课题2　土壤中分解尿素的细菌的分离与计数教学设计(第一课时)

选修1专题2课题2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数

【预习目标】

了解有关选择培养基的基础知识。

【知识梳理】

（一）筛选菌株

1.实验室微生物的筛选原理

2.选择培养基

（1）概念：

（2）作用：加入青霉素的培养基： 不生长， 等真菌能生长。

不加含碳有机物的无碳培养基：分离 型微生物。

（二）统计菌落数目

1.显微镜直接计数

（1）原理：利用特定的 或 ，在 下计算一定容积的样品中微生物的数量。

（2）做法：每一个大方格边长为 1mm ，则每一大方格的面积为1mm2，盖上盖玻片后，载玻片与盖玻片之间的高度为0.1mm，所以计数室的容积为0.1mm3。

（3）优缺点：

优点： 缺点： 2.间接计数（活菌计数法）

（1）原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个 ，来源于样品稀释液中的一个活菌，通过统计平板上的 数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。

（2）计数：

C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(mＬ)，M代表稀释倍数。

计算公式：每克样品中的菌落数＝ （二）实验设计

土壤中分解尿素的细菌的分离与记数步骤：1. ；2. ； 3. ；4. ；5. 。 （三）操作提示

1.无菌操作

（1）取土用的小铁铲的盛土样的信封在使用前都需要 。

（2）应在 旁称取土壤。在 附近将称好的土样倒入锥形瓶中，塞好棉塞。

（3）在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在 旁操作。 2.做好标记

注明培养基种类、培养日期、平板培养样品的稀释度等。

3.规划时间 提高效率，在操作时更加有条不紊。

一、单选题（30分，每题3分）

1.

分离土壤中分解尿素的细菌，对培养基的要求是（

）

①加尿素②不加尿素③加琼脂④不加琼脂⑤加葡萄糖⑥不加葡萄糖⑦加硝酸盐⑧不加硝酸盐

A. ①③⑤⑦

B. ①③⑤⑧ C. ②④⑥⑧

D. ①④⑥⑦

2.

下列有关“土壤中分解尿素的细菌的分离与计数实验”的叙述，正确的是（ ）

A. 分解尿素的细菌能产生脲酶，将尿素分解产生氮气

B. 将实验组和对照组平板倒置，25℃恒温培养24～48小时

C. 统计尿素分解菌的数目时，以菌落数在300以上的平板进行计数

D. 用尿素为唯一氮源、加有酚红指示剂的培养基培养尿素分解菌，指示剂变红

3.可以鉴定出分解尿素的细菌的方法是( ) A．以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂

B．以尿素为唯一氮源的培养基中加入二苯胺试剂

C．以尿素为唯一氮源的培养基中加入苏丹Ⅲ试剂

D．以尿素为唯一氮源的培养基中加入双缩脲试剂

4.下列就“土壤中分解尿素的细菌的分离与计数”实验的有关叙述，不正确的是（ ）

A.经高压蒸汽灭菌的培养基所倒平板和接种后培养时的平板均要倒置

B.同一稀释度下至少要涂布三个平板并且要培养到菌落数稳定时计数

C.在稀释度足够高时，所形成的单个菌落中所有细胞的遗传信息必定相同

D.在相同培养条件下，未接种的培养基表面无菌落生长说明培养基没有被杂菌污染

5.在以尿素作为唯一氮源的培养基上大部分微生物无法生长；在培养基中加入青霉素可以抑制细菌和放线菌；在培养基中加入10%酚可以抑制细菌和霉菌。利用上述选择培养基依次能从混杂的微生物群体中分离出( )

A．乳酸菌、金黄色葡萄球菌、放线菌 B．分解尿素的细菌、大肠杆菌、放线菌

C．分解尿素的细菌、霉菌、放线菌 D．固氮细菌、金黄色葡萄球菌、放线菌

6.欲从土壤中分离出能分解尿素的细菌，下列实验操作中不正确的是（ ）

A．将土壤用无菌水进行一系列的梯度稀释

B．用加入刚果红指示剂的培养基可筛选出分解尿素的细菌

C．同一浓度的土壤稀释液应至少涂布三个平板

D．可将未接种的培养基在相同条件下培养作为空白对照

7.下图为“土壤中分解尿素的细菌的分离和计数”实验中样品稀释示意图。据图分析正确的是（ ）

A．3号试管中的菌落稀释倍数为103倍

B．4号中稀释液进行平板培养得到的菌落平均数恰为5号的10倍

C．5号试管的结果表明每克土壤中的菌株数为1.7×109个

D．该实验方法统计得到的结果往往会比实际活菌数目要高

8.在做分离分解尿素的细菌实验时，A同学从对应106培养基上筛选出大约150个菌落，而其他同学只选择出大约50个菌落。产生A同学结果的原因可能有（ ）

①土样不同 ②培养基污染 ③操作失误 ④没有设置对照

A.①②③ B.②③④ C.①③④ D.①②③④

9.下列关于微生物的分离和培养的叙述中，正确的是( ) A.进行微生物培养前，需对培养瓶进行消毒处理

B.对细菌的分离和计数可用平板划线法和稀释涂布平板法

C.获得纯净培养物的关键是防止杂菌污染

D.用含刚果红的尿素培养基筛选鉴别出能分解尿素的菌株

10. 在做分离分解尿素的细菌实验时，甲同学从对应106倍稀释的培养基上筛选出大约150个菌落，而其他同学只选择出大约50个菌落。甲同学的结果产生原因可能有（ ）

①土样不同②培养基污染③操作失误④没有设置对照

A. ①②③

B. ②③④

C. ①③④

D. ①②④

二、非选择题（30分，每格2分）

11.（14分）在肉牛产业中，常在饲料中加入一定量的尿素，因其有瘤胃，在瘤胃中生活着多种微生物，其中许多微生物以尿素作为唯一氮源。某同学设计了如下实验，对能分解尿素的细菌进行分离和计数。

(1)图中弧线箭头上“?”的具体操作是_______________________________________。 (2)进行培养基配制和灭菌时,灭菌与调节pH的先后顺序是___________________；纯化菌种时为了得到单一菌落,常采用的接种方法是_______________________________。 (3)在以尿素为唯一氮源的培养基中加入_______________。培养后,若出现_________色,说明其中含有能够分解尿素的细菌。 (4)在实验中,当菌落数目稳定时，应选取____________方法计数；研究者每隔24小时统计一次菌落数目,并选取菌落数目稳定时的记录作为结果,这样可以防止___________。

12.（16分）下图是从土壤中筛选产脲酶细菌的过程，回答有关问题：

（1）图中选择培养基应以尿素为唯一____________；鉴别培养基还需添加____________作指示剂，产脲酶细菌在该培养基上生长一段时间后，由于尿素被分解成的____________使培养基的碱性增强，pH升高，其菌落周围的指示剂将变成____________色。

（2）在5个细菌培养基平板上，均接种稀释倍数为105的土壤样品液0.1mL，培养一段时间后，平板上长出的细菌菌落数分别为13、156、462、178和191。该过程采取的接种方法是

____________，每克土壤样品中的细菌数量为____________×108个。

（3）与血细胞计数板计数法相比，此计数方法测得的细菌数较_________，其原因是________________。