ：准备牛肉膏蛋白胨培养基和选择培养基

3．样品的 和微生物的 与观察

4．细菌的计数

当菌落数目稳定时，选取菌落数在 的平板进行计数。在同一稀释度下，至少对3个平板进行重复计数，然后求出 ，并根据平板所对应的稀释度计算出样品中细菌的数目。

三、结果分析与评价

1、对分离的菌种作进一步的鉴定，还需要借助 的方法。

2、在细菌分解尿素的化学反应中，细菌合成的 将尿素分解成了 。氨会1

使培养基的碱性 ，PH 。因此，我们可以通过检测培养基 变化来判断该化学反应是否发生。

3、在以 为唯一氮源的培养基中加入 指示剂。培养某种细菌后，如果PH升高，指示剂将变 ，说明该细菌能够 。

巩固练习

1．PCR技术要求使用耐高温的DNA聚合酶，这种酶要能忍受93℃左右的高温。如果请你来寻找这种耐高温的酶，你会去哪里寻找………………………………………( )

A．土壤中 B．海水中 C．热泉中 D．冷库中

2．下列能选择出分解尿素的细菌的培养基是………………………………………( )

A．KH2PO4、Na2HP04、MgS04·7H20、葡萄糖、尿素、琼脂、水

B．KH2PO4、Na2HP04、MgS04·7H20、葡萄糖、琼脂、水

C．KH2PO4、Na2HP04、MgS04·7H20、尿素、琼脂、水

D．KH2PO4、Na2HP04、MgS04·7H20、牛肉膏、蛋白胨、琼脂、水

63．某同学在稀释倍数为10的培养基中测得平板上菌落数的平均值为234，那么每克样品中的菌落数是(涂布平板时所用稀释液的体积为0.1mL)…………………………( )

89 A．2.34×10 B．2.34×10 C．234 D．23.4 64．在做分离分解尿素的细菌实验时，A同学从对应10培养基上筛选出大约150个菌落，而其他同学只选择出大约50个菌落。A同学的结果产生原因可能有…………………( ) ①由于土样不同 ②由于培养基污染 ③由于操作失误 ④没有设置对照

A．①②③ B．②③④ C．①③④ D．①②④

5．关于土壤取样的叙述错误的是………( )

A．土壤取样，应选取肥沃、湿润的土壤 B．先铲去表层土3cm左右，再取样

C．取样用的小铁铲和信封在使用前不用灭菌 D．应在火焰旁称取土壤

6.下列关于从土壤中分离细菌的操作步骤中，正确的是…………( )

①土壤取样 ②称取10g土壤取出加入盛有90mL无菌水的锥形瓶中 ③吸取0.1mL进行平1234567板涂布

④依次稀释至10、10、10、10、10、10、10稀释度

A．①→②→③→④ B．①→③→②→④ C．①→②→④→③ D．①→④→②→③

7.下列关于测定土壤中细菌数量的叙述，正确的是……………( )

37 A．一般选用10～10倍的稀液分别涂布

3 45 B．测定放线菌的数量，一般选用10、lO和10倍稀释

345 C．测定真菌的数量，一般选用10、10和10倍稀释

17 D．当第一次测量某种细菌的数量，可以将10～10倍的稀释液分别涂布到平板上培养

8.下列关于微生物的培养叙述错误的是( ) A．细菌一般在30～37℃的温度下培养1～2 d B．放线菌一般在25～28℃的温度下培养5～7 d C．霉菌一般在25～28℃的温度下培养3～4 d D．不同种类的微生物，一般需要相同的培养温度和培养时间

9.下列操作需要在火焰旁进行的一组是( ) 2

①土壤取样

②称取土壤 ③稀释土壤溶液 ④涂布平板

⑤微生物的培养

A．①②③④⑤ B．②③④⑤④⑤ C．③④⑤ D．②③④

10.土壤取样时最好选择哪种环境中的土壤做分离细菌的实验…( )

A．街道旁 B．花盆中 C．农田中 D．菜园里

11、土壤中的细菌能分解尿素，是因为它们能合成一种(

) A．尿素酶 B．脲酶 C．蛋白酶 D．肽酶

12、在培养基中加入尿素(惟一氮源)，以分离出能分解尿素的细菌，这种加入尿素的培养基在功能上属于(

) A．选择培养基

B．固体培养基 C．液体培养基 D．半固体培养基 45613、测定土壤中细菌数量一般选用10、10和10倍的稀释液进行平板培养，而测定真菌的数234量一般选用10、10和10倍稀释，其原因是(

) A．细菌个体小，真菌个体大 B．细菌易稀释，真菌不易稀释

C．细菌在土壤中数量比真菌多 D．随机的，没有原因

14、用来判断选择培养基是否起到了选择作用需要设置的对照是(

) A．未接种的选择培养基 B．未接种的牛肉膏蛋白胨培养基

C．接种了的牛肉膏蛋白胨培养基 D．接种了的选择培养基

15、通常用来作为菌种鉴定的重要依据是(

) A．菌落 B．细菌形态 C．细菌体积 D．细菌结构

16、在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂，培养能分解尿素的细菌后，指示剂的颜色是(

) A．蓝色 B．红色 C．黑色 D．棕色

17、在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时又能抑制或者阻止其他种类微生物生长的培养基称做(

