课题2　土壤中分解尿素的细菌的分离与计数名师课堂实录

一、教学目的：

1、利用选择培养基分离细菌，运用相关技术解决生产生活中微生物的计数

2、分析研究思路的形成过程，找出共性与差异性

二、教学重点：对土样动物选取和选择培养基的配制

三、教学难点：对分离出的分解尿素细菌的分离

四、教学方法：启发式教学

五、教学工具：多媒体

六、教学过程：

（一）展示评价导学案

1.学生中存在的问题

2、教师强调：

1）

尿素是一种重要的氮肥，农作物不能（能，不能）直接吸收利用，而是首先通过土壤中的细菌将尿素分解为

氨和CO2 ，这是因为细菌能合成

脲酶

。

2）

科学家能从热泉中把耐热细菌筛选出来是因为

热泉的高温条件淘汰了绝大多数微生物

，这样也适用于实验室中微生物的筛选，原理是

人为提供有利于目的菌株生长的条件（包括营养、温度、PH等），同时抑制或阻止其他微生物生长

。

3.）生物适应一定环境，环境对生物具有选择作用。所以通过配制选择培养基、控制培养条件等选择目的微生物。

（二）导引探究：

〖思考1〗在该培养基配方中，为微生物的生长提供碳源的是

葡萄糖

，提供氮源的的是

尿素

，琼脂的作用是

凝固剂

。

〖思考2〗该培养基对微生物

具有

（具有，不具有）选择作用。如果具有，其选择机制是

只有能够以尿素作为氮源的微生物才能在该培养基上生长

。

1.3 在统计菌落数量时，常用来统计活菌数目的方法通常是稀释涂布平板法。除此之外，显微镜直接计数也是测量微生物数量的常用方法。

【补充】显微镜测定微生物的方法

公式：观察到的红细胞数：观察到的细菌平均数=红细胞含量：细菌含量

1.4采用稀释涂布平板法统计菌落数目时，培养基表面生长出的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数，就可以推测出样品中大约含有多少活菌。为了保证结果准确，一般选择菌落数在30~300的平板进行计数。

〖思考3〗从平板中的菌落数推测出1克样品中的细菌数的方法是

（平均菌落数÷涂布的稀释液体积）×稀释倍数

〖思考4〗利用稀释涂布平板法成功统计菌落数目的关键是：恰当的稀释度。

〖思考5〗第二位同学的比较接近真实值。第一位同学需要设置重复实验组

第二位同学统计的三个菌落数相差太大，说明操作有误，需要重新操作。

1.5 统计的菌落数比活菌的实际数目要低。原因是：两个或多个细胞在一起时，平板上观察到的只有一个菌落。因此统计结果一般用菌落数来表示。

1.6设置对照组的目的是排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高结果的可信度。

1.7对照实验室指被测试的条件外，其他条件都相同的实验。满足该条件的是对照组，不满足的该条件的是实验组。

〖思考6〗请设计该实验的对照实验组

方案1：其他同学用A同学的土样进行实验

方案2：A同学用不接种的空白培养基作为对照组

2.实验设计

2.1实验设计的内容包括实验方案，材料用具，实验步骤，实验安排等

2.2实验流程：

配制土壤溶液——系列稀释——涂布平板和培养——菌落计数

2.3 土壤微生物的分布

2.4 分离不同的微生物采用不同的稀释度。原因;不同微生物在土壤中的含量不同，目的是保证获得菌落数在30~300，适于计数的平板。

2.5培养不同微生物，用不同的温度

2.6菌落计数时，每隔24小时统计一次菌落数目。选取菌落数稳定的时候的记录作为结果，以防止培养时间不足而导致遗漏菌落数目。

2.7菌落的特征包括：形状，大小，颜色，隆起程度等

2.8实验过程

1 ）灭菌：小铁铲，信封等

2）称土壤（火焰旁，10克，称好后倒入90毫升无菌水的锥形瓶，盖紧）

3）稀释土壤（在火焰旁完成）

4）做标记（对培养皿：培养基类型，培养时间，稀释度，培养物等）

3.结果分析与评价

3.1对分离的菌种进行鉴定，要用生物化学方法

3.2可通过检测培养基PH的变化与否来判断化学反应是否发生。PH应该变大

3.3在以尿素为唯一氮源的培养基中，加入酚红指示剂。若PH升高，指示剂变红。说明该细菌能分解尿素。

〖思考7〗测定饮水中大肠杆菌数目的方法：将一定体积的水用细菌过滤器过滤后，将滤膜

放在伊红美蓝培养基上培养，大肠杆菌菌落呈现黑色，通过计数得出水样中大肠杆菌的数量。

至少做3个水样

（三）典例检测

（四）课堂总结、点评

1分离筛选微生物的原理——人为条件：利于目的菌株生长，抑制或阻止其他微生物的生长

2 微生物计数方法及原理——稀释涂布平板法，显微镜直接计数法

3 对照设置与重复设置

4 实验设计-实验方案-实验操作-结果分析

（五）反馈提升

以空气中细菌含量为指标，测定教室的不同高度，操场，卫生间等地方的空气质量，写出完整的实验调查方案。

（六）教学反思

本节课可以从尿素在农业上的重要应用切入，介绍能分解尿素的细菌，进而说明这种细菌是能够合成分解尿素的酶。在教学中，可以联系生产生活实际，使学生对尿素及分解尿素的细菌有一定的感性认识。同时通过课题背景的介绍，进行STS教育。对于实验中的对照原则，可以指导学生进行分组讨论，在掌握微生物分离技术的同时巩固实验设计的基本原则。