复习与测试优秀说课稿

考点1 微生物的实验室培养

（复习课）

思考：

1、什么是培养基？含有哪些成分？

2、培养基大致可以分为哪些种类？从哪些方面分？

3、怎样配制培养基？

4、获得纯净培养物的关键是什么？应围绕哪几个方面展开？

5、消毒和灭菌有何区别？常见的方法分别有哪些？

6、纯化大肠杆菌的原理是什么？方法有哪些？

7、有哪些方法可以保存菌种？

一、培养基

1．概念：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出的供其生长繁殖的营养基质

2．营养构成12水、、无机盐、碳源、氮源pH、特殊营养物质以及O2的要求

3．培养基的种类及用途

划分

标准

培养基

的种类

液体培养基

物理性质

固体培养基

半固体培养基

加凝固剂，如琼脂

特点

不加凝固剂

用途

工业生产

观察微生物的运动、鉴定

微生物的分离与鉴定、活菌计数、菌种保藏

含化学成分不明确的天然物质

培养基成分明确(用化学成分已知的化学物质配成) 培养基中加入某种化学物质，选择培养基

以抑制不需要的微生物的生长，促进所需要的微生物的生长

工业生产

化学成分

天然培养基

合成培养基

分类、鉴定

培养、分离出特定微生物(如在培养酵母菌和霉菌时，可在培养基中加入青霉素；在培养金黄色葡萄球菌时，可在培养基中加入高浓度的食盐等) 鉴别不同种类的微生物，如可用伊红—美蓝培养基检测饮用水或乳制品中是否有大肠杆菌(若有，菌落呈深紫色，用途

根据微生物的代谢特点，在培鉴别培养基

养基中加入某种指示剂或化学药品

1

并带有金属光泽) 特别提醒

自养微生物与异养微生物所需的营养物质不同：

①自养微生物所需的碳源、氮源来自含碳、含氮的无机物，而异养微生物需要的碳源、氮源来自含碳、含氮的有机物，因此可根据培养基中营养物质判断微生物的代谢类型。②含氮无机物不但能给自养微生物提供氮源，也能作为能源物质，提供能量，如NH3既作为硝化细菌的氮源也作为能源。

二、无菌技术

1．消毒

特点：使用较为温和的物理或化学方法仅杀死芽孢和孢子 物体表面或内部的部分微生物常用方法：煮沸消毒法、巴氏消毒法、化学药剂消毒法特点：指使用强烈的理化因素杀死物体内外2．灭菌 所有微生物常用方法：灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌3．消毒和灭菌比较

比较

项目

理化因素的

作用强度

消灭微生

物的数量

部分生活状

态的微生物

全部微生物

芽孢和孢子能否被消灭

消毒

灭菌

较为温和

强烈

不能

能

三、微生物的纯化培养及菌种的保藏

1．原理

在培养基上将细菌稀释或分散成单个细胞，使其长成单个的菌落，这个菌落就是一个纯化的细菌菌落。

2．制备固体培养基的流程

计算―→称量―→溶化―→灭菌―→倒平板

3．纯化大肠杆菌的方法

常用的微生物接种方法有平板划线法和稀释涂布平板法。

(1)平板划线法：是通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。

(2)稀释涂布平板法：是将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。

①系列稀释操作 ②涂布平板操作

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(3)两种纯化细菌的方法的比较

项目

平板划线法

稀释涂布平板法

4.培养

接种后的培养皿放入恒温箱内培养

5．菌种保藏

(1)临时保藏操作：采用固体斜面培养基，菌落长成后，放入4 ℃冰箱中保藏，以后每3～6个月，转移一次新的培养基缺点：保存时间不长，菌种易被污染或

产生变异(2)长期保存法：甘油管藏法，放在－20_℃下保存

特别提醒 (1)配制牛肉膏蛋白胨固体培养基的注意事项

①倒平板的适宜温度是50 ℃左右，温度过高会烫手，过低培养基又会凝固。

②平板需倒置，这样既可使培养基表面的水分更好地挥发，又可防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。