) A．鉴别培养基 B．加富培养基 C．选择培养基 D．基础培养基

18、在寻找目的菌株时，要根据它对生存环境的要求，到相应的环境中去寻找，下列不属于厌．氧细菌生存环境的是(

) A．土壤深层 B．人或动物体内寄生 C．真空 D．池塘淤泥

19、下列是关于检测土壤中细菌总数实验操作的叙述，其中错误的是(

) A．用蒸馏水配制牛肉膏蛋白胨培养基，经高温、高压灭菌后倒平板

456B．取10、10、10倍的土壤稀释液和无菌水各0.1 mL，分别涂布于各组平板上

C．将实验组和对照组平板倒置，37 ℃恒温培养24～48小时

D．确定对照组无菌后，选择菌落数在300以上的实验组平板进行计数

20、可以鉴定出分解尿素的细菌的方法是(

) A．以尿素为惟一氮源的培养基中加入二苯胺试剂 B．以尿素为惟一氮源的培养基中加入酚红指示剂

C．以尿素为惟一氮源的培养基中加入苏丹Ⅲ试剂 D．以尿素为惟一氮源的培养基中加入双缩脲试剂

21、在做土壤中分解尿素的细菌的分离与计数实验时，甲组实验用氮源只含尿素的培养基，乙组实验用氮源除尿素外还含硝酸盐的培养基，其他成分都相同，在相同条件下操作，培养与观察，则乙组实验属于(

) A．空白对照 B．标准对照 C．相互对照 D．条件对照

22．可用于菌落数目统计的培养基是（ ）

A．

固体培养基 B．液体培养基 C．半固体培养基 D．天然培养基

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23．产生标准菌落的细菌的最初数目和培养基分别是（ ）

A．一个细菌 液体培养基 B．许多细菌 液体培养基 C．一个细菌 固体培养基 D．许多细菌 固体培养基

24. 培养基中浓度过高抑制微生物生长的原因是（ ）

A．含热量太多 B．会使微生物失水 C．导致微生物休眠 D．培养基中的碳源和氮源比例失衡

25．不同种类的细菌菌落表现为不同的特征，下列属于菌落特征的是（

）

（1）菌落大小（2）菌落形状

（3）菌落的隆起程度

（4）菌落的颜色

（5）菌落的透明度

A．（1）（2）（3） B．（2）（3）（4） C．（1）（3）（4） D．（1）（2）（3）（4）（5）

26．某同学在10、100、1000倍稀释液的平均菌落数为2760、295、46，则菌落总数为( ) A．27600 B．29500 C．46000 D．37750 27．将某种细菌接种到彻底灭菌的固体培养基上，经过一段时间后能得到（ ）

A．无一定形态的群体 B．菌丝 C．单个细菌 D．菌落

28．某同学在做微生物实验时，不小心把圆褐固氮菌和酵母菌混在一起。该同学设计下面的实验，分离得到纯度较高的圆褐固氮菌和酵母菌。

(1)实验原理：圆褐固氮菌是自生固氮菌，能在无氮培养条件下生长繁殖而酵母菌则不能；青霉素不影响酵母菌等真菌的生长繁殖，而会抑制圆褐固氮菌的生长繁殖。

(2)材料用具：(略) (3)实验步骤：

①制备两种培养基，将两种培养基各自分成两份，依次标号A、a和B、b。

② ，并在25 ℃条件下培养 天。

③分别从A、B培养基的菌落中挑取生长良好的菌并分别接种到a、b培养基中，适宜条件下培养3～4天。

(4)请问答：

①本实验中，配制的分离用的培养基成分特点：A、a是 培养基，B、b是 培养基，根据上述原理配制的培养基属于__________培养基。

②根据所需目的配制上述培养基时除营养要协调外还应注意 。

③实验步骤中第③步的目的是 。

④圆褐固氮菌与酵母菌在结构上的主要差异为 。

⑤青霉素抑制圆褐固氮菌等细菌的生长繁殖，其作用机理是破坏或抑制其细胞壁的形成。请据此推测不影响酵母菌等真菌生长繁殖的原因是 。

29.有些细菌可分解原油，从而消除由原油泄漏造成的土壤污染。某同学欲从受原油污染的土壤中筛选出高效降解原油的菌株。回答问题：

（1）在筛选过程中，应将土壤样品稀释液接种于以 为唯一碳源的固体培养基上，从功能上讲，该培养基属于 培养基。

（2）纯化菌种时，为了得到单菌落，常采用的接种方法有两种，即 和 。

（3）为了筛选出高效菌株，可比较单菌落周围分解圈的大小，分解圈大说明该菌株的降解能力 。

（4）通常情况下，在微生物培养过程中实验室常用的灭菌方法有灼烧灭菌、 和 4

。无菌技术要求实验操作应在酒精灯 附近进行，以避免周围环境中微生物的污染。

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