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血红蛋白的提取和分离一、课题的目标:通过尝试对血液中血红蛋白的提取和分离,理解色谱法、电泳法二、课题重点:凝胶色谱法的原理和方法三、课题难点:样品的预处理、色谱柱填料的处理和色谱柱的装填思考:“DNA的粗提取与鉴定”实验理想的材料是什么?“血红蛋白的提取和分离”这实验理想的材料又是什么?原因是?一、

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课题3 血红蛋白的提取和分离主要内容及教案内容

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课题3 血红蛋白的提取和分离主要内容及教案内容

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关键词:课题3 血红蛋白�…主要内容及教案内容

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血红蛋白的提取和分离

一、课题的目标:通过尝试对血液中血红蛋白的

提取和分离,理解色谱法、电泳法

二、课题重点:凝胶色谱法的原理和方法

三、课题难点:样品的预处理、色谱柱填料的处理

和色谱柱的装填

思考:

“DNA的粗提取与鉴定”

实验理想的材料是什么?

“血红蛋白的提取和分离”这实验理想的材料又是什么?原因是?

一、基础知识:

蛋白质提取与分离的依据--

1.凝胶色谱法

(1)凝胶

(2)概念:

(3)、原理:

(4)、具体过程

2,缓冲溶液--洗脱剂

(1)作用:

(2)配制:

(3)在血红蛋白的提取和分离实验中用的缓冲液的作用?

3,电泳

(1).概念:

(2)原理:

(3)影响蛋白质分子运动速度的因素

(4)类型:

聚丙烯酰胺凝胶电泳

1.原理:

2. SDS作用机理:

3,用SDS —聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质分子量的方法

二,难点突破:实验操作

样品处理→粗分离→纯化→纯度鉴定

(一)样品的处理——通过洗涤红细胞、血红蛋白的释放、离心等操作收集到血红蛋白溶液

血液组成成分

1.洗

涤

红

细

胞

思考:洗涤的目的是什么?

洗涤的方法是什么?红细胞的洗涤为什么要低速短时间离心?

洗涤干净的标志是什么?

2.释放血红蛋白

思考:

释放血红蛋白过程中,在洗涤好的红细胞加入了哪些物质,有什么用?

目的分析:

1.

蒸馏水的作用是______________________________。

2.

加入甲苯的作用是____________________________。

充分搅拌的目的是____________________________ 3.分离血红蛋白

离心后的四层溶液分别含有什么物质?如何获得血红蛋白溶液?

(二).样品的粗分离——经过透析去除分子量较小的杂质

透析的目的是什么?

(三).样品的纯化——通过凝胶色谱法将相对分子质量较大的杂质蛋白除去

1.凝胶色谱柱的制作:

2.凝胶色谱柱的装填

3.样品的加入和洗脱

(四).纯度鉴定——SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳。

归纳总结:

1.血液的组成成分是什么?血红蛋白的结构和功能?

2.红细胞的洗涤为什么要低速短时间离心?洗涤目的是?

3.甲苯和蒸馏水在血红蛋白的释放中有什么作用?

4.离心后的四层溶液分别含有什么物质?如何获得血红蛋白溶液?

5.透析的原理和目的是什么?

6.为什么凝胶柱中不能有气泡存在?如何判断色谱柱制作成功?

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