(2)平板划线操作的注意事项

①第一次划线及每次划线之前都需要灼烧接种环。

②灼烧接种环，待其冷却后才能伸入菌液，以免温度太高杀死菌种。

③划线时最后一区不要与第一区相连。

④划线用力大小要适当，防止用力过大将培养基划破。

四、应试----对接高考

1、（2019·全国课标卷III，37）回答下列与细菌培养相关的问题。

（1）在细菌培养时，培养基中能同时提供碳源、氮源的成分是__________（填“蛋白胨”、“葡萄糖”或“NaNO 3”）。通常，制备培养基时要根据所培养细菌的不同来调节培养基的pH,其原因是____________________。硝化细菌在没有碳源的培养基上______________（填“能够”或“不能”）生长，原因是________________。

（2）用平板培养细菌时一般需要将平板_____________（填“倒置”或“正置”）。

3 优点

可以观察菌落特征，对混合菌进行分离

可以计数，可以观察菌落特征

缺点

不能计数

吸收量较少，较麻烦，平板不干燥效果不好，容易蔓延

适用范围

适用于好氧菌

适用于厌氧菌和兼性厌氧菌

（3）单个细菌在平板上会形成菌落，研究人员通常可根据菌落的形状、大小、颜色等特征来初步区分不同种的微生物，原因是____________________________________。

（4）有些使用后的培养基在丢弃前需要_________处理，这种处理可以将杀死丢弃物种所有的微生物。

参考答案：（1）蛋白胨

不同细菌生长繁殖所需的最适pH不同

能够

硝化细菌可以利用空气中的CO2作为碳源

（2）倒置

（3）在一定的培养条件下，不同种微生物表现出各自稳定的菌落特征

（4）灭菌

2.(2016·深圳六校联盟模拟)人们使用含三丁基锡、三苯基锡等有机锡化合物的油漆涂于船只、海洋建筑物等的表面，有效防止了海洋生物附着生长，但近年来的研究发现油漆中的有机锡可释放入海，对多种生物造成毒害。现欲从海洋底泥中分离分解三丁基锡的微生物。回答下列问题：

（1)为了获得能降解三丁基锡的微生物菌种，可在被三丁基锡污染的海洋底泥中取样，并应选用以为碳源的培养基进行选择培养。除含有碳源外，培养基还应含有________、________、________、无机盐和蒸馏水等。

(2)实验过程中，玻璃器皿和金属用具可以采用干热灭菌法来灭菌，原因是_________________________________。

(3)常用的微生物接种方法有两种，但只有________________可用于微生物的计数，运用该方法计数的结果往往比实际数目________(填“高”或“低”)。在平板划线操作中，接种环在使用前要先灼烧，其目的是____________________，

第二次及其后的划线都要从上一次划线的末端开始，其目的是____________。

(4)

将获得的3种待选微生物甲、乙、丙分别接种在含少量三丁基锡的相同培养液中培养(培养液中其他营养物质充裕、条件适宜)，观测从实验开始到微生物停止生长所用的时间，甲、乙、丙分别为33小时、15小时、46小时，则应选择微生物________作为菌种进行后续培养。

参考答案：（1）三丁基锡、氮源、琼脂

（2）玻璃器皿和金属用具能耐高温，且要保持干燥 （3）稀释涂布平板法、 低、 使微生物数目能够随着划线次数的增加而逐步减少，以达到分离的效果

（4）乙

3、工厂的污水池含有一种有害的、难以降解的有机化合物A。研究人员用化合物A、磷酸盐以及微量元素配制的培养基，成功筛选到能高效降解化合物A的细菌(目的菌)。实验的主要步骤如下图所示。请分析回答下列问题。

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(1)加入化合物A的培养基属于________培养基。化合物A可为目的菌提供生长所需的________ 等营养物质。若想对初步筛选得到的目的菌进行纯化并计数，可采用的接种方法是____________________________________________________。

(2)微生物培养过程中，防止杂菌污染的关键技术是________，为了排除杂菌污染如何设计对照实验____________________________________________________________________________。

参考答案：

（1）选择、 碳源和氮源、 稀释涂布平板法

（2）无菌技术

（3）用不接种的空白培养基作对照，证明培养基制备是否被杂菌污染

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