资料摘要
血红蛋白的提取和分离一、课题的目标:通过尝试对血液中血红蛋白的提取和分离,理解色谱法、电泳法二、课题重点:凝胶色谱法的原理和方法三、课题难点:样品的预处理、色谱柱填料的处理和色谱柱的装填思考:“DNA的粗提取与鉴定”实验理想的材料是什么?“血红蛋白的提取和分离”这实验理想的材料又是什么?原因是?一、
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课题3 血红蛋白的提取和分离主要内容及教案内容
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关键词:课题3 血红蛋白�…主要内容及教案内容
正文
血红蛋白的提取和分离
一、课题的目标:通过尝试对血液中血红蛋白的
提取和分离,理解色谱法、电泳法
二、课题重点:凝胶色谱法的原理和方法
三、课题难点:样品的预处理、色谱柱填料的处理
和色谱柱的装填
思考:
“DNA的粗提取与鉴定”
实验理想的材料是什么?
“血红蛋白的提取和分离”这实验理想的材料又是什么?原因是?
一、基础知识:
蛋白质提取与分离的依据--
1.凝胶色谱法
(1)凝胶
(2)概念:
(3)、原理:
(4)、具体过程
2,缓冲溶液--洗脱剂
(1)作用:
(2)配制:
(3)在血红蛋白的提取和分离实验中用的缓冲液的作用?
3,电泳
(1).概念:
(2)原理:
(3)影响蛋白质分子运动速度的因素
(4)类型:
聚丙烯酰胺凝胶电泳
1.原理:
2. SDS作用机理:
3,用SDS —聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质分子量的方法
二,难点突破:实验操作
样品处理→粗分离→纯化→纯度鉴定
(一)样品的处理——通过洗涤红细胞、血红蛋白的释放、离心等操作收集到血红蛋白溶液
血液组成成分
1.洗
涤
红
细
胞
思考:洗涤的目的是什么?
洗涤的方法是什么?红细胞的洗涤为什么要低速短时间离心?
洗涤干净的标志是什么?
2.释放血红蛋白
思考:
释放血红蛋白过程中,在洗涤好的红细胞加入了哪些物质,有什么用?
目的分析:
1.
蒸馏水的作用是______________________________。
2.
加入甲苯的作用是____________________________。
充分搅拌的目的是____________________________ 3.分离血红蛋白
离心后的四层溶液分别含有什么物质?如何获得血红蛋白溶液?
(二).样品的粗分离——经过透析去除分子量较小的杂质
透析的目的是什么?
(三).样品的纯化——通过凝胶色谱法将相对分子质量较大的杂质蛋白除去
1.凝胶色谱柱的制作:
2.凝胶色谱柱的装填
3.样品的加入和洗脱
(四).纯度鉴定——SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳。
归纳总结:
1.血液的组成成分是什么?血红蛋白的结构和功能?
2.红细胞的洗涤为什么要低速短时间离心?洗涤目的是?
3.甲苯和蒸馏水在血红蛋白的释放中有什么作用?
4.离心后的四层溶液分别含有什么物质?如何获得血红蛋白溶液?
5.透析的原理和目的是什么?
6.为什么凝胶柱中不能有气泡存在?如何判断色谱柱制作成功?
